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    日本沼蝦養(yǎng)殖過程中氨基脲存在特征研究

    2020-06-09 06:21:42舒秀君徐娟娟熊貽偉蔣速飛
    淡水漁業(yè) 2020年3期
    關(guān)鍵詞:甲殼沼蝦中總

    舒秀君,程 波,徐娟娟,熊貽偉,宋 蓓,宋 懌,韓 剛,蔣速飛

    (1.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院,上海 201306;2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)研究中心,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部水產(chǎn)品質(zhì)量安全控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100141; 3.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心,江蘇無錫 214081)

    日本沼蝦(Macrobrachiumnipponense)又名青蝦或河蝦,隸屬十足目(Decapoda)長臂蝦科(Palaemonidae)沼蝦屬(Macrobrachium)。在我國,日本沼蝦廣泛分布于江河、湖泊、池塘、河溝中,是我國淡水經(jīng)濟(jì)蝦中的主要種類之一。隨著日本沼蝦在我國養(yǎng)殖和消費(fèi)數(shù)量的增加,其產(chǎn)品的安全性也受到更多關(guān)注[1]。

    氨基脲(Semicarbazide,SEM)是禁用藥物呋喃西林的主要代謝產(chǎn)物之一[2]。目前,國內(nèi)外均以檢測SEM判斷是否在養(yǎng)殖過程中非法使用呋喃西林,其中,歐盟和我國將動(dòng)物源性食品中SEM殘留的限量標(biāo)準(zhǔn)定為1.0 μg/kg[3,4]。研究表明,SEM來源廣泛[2,5-11],且SEM可能是甲殼類水產(chǎn)品中的內(nèi)源性物質(zhì)[12-16],以SEM作為判定甲殼類水產(chǎn)品是否非法使用呋喃西林藥物的監(jiān)測指標(biāo)并不合適[1,2,14-15,17-19]。有關(guān)甲殼類水產(chǎn)品中SEM的本底含量已有相關(guān)研究[1-2,4,18],但大多限于個(gè)別樣品普查,且僅限于甲殼和肌肉2種組織[2,10-11,14-15],而養(yǎng)殖生長過程中甲殼類動(dòng)物體內(nèi)SEM的存在特征、動(dòng)態(tài)變化過程鮮有報(bào)道,養(yǎng)殖產(chǎn)品中SEM的科學(xué)監(jiān)管依據(jù)不足。因此,本實(shí)驗(yàn)以日本沼蝦作為研究對象,測定池塘養(yǎng)殖日本沼蝦不同生長時(shí)期SEM的存在特征與變化規(guī)律,以期為甲殼類水產(chǎn)品SEM限量標(biāo)準(zhǔn)的修訂和產(chǎn)地水產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督抽查的科學(xué)實(shí)施提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、養(yǎng)殖條件與管理

    實(shí)驗(yàn)于2018年7-9月在中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心大浦基地進(jìn)行。隨機(jī)選定其中一個(gè)池塘(面積32 000 m2,水深1.2 m),2017年底在該池塘投放日本沼蝦“太湖1號”親蝦,2018年5月開始自然繁殖并孵化出蚤狀幼體,隨后在池塘中自然生長。生產(chǎn)管理上,5月份蚤狀幼體階段主要采用潑灑豆?jié){等肥水方法培養(yǎng)輪蟲等天然餌料;6月份大部分蚤狀幼體變態(tài)為幼蝦時(shí),開始投喂日本沼蝦0號顆粒飼料(南通正大),每日2次;隨著日本沼蝦的生長,8月份改投喂日本沼蝦1號顆粒飼料(江蘇冠乾),每日2次,養(yǎng)殖過程持續(xù)到9月底。養(yǎng)殖生產(chǎn)期間,不使用任何含呋喃西林成分藥品。

    1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

    考慮日本沼蝦組織取樣的可行性,本研究以日本沼蝦約達(dá)稚蝦規(guī)格階段開始作為起始點(diǎn),將2018年7月1日采集的第一批日本沼蝦定義為本研究初始,即0 d樣品,陸續(xù)從養(yǎng)殖池塘每隔10 d拖網(wǎng)采集一次日本沼蝦,依次類推定義為10、20、30、40、50、60、70 、80 d樣品,樣品采集過程覆蓋日本沼蝦幼蝦至成蝦的主要養(yǎng)殖生長階段。每次采集約1 kg日本沼蝦,共采集9個(gè)批次。樣品采集后,在冷藏條件下6 h內(nèi)運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室,并于當(dāng)天隨機(jī)選擇30尾進(jìn)行體長和體重測量。

