基于GC-MS分析接骨木3個品種果實中揮發(fā)油成分△

孫丹丹，姚俊修，劉富裕，王琳，韓子衍，郭慶梅*，吳德軍*

1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟南 250355； 2.山東省林業(yè)科學(xué)研究院，山東 濟南 250014；3.平陰縣環(huán)衛(wèi)綠化中心，山東 濟南 250400

接骨木SambucuswilliamsiiHance是忍冬科(Caprifoliaceae)接骨木屬(Sambucus)落葉灌木或小喬木，又名公道老、接骨丹、大接骨丹、續(xù)骨木、鐵骨散等[1]。接骨木在我國歷史悠久，始載于《新修本草》，資源豐富，分布廣泛，主要分布在東北、河北、山西、陜西、山東、江蘇、安徽、浙江等地[2]。接骨木的根、莖、葉、花、果實均可入藥，具有接骨續(xù)筋、活血祛瘀、祛風(fēng)利濕的功效。目前對接骨木的研究主要集中在根皮、莖、葉、果實的化學(xué)成分和藥理作用方面的研究[3-4]，其化學(xué)成分主要包括黃酮、三萜、酚酸、環(huán)烯醚萜等，具有促進骨折愈合、抗骨質(zhì)疏松、抗炎、抗菌等作用，對接骨木中揮發(fā)油成分的研究較少[5-6]，接骨木籽油具有清除自由基、降血糖、降血脂等生物活性[7]。由于接骨木果實成熟期不一致，不利于果實收集利用，導(dǎo)致落果現(xiàn)象嚴(yán)重，為改善這一問題，研究人員培育出果實成熟期穩(wěn)定的天然紅1號和耐鹽堿新品種，同時耐鹽堿品種能更好地適應(yīng)鹽堿地等土壤環(huán)境，擴大接骨木的栽培范圍。本實驗采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)對接骨木傳統(tǒng)品種和2個新品種的果實揮發(fā)性成分進行鑒定分析，尋找其特征成分，為接骨木揮發(fā)油提取物的品種鑒別提供參考依據(jù)，為充分利用接骨木藥材及相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)利用提供實驗基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 試藥

實驗樣品是由山東省林業(yè)科學(xué)研究院提供的接骨木3個品種藥材，于2017年8月采摘。樣品經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)郭慶梅教授鑒定，均為忍冬科(Caprifoliaceae)接骨木屬(Sambucus)植物接骨木SambucuswilliamsiiHance，見表1。水為蒸餾水，試劑均為分析純。

表1 接骨木樣品鑒定結(jié)果

1.2 儀器

GCMS-QP2010型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(日本島津公司)，色譜柱：DB-5MS石英毛細管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)，F(xiàn)A2004N型電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

2 方法

2.1 揮發(fā)油的提取

將接骨木樣品打粉，過40目篩，分別取約100 g，稱質(zhì)量，加入10倍量的水，參照2015年版《中華人民共和國藥典》(四部)通則2204[8]，利用水蒸氣蒸餾法直火加熱8 h，分離出揮發(fā)油，加無水硫酸鈉干燥后備用。

2.2 GC-MS分析

2.2.1氣相色譜條件 進樣口溫度250 ℃，載氣為高純氦氣(≥99.999%)，傳輸線溫度250 ℃，分流比100∶1，進樣量1 μL，程序升溫(初始溫度60 ℃，保持10 min；以速率3 ℃·min-1升至200 ℃，保持5 min)。

2.2.2質(zhì)譜條件 電離方式為電子轟擊離子源(EI)，電子轟擊能量70 eV，接口溫度200 ℃，離子源溫度200 ℃；ACQ方式：scan；掃描速度：769 Da·s-1；掃描范圍m/z50～400。

3 結(jié)果

揮發(fā)性油含量見表2，耐鹽堿品種揮發(fā)油質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.46%，天然紅1號品種揮發(fā)油質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.47%，青州15號品種揮發(fā)油質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.46%，按照上述分析條件進行測試，得接骨木3個品種果實的揮發(fā)性成分的總離子流圖，見圖1～3；鑒定結(jié)果見表3。從耐鹽堿品種果實共分離出32個化合物，鑒定出30個化合物；從天然紅1號品種果實共分離出62個化合物，鑒定出34個化合物；從青州15號品種果實共分離出26個化合物，鑒定出24個化合物。

表2 接骨木3個品種藥材果實的揮發(fā)油GC-MS分析結(jié)果

續(xù)表2

續(xù)表2

續(xù)表2

注：—表示不含有此成分。

圖1 耐鹽堿品種果實揮發(fā)油GC-MS總離子流圖

圖2 天然紅1號品種果實揮發(fā)油GC-MS總離子流圖

圖3 青州15號品種果實揮發(fā)油GC-MS總離子流圖

4 小結(jié)與討論

耐鹽堿品種果實中揮發(fā)油的主要成分為棕櫚酸乙酯(44.72%)、油酸乙酯(26.71%)、棕櫚酸甲酯(4.71%)，現(xiàn)已鑒定的化合物占總成分的93.8%。天然紅1號品種果實的揮發(fā)油主要成分為(+)-10-乙酰甲基-3-蒈烯(26.11%)、棕櫚酸乙酯(13.40%)、6，10，14-三甲基-2-十五碳酮(9.47%)，許多含量高的揮發(fā)性化合物尚未鑒定出，現(xiàn)已鑒定的化合物占總成分的54.8%。青州15號品種果實的揮發(fā)油主要成分為反式-2，4-二甲基噻吩(38.66%)，2-(2-甲基丙基)-3，5-二(1-甲基乙基)吡啶(37.84%)，現(xiàn)已鑒定的化合物占總成分的92.3%。接骨木3個品種的果實中揮發(fā)油化學(xué)成分豐富，棕櫚酸乙酯可用作軟化劑、潤滑劑；油酸乙酯主要用于潤滑劑、抗水劑、樹脂韌化劑的藥用輔料，也用作香料；接骨木揮發(fā)油化學(xué)成分豐富，有待于開發(fā)其潛在的藥理價值。

接骨木資源豐富，種類很多，全世界約有20種接骨木，有6種分布在我國，其中野生接骨木有5種，引種1種栽培品種。常見的接骨木屬包括：接骨木SambucuswilliamsiiH.、陸英(接骨草)SambucuschinensisL.、西伯利亞接骨木Sambucussibirica N.、毛接骨木Sambucuswilliamsiivar. miquelii (Nakai) Y. C. Tang、血滿草SambucusadnataW.及西洋接骨木Sambucusnigra L.等[9]。實驗結(jié)果表明，不同品種的接骨木果實中所含揮發(fā)油種類差異較大，耐鹽堿品種和青州15號品種中揮發(fā)油種類相同的有8種，與天然紅1號品種有3種相同，天然紅1號品種和青州15號品種有1種相同的揮發(fā)油。耐鹽堿品種果實有21個特有成分，天然紅1號品種果實有32個特有成分，青州15號品種果實有16個特有成分，為接骨木的品種鑒別提供了參考依據(jù)。耐鹽堿品種中多為小分子量的揮發(fā)油成分，可能與其抗鹽堿作用相關(guān)。