‘黑虎香’葡萄離體快繁技術(shù)研究

王婷 肖慧琳 唐美玲 盧建聲 劉萬(wàn)好 鄭秋玲 劉珅坤 張超杰* 譚洋洋

(1山東省煙臺(tái)市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，煙臺(tái) 265500；2蓬萊國(guó)賓葡萄酒莊有限公司，蓬萊 265600）

‘黑虎香’葡萄別名紫殼園、藥香，歐美雜種，漿果著生緊，粒小，具草莓香味。植株生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，萌芽率高，抗病性與適應(yīng)性均強(qiáng)，鮮食、制汁兩用品種[1]。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)于葡萄再生體系建立工作已取得了較大的進(jìn)展，許多鮮食葡萄品種、砧木都已獲得組培苗[2-5]，并且許多研究以組培苗為試驗(yàn)材料進(jìn)行植物生理、生化方面的研究[2-3]。本試驗(yàn)通過(guò)探索啟動(dòng)培養(yǎng)、生根培養(yǎng)環(huán)節(jié)的關(guān)鍵技術(shù)，初步建立‘黑虎香’葡萄離體快繁體系，使其種質(zhì)資源得到保存與繁殖。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料采集自山東省煙臺(tái)市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院葡萄資源圃。

1.2 試驗(yàn)方法

5月份采集溫室內(nèi)萌發(fā)的‘黑虎香’新梢，帶回試驗(yàn)室消毒。剪取單芽莖段，置于75%的酒精中消毒15 s，然后用0.1%的HgCl2（升汞）消毒 8 min、10 min、12 min，用無(wú)菌水沖洗干凈，接種到9種啟動(dòng)培養(yǎng)基上（WPM、GS和MS三種基本培養(yǎng)基，分別添加 2.0 mg/L、1.0 mg/L、0.5 mg/L的6-BA，同時(shí)添加0.2 mg/L的IBA），20 d后統(tǒng)計(jì)不定芽形成率和不定芽生長(zhǎng)情況，從中篩選出適宜的啟動(dòng)培養(yǎng)基。待初代苗生長(zhǎng)至高2 cm以上時(shí)，將不定芽移至3種生根培養(yǎng)基中。3 種培養(yǎng)基配方為，T1:1/2MS+IBA（0.2mg/L）；T2:1/2MS+IBA（0.2 mg/L）+KT(0.5 mg/L)；T3:1/2MS+IBA（0.2 mg/L）+KT(1.0 mg/L)。 45 d 后統(tǒng)計(jì)調(diào)查組培苗的苗高、增殖倍數(shù)和生根情況，從中篩選出適宜增殖生根的培養(yǎng)基配方。

2 結(jié)果與分析

2.3 不同培養(yǎng)基與激素配比對(duì)‘黑虎香’葡萄芽誘導(dǎo)的影響

表1 不同配方的啟動(dòng)培養(yǎng)基對(duì)‘黑虎香’葡萄不定芽再生的影響

5 6 GS GS 1 2 14 20 12 18 75.0 87.5葉色淡綠，生長(zhǎng)勢(shì)弱。葉色淡綠，生長(zhǎng)勢(shì)弱。7 MS 0.5 18 14 77.8 長(zhǎng)勢(shì)不整齊，部分芽隨生長(zhǎng)逐漸褐化、死亡。8 MS 1 15 9 60.0 生長(zhǎng)健壯，多數(shù)芽生長(zhǎng)后期褐化、死亡。9 MS 2 10 4 45.0 隨著生長(zhǎng)，許多芽褐化、死亡，存活的芽生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)。

由表1可知，WPM基本培養(yǎng)基的不定芽萌芽率最高，都在90%以上。其次是GS培養(yǎng)基，萌芽率為72.2%～87.5%，MS培養(yǎng)基總體上不定芽形成率最低，為45%～77.8%。多數(shù)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)的不定芽生長(zhǎng)勢(shì)弱，葉色淡綠，且隨生長(zhǎng)不定芽褐化嚴(yán)重，只有1、8、9培養(yǎng)基上的不定芽生長(zhǎng)旺盛，而8和9培養(yǎng)基上的不定芽生長(zhǎng)后期出現(xiàn)褐化并逐漸死亡。綜合比較，配方1，即WPM+6-BA(0.5 mg/L)+IBA（0.2 mg/L）為‘黑虎香’最適宜的啟動(dòng)培養(yǎng)基。

表2 不同濃度激素配比培養(yǎng)基對(duì)‘黑虎香’增殖與根系生長(zhǎng)的影響

由表2可知，3種培養(yǎng)基都能使‘黑虎香’莖段增殖生根。T1和T3培養(yǎng)基中的根系萌發(fā)較晚，且根系萌發(fā)過(guò)程中產(chǎn)生大塊的愈傷組織。T2培養(yǎng)基中的根系萌發(fā)早，且無(wú)大塊愈傷組織形成，根系生長(zhǎng)快速，須根多，根系發(fā)達(dá)。3種培養(yǎng)基中T1的增殖倍數(shù)最低，T2增殖倍數(shù)最高（為2.44），且T2培養(yǎng)基中的組培苗45 d后平均苗高3.38 cm。因此，T2：1/2MS+IBA（0.2 mg/L）+KT(0.5 mg/L）為最適宜‘黑虎香’增殖生根的培養(yǎng)基配方。

3 結(jié)論

培養(yǎng)基與激素種類(lèi)、濃度共同影響著不定芽的再生，對(duì)某一特定的基因型來(lái)說(shuō)，不定芽的再生依賴(lài)于細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的種類(lèi)及比值[4]。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)不同植物的敏感性不同，因此植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的選擇應(yīng)因植物基因型而異[5-6]。通過(guò)試驗(yàn)確定了‘黑虎香’葡萄的最適啟動(dòng)培養(yǎng)基為WPM+6-BA(0.5mg/L)+IBA（0.2 mg/L），增殖生根的最適宜培養(yǎng)基：1/2MS+IBA(0.2 mg/L)+KT(0.5 mg/L)。