    所有樣品用純水沖洗干凈后進(jìn)行解剖,分別采集不同組織,其中前4次日本沼蝦樣品(即0~30 d)因個(gè)體較小,僅采集肌肉、甲殼和頭胸部3種組織,后4次日本沼蝦樣品(即40~80 d)分別采集肌肉、甲殼、附肢、肝胰腺、鰓和眼柄6種組織。所采集的肌肉、甲殼、附肢和頭胸部樣品用粉碎機(jī)(九陽 JYL-C010)充分破碎,肝胰腺和鰓樣品置于離心管中用剪刀充分剪碎,眼柄樣品用研缽充分磨碎,分別制成均質(zhì)樣品后,在-20 ℃冷凍條件下保存待測。

    1.3 SEM的測定

    樣品中SEM的測定采用參照農(nóng)業(yè)部783號公告-1-2006《水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》優(yōu)化后的方法[20],進(jìn)行總SEM(游離態(tài)SEM和結(jié)合態(tài)SEM之和)和游離態(tài)SEM的含量測定。每個(gè)樣品做3個(gè)平行樣。池塘水體和養(yǎng)殖飼料經(jīng)檢測,均不含SEM成分。

    1.4 方法檢出限與質(zhì)量控制

    通過加標(biāo)回收的方式,進(jìn)行質(zhì)量控制。根據(jù)SEM在日本沼蝦各組織中的本底含量,添加水平為1.0~120 μg/kg。各組織中總SEM和游離SEM回收率在74.3%~113.5%之間,方法檢出限為0.25 μg/kg(S/N≥3),定量限為0.5 μg/kg(S/N≥10)。

    1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同生長時(shí)期日本沼蝦的體重和體長

    實(shí)驗(yàn)期間日本沼蝦的平均體重和體長情況如圖1所示。實(shí)驗(yàn)開始時(shí),日本沼蝦平均體重為(0.41±0.19)g,體長為(3.31±0.59)cm,隨著養(yǎng)殖過程進(jìn)行,體重和體長整體呈現(xiàn)增長趨勢,且在第3~6次采樣期間生長速度最快。實(shí)驗(yàn)后期,生長速度相對放緩。在最后一次采樣時(shí),日本沼蝦的平均體重為(2.16±0.66)g,體長為(6.00±0.52)cm。

    圖1 實(shí)驗(yàn)期間日本沼蝦體重和體長變化情況Fig.1 Variations of mean body weigth and mean body length of M.nipponense during the experiment

    2.2 不同生長時(shí)期日本沼蝦各組織中總SEM含量水平及分布特征分析

    不同生長時(shí)期日本沼蝦各組織中總SEM含量結(jié)果見表1。由表1可見,日本沼蝦在80 d養(yǎng)殖不同采樣時(shí)期內(nèi),肌肉中均存在總SEM,含量范圍為(6.88±0.15)~(17.11±0.62)μg/kg。隨著生長過程進(jìn)行,肌肉中總SEM含量逐漸降低,從初始最高值(17.11±0.62)μg/kg降低至70 d時(shí)最低值(6.88±0.15)μg/kg,在第80 d含量略有回升。甲殼中均存在總SEM,含量范圍為(107.30±1.10)~(306.09±8.69)μg/kg。隨著生長過程進(jìn)行,甲殼中總SEM含量呈現(xiàn)總體上升局部下降的變化趨勢,實(shí)驗(yàn)前10 d內(nèi)降低至最低值(107.30±1.10)μg/kg,隨后逐漸升高,在第30 d波動(dòng)較大,40~80 d持續(xù)上升并在80 d達(dá)最大值。實(shí)驗(yàn)期間前30 d內(nèi)頭胸部中均存在總SEM,含量范圍為(100.29±1.21)~(116.15±2.67)μg/kg,波動(dòng)幅度較小。第40~80 d內(nèi),附肢、眼柄、鰓和肝胰腺中均存在總SEM,其中,附肢中含量范圍為(243.90±8.55)~(532.31±26.27)μg/kg,隨著養(yǎng)殖過程進(jìn)行,含量逐漸增加并在80/表示無樣品。

