反復(fù)上呼吸道感染患兒血清25羥維生素D3與LL-37及Ig水平的相關(guān)性

段訓(xùn)新 石玉英 黃龍 梁曉君 胡志堅

摘要：目的? 探究反復(fù)上呼吸道感染患兒血清25羥維生素D3與LL-37及Ig水平的相關(guān)性。方法? 選擇2015年1月～2018年12月來我院就診的反復(fù)上呼吸道感染患兒68例設(shè)為復(fù)發(fā)組，初次就診的上呼吸道感染患兒60例設(shè)為初發(fā)組，另選取同期來我院體檢的健康兒童56例設(shè)為對照組。采用化學(xué)發(fā)光法檢測外周血血清中25羥維生素D3，用速率散射比濁法測定IgA、IgM、IgG水平，酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）檢測痰上清液抗菌肽LL-37水平，并進行相關(guān)性分析。結(jié)果? 初發(fā)組和復(fù)發(fā)組外周血25羥維生素D3、IgA、IgM、IgG的水平均低于對照組（P<0.05），復(fù)發(fā)組外周血25羥維生素D3、IgA、IgM、IgG的水平低于初發(fā)組（P<0.05），復(fù)發(fā)組LL-37的水平低于初發(fā)組（P<0.05），反復(fù)上呼吸道感染患兒外周血25羥維生素D3與痰上清液LL-37、外周血IgA、IgM、IgG水平呈正相關(guān)（r=0.594、0.682、0.543、0.621，P<0.05）。結(jié)論? 血清25羥維生素D3與LL-37及免疫球蛋白與兒童反復(fù)上呼吸道感染具有一定的相關(guān)性，可能三者共同促進反復(fù)呼吸道感染的發(fā)生。

關(guān)鍵詞：反復(fù)上呼吸道感染;血清25羥維生素D3;LL-37;免疫球蛋白

中圖分類號：R725.6? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標(biāo)識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.09.054

文章編號：1006-1959（2020）09-0162-03

Correlation of Serum Vitamin D3 with LL-37 and Ig Levels in Children

with Repeated Upper Respiratory Tract Infections

DUAN Xun-xin，SHI Yu-ying，HUANG Long，LIANG Xiao-jun，HU Zhi-jian

（Department of Laboratory Medicine，the Affiliated Hospital of Jiujiang University，Jiujiang 332000，Jiangxi，China）

Abstract：Objective? To explore the correlation between serum 25-hydroxyvitamin D3， LL-37 and Ig levels in children with repeated upper respiratory tract infections.Methods? 68 patients with recurrent upper respiratory tract infection who came to our hospital from January 2015 to December 2018 were selected as the relapse group， and 60 patients with upper respiratory tract infection who initially visited the hospital were set as the initial group. Fifty-six healthy children with physical examination were set as the control group. Chemiluminescence method was used to detect 25-hydroxyvitamin D3 in peripheral blood serum. IgA， IgM and IgG levels were determined by rate-scattering turbidimetry， and the level of antibacterial peptide LL-37 in sputum supernatant was detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA），and conduct correlation analysis.Results? The levels of peripheral blood 25-hydroxyvitamin D3， IgA， IgM， and IgG in the initial group and relapse group were lower than those in the control group （P<0.05）， and the levels of peripheral blood 25-hydroxyvitamin D3， IgA， IgM， and IgG in the recurrent group were lower than the initial group（P<0.05）;The level of LL-37 in the relapse group was lower than that in the initial group （P<0.05）. Peripheral blood 25-hydroxyvitamin D3 in children with repeated upper respiratory tract infection was positively correlated with sputum supernatant LL-37， peripheral blood IgA， IgM， IgG levels（r=0.594、0.682、0.543、0.621，P<0.05）.Conclusion? Serum vitamin D3， LL-37 and immunoglobulin have a certain correlation with children's repeated upper respiratory tract infections， and the three may jointly promote the occurrence of repeated respiratory tract infections.

Key words：Repeated upper respiratory tract infections;Serum vitamin D3;LL-37;Immunoglobulin