    表1 不同生長時(shí)期日本沼蝦中總SEM的含量水平Tab.1 Concentration of total SEM in M.nipponense of different growth stages

    d達(dá)最大值;眼柄中含量范圍為(85.27±3.19)~(122.82±2.60)μg/kg,隨著養(yǎng)殖過程進(jìn)行,含量呈現(xiàn)整體增加局部波動(dòng)的變化趨勢;鰓中含量范圍為(48.43±2.13)~(85.60±1.33)μg/kg,隨著養(yǎng)殖過程的進(jìn)行,含量在第60 d時(shí)小幅增加,70 d時(shí)明顯下降并達(dá)到最小值,80 d時(shí)又明顯上升并達(dá)最大值;肝胰腺中含量范圍為(13.51±1.15)~(25.94 ±1.78)μg/kg,隨著養(yǎng)殖過程進(jìn)行,在40~60 d期間肝胰腺中總SEM含量逐漸增加,在70 d時(shí)下降并達(dá)到最小值,80 d時(shí)又明顯增加。

    由表1可知,在0~30 d內(nèi),甲殼、頭胸部和肌肉中總SEM的平均含量分別為(174.04±57.04)、(109.86±6.68)和(15.56±1.79)μg/kg,日本沼蝦幼蝦各組織中總SEM呈現(xiàn):甲殼>頭胸部>肌肉的含量分布特征。在40~80 d內(nèi),附肢、甲殼、眼柄、鰓、肝胰腺和肌肉中總SEM的平均含量分別為(377.16±102.09)、(249.36±42.56)、(97.03±14.18)、(59.86±14.66)、(20.39±4.87)和(9.67±1.58)μg/kg,日本沼蝦成蝦各組織中總SEM呈現(xiàn):附肢>甲殼>眼柄>鰓>肝胰腺>肌肉的含量分布特征。

    2.3 日本沼蝦各組織中SEM的存在形態(tài)

    如圖2所示,不同生長時(shí)期日本沼蝦肌肉和肝胰腺中SEM主要以游離態(tài)形式存在,游離態(tài)SEM在肌肉中所占比例為45.84%~83.51%,在肝胰腺中所占比例為56.99%~92.47%。甲殼、眼柄、附肢、頭胸部和鰓等組織中SEM主要以結(jié)合態(tài)形式存在,結(jié)合態(tài)SEM在甲殼中所占比例為85.01%~92.79%;在眼柄中所占比例為85.36%~90.34%;在附肢中所占比 例為83.55%~89.79%;在頭胸部中所占比例為75.46%~88.40%;在鰓中所占比例為68.01%~78.29%。

    圖2 不同生長時(shí)期養(yǎng)殖日本沼蝦各組織的SEM形態(tài)組成Fig.2 SEM composition of tissues of cultured M.nipponense from different growth stages

    3 討論

    3.1 不同生長時(shí)期日本沼蝦中SEM的含量水平及其變化特征

    水產(chǎn)品中SEM殘留通常認(rèn)為是在養(yǎng)殖過程中非法使用呋喃西林后代謝產(chǎn)生。本研究結(jié)果顯示,養(yǎng)殖過程不同時(shí)期日本沼蝦中均檢出SEM,且含量均超過我國限量要求(1.0 μg/kg)。養(yǎng)殖過程中無人為使用硝基呋喃類禁用藥物的行為,池塘水體和所用飼料經(jīng)檢測均不含SEM成分,但日本沼蝦中SEM含量超標(biāo),這與前人研究結(jié)果一致[2,4,14-15,18,20]。