反復(fù)上呼吸道感染（repeated upper respiratory tract infections，RURTI）是兒科的常見呼吸系統(tǒng)疾病之一，發(fā)病率高達20%以上[1]，病程漫長，遷延不愈，可嚴(yán)重影響患兒的生長發(fā)育和身心健康，生存質(zhì)量顯著降低[2]。而免疫功能缺損被認(rèn)為是引起上呼吸道感染反復(fù)發(fā)作的主要原因之一[3]。有研究表明[4]，維生素D對人體免疫起重要作用，抗菌肽LL-37是固有免疫的重要效應(yīng)分子之一[5]，25羥維生素D3可通過其受體調(diào)節(jié)固有免疫，并促進抗菌肽LL-37的表達，增強機體的抗感染能力[6]。為了進一步探討反復(fù)呼吸道感染患兒與25羥維生素D3、LL-3及免疫球蛋白的關(guān)系，本研究分析反復(fù)上呼吸道感染患兒血中25羥維生素D3、LL-37和免疫球蛋白水平變化，并分析25羥維生素D3與LL-37、免疫球蛋白水平之間的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年1月～2018年12月九江學(xué)院附屬醫(yī)院兒科收治的RURTI患兒68例設(shè)為復(fù)發(fā)組，診斷均符合2008年中國醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會制訂的標(biāo)準(zhǔn)，其中男38例，女30例，平均年齡（3.92±1.03）歲;選取初次就診的上呼吸道感染患兒60例為初發(fā)組，其中男36例，女24例，平均年齡（3.37±1.32）歲;另外選取同一時間段健康體檢的兒童56例設(shè)為對照組，其中男34例，女22例，平均年齡（3.67±1.14）歲。研究對象均排除使用腎上腺皮質(zhì)激素、免疫調(diào)節(jié)劑及維生素D制劑等藥物，有心血管疾病、嚴(yán)重肝腎功能不全、免疫功能缺陷等疾病，且在3 d內(nèi)未進行任何干預(yù)治療。本研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患兒家長同意，并簽署知情同意書。三組年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1血清25羥維生素D3和免疫球蛋白水平測定? 所有受試者均于清晨坐位采肘靜脈血5 ml，室溫下放置20～40 min后，3000 r/min 離心10 min，離心分離血清并轉(zhuǎn)至EP管中，-70℃保存?zhèn)錂z。采用德國羅氏Cobase601電化學(xué)發(fā)光儀及配套試劑盒檢測血清25羥維生素D3，采用美國貝克曼IMMAGE800及配套試劑盒測定IgA、IgM、IgG水平。

1.2.2抗菌肽LL-37水平測定 初發(fā)組和復(fù)發(fā)組上呼吸道感染患兒用4%氯化鈉溶液霧化吸入? ? ? ? 10 min，痰液收集于無菌容器中，加入4倍體積的0.1%二硫蘇糖醇（DTT），置于37℃水浴箱5 min，吹打致黏液完全溶解，3000 r/min 離心5 min，上清液置于-70℃保存。采用ELISA檢測人抗菌肽LL-37水平，人抗菌肽ELISA試劑盒購于上海佳和生物科技有限公司。

1.3判斷標(biāo)準(zhǔn)[7]? 維生素D缺乏：<50.0 nmol/L;維生素D不足：50.0～75.0 nmol/L;維生素D充足：75.0～250.0 nmol/L[7]。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料用（x±s）表示，兩組間比較采用兩獨立樣本t檢驗，計數(shù)資料使用[n（%）]表示，比較采用？字2檢驗，相關(guān)分析應(yīng)用Pearson相關(guān)系數(shù)法，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三組25羥維生素D3、免疫球蛋白及LL-37水平比較? 復(fù)發(fā)組外周血25羥維生素D3、IgA、IgM、IgG的水平均低于對照組，復(fù)發(fā)組LL-37水平低于初發(fā)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2三組維生素D水平分布情況? 對照組存在一定比例的維生素不足及缺乏，但初發(fā)組和復(fù)發(fā)組維生素D缺乏率高于對照組，復(fù)發(fā)組全部為維生素D的缺乏，見表2。

2.3反復(fù)上呼吸道感染患兒25羥維生素D3與免疫球蛋白及LL-37的相關(guān)性? 經(jīng)Pearson分析反復(fù)呼吸道感染患兒外周血25羥維生素D3與免疫球蛋白IgA、IgM、IgG及LL-37的水平均呈正相關(guān)（r=0.682、0.543、0.621、0.594，P<0.05）。

3討論

反復(fù)上呼吸道感染是小兒常見病，冬春季發(fā)病為主，導(dǎo)致兒童上呼吸道感染反復(fù)發(fā)作的原因是多方面的，常見原因有支氣管哮喘、營養(yǎng)不良、免疫異常、病毒感染及慢性疾病等[8]，其主要病因與兒童自身的機體生理及免疫功能發(fā)育水平密切相關(guān)[3]。從兒童的生理結(jié)構(gòu)特點來看，兒童上呼吸道氣道狹窄，含氣量少，肺彈力纖維不足，機體呼吸系統(tǒng)尚處于發(fā)育狀態(tài)，功能薄弱[9]，且兒童黏膜淋巴血管較為豐富，組織嬌嫩、柔軟，對外界刺激較為敏感，缺乏抵抗力[10]。血清25羥維生素D3是維生素D在體內(nèi)的主要存在形式，其是一種免疫調(diào)節(jié)激素，研究證實，其具有增強機體抵抗力的作用，當(dāng)血清25羥維生素D3缺乏時，可為細(xì)菌人侵機體定值、增殖提供機會，增加呼吸道感染的風(fēng)險，近年有學(xué)者報道呼吸道反復(fù)感染與維生素D缺乏有明顯相關(guān)性[11]。此外，Belderbos ME等[12]研究也發(fā)現(xiàn)，新生兒25羥維生素D3缺乏明顯增加上呼吸道感染次數(shù)和風(fēng)險。