    本研究中日本沼蝦肌肉、甲殼和頭胸部總SEM的含量范圍與于慧娟等[2]和Hui等[1]研究結(jié)果一致,但與王鼎南等[4]和宋蓓等[20]結(jié)果有所差異,可能與不同研究所采集樣本處于不同生長時(shí)期有關(guān)。日本沼蝦在養(yǎng)殖過程中具有不斷繁殖的生物學(xué)特性,在不同時(shí)間點(diǎn)采樣,采集到不同批次孵化日本沼蝦的可能性較大,從而對實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在一定影響。隨著養(yǎng)殖過程的進(jìn)行,日本沼蝦各組織中總SEM含量變化無明顯規(guī)律。其中,肌肉中總SEM含量逐漸降低,且在20~50 d之間降低速度最快,可能與日本沼蝦肌肉生長有關(guān)。在此期間日本沼蝦體重增長最快,而體重增長最主要貢獻(xiàn)來自于肌肉增長,導(dǎo)致SEM含量被“稀釋”而降低。甲殼中總SEM含量逐漸增加,并在40 d時(shí)明顯降低,這可能與日本沼蝦蛻皮過程有關(guān)。在此期間日本沼蝦體重和體長增長最快,而日本沼蝦的生長必然伴隨蛻皮過程,但甲殼中SEM是否會(huì)隨著蛻皮而排出體外,或SEM在蛻皮過程中是否發(fā)揮了某種生物學(xué)作用,值得進(jìn)一步研究。附肢中總SEM含量在實(shí)驗(yàn)40~80 d期間變化規(guī)律與甲殼中變化規(guī)律較為一致,可能與附肢主要由甲殼和肌肉組成,而甲殼中含量遠(yuǎn)高于肌肉,因此,甲殼中SEM含量變化特征主導(dǎo)了附肢中SEM含量變化的結(jié)果。

    3.2 不同生長時(shí)期養(yǎng)殖日本沼蝦中SEM的含量分布特征與存在形態(tài)

    在實(shí)驗(yàn)0~30 d內(nèi),養(yǎng)殖日本沼蝦幼蝦各組織中總SEM呈現(xiàn):甲殼>頭胸部>肌肉的含量分布特征,這與Hui等[1]的研究結(jié)果一致。在實(shí)驗(yàn)40~80 d內(nèi),養(yǎng)殖日本沼蝦成蝦各組織中總SEM呈現(xiàn):附肢>甲殼>眼柄>鰓>肝胰腺>肌肉的含量分布特征,附肢中總SEM平均含量最高,這與課題組前期探索研究不一致[20]。按照結(jié)構(gòu)組成,附肢主要由甲殼和肌肉等組成,總SEM在附肢中的含量應(yīng)介于甲殼和肌肉之間,為何附肢中含量最高,有待進(jìn)一步深入研究。彭婕等[21]對中華絨螯蟹不同組織中SEM進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)除蟹殼外,肌肉、肝胰腺、鰓及性腺中均無SEM檢出。于慧娟等[2]對三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)、鋸緣青蟹(Scyllaserrata)、珍寶蟹(DungenessCrab)、中國鱟(Tachypleustridentatus)等甲殼類動(dòng)物的研究中,也僅在甲殼中檢測出不同含量SEM成分??梢?,SEM在不同甲殼動(dòng)物中分布特征不同,但甲殼均是SEM存在與含量較高的組織。

    在形態(tài)組成上,SEM在日本沼蝦肌肉和肝胰腺中主要以游離態(tài)形式存在,游離態(tài)SEM所占平均比例分別為67.35%和72.40%,在甲殼、眼柄、附肢、頭胸部和鰓中主要以結(jié)合態(tài)形式存在,結(jié)合態(tài)SEM所占平均比例分別為89.50%、87.16%、85.68%、80.48%和73.30%。肌肉和甲殼中SEM的存在形態(tài)與王鼎南等[4]和Christof等[14]的研究結(jié)果一致,而眼柄、附肢、頭胸部和鰓等組織,此為第一次報(bào)道,缺乏可比較研究。另外,由于日本沼蝦肌肉中SEM含量相較其他組織含量最低,且主要以游離態(tài)形式存在,本研究選擇了前期研究[20]優(yōu)化的SEM檢測方法,通過測量含量相對較高的游離態(tài)SEM方法,而非直接檢測含量處于檢測限的結(jié)合態(tài)SEM,從而進(jìn)行SEM形態(tài)分析,最大程度避免了因檢測含量低導(dǎo)致檢測誤差或檢不出的問題。

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