本研究中對照組具有一定比例的維生素D不足及缺乏，說明兒童應(yīng)加強維生素D的補充，但初發(fā)組和復(fù)發(fā)組上呼吸道感染患兒的維生素D缺乏率高于對照組，復(fù)發(fā)組維生素D的缺乏率達100.00%。復(fù)發(fā)組和初發(fā)組上呼吸道感染患兒外周血清25羥維生素D3水平低于對照組，復(fù)發(fā)組上呼吸道感染患兒外周25羥維生素D3水平低于初發(fā)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），表明血清25羥維生素D3缺乏可能與患兒反復(fù)呼吸道感染有關(guān)。

抗菌肽LL-37是Cathelicidin家族的成員之? 一[13]，是人體先天免疫系統(tǒng)的組成部分，可以直接參與調(diào)節(jié)機體炎癥的發(fā)生、發(fā)展，在機體的防御功能中扮演重要角色，具有廣譜抗菌活性、免疫調(diào)節(jié)、促進損傷修復(fù)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等生物學(xué)功能[14]。研究表 明[15]，LL-37在炎癥部位的表達受促炎細(xì)胞因子、細(xì)菌產(chǎn)物等一系列刺激因素的上調(diào)，但抗菌肽LL-37在上呼吸道反復(fù)感染中的作用尚不明確。Sun L等[16]研究表明，25羥維生素D3是抗菌肽的潛在誘導(dǎo)因子，其可通過與維生素D受體（vitamin D receptor，VDR）結(jié)合，促進抗菌肽的表達。25羥維生素D3缺乏降低VDR信號通路促進抗菌肽LL-37的表達。本研究發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)組上呼吸道感染患者LL-37水平低于初發(fā)組（P<0.05），表明LL-37缺乏可能與患兒反復(fù)呼吸道感染有關(guān)。另外本研究發(fā)現(xiàn)反復(fù)上呼吸道感染患兒外周血25羥維生素D3和誘導(dǎo)痰上清液抗菌肽LL-37水平呈正相關(guān)，表明25羥維生素D3的缺乏可能會引起抗菌肽LL-37的水平降低。

免疫功能低下是導(dǎo)致呼吸道感染反復(fù)發(fā)作的主要原因。體液免疫在抗感染中起到重要作用。IgA是呼吸道和消化道腔內(nèi)主要的免疫球蛋白，是防御病原體入侵的第一道防線，在黏膜免疫中發(fā)揮著重要作用; 而IgM是近期感染的重要標(biāo)志，通過將補體激活，以實現(xiàn)對微生物的吞噬的殺傷，對早期的感染起到重要的免疫防御作用，是新生兒出生后形成的;IgG能有效調(diào)節(jié)吞噬細(xì)胞的吞噬功能，具有防護人體免疫功能的作用。本研究結(jié)果顯示復(fù)發(fā)組和初發(fā)組血清IgA、IgM 和IgG均低于對照組，提示上呼吸道感染患兒的體液免疫功能表現(xiàn)異常，IgA、IgM 和IgG水平的降低可能是患兒發(fā)生反復(fù)上呼吸道感染的原因之一。適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的細(xì)胞（樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞）直接或者經(jīng)適當(dāng)免疫刺激后均可表達VDR，維生素D與受體結(jié)合，并參與機體免疫調(diào)節(jié)[17];血清25羥維生素D3水平高低還可直接影響到兒童免疫球蛋白功能的表達[18]，原因可能是維生素D3作為新的神經(jīng)內(nèi)分泌免疫調(diào)節(jié)素，能夠增殖分化T、B淋巴細(xì)胞，促進免疫調(diào)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)反復(fù)上呼吸道感染患兒外周血25羥維生素D3和IgA、IgM 和IgG水平呈正相關(guān)，表明25羥維生素D3的缺乏可能會引起人體的體液免疫功能低下。

綜上所述，反復(fù)呼吸道感染患兒存在血清維生素D的缺乏、LL-37及血清IgA、IgM、IgG水平降低的現(xiàn)象，維生素D與LL-37及免疫球蛋白呈正相關(guān)，可能三者共同促進反復(fù)呼吸道感染的發(fā)生，補充維生素D對兒童反復(fù)上呼吸道感染治療可能有一定的作用。

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收稿日期：2019-10-13;修回日期：2019-12-03

編輯/肖婷婷

作者簡介：段訓(xùn)新（1992.9-），男，江西九江人，本科，主管技師，從事臨床檢驗工作