HPLC法測(cè)定銀菊感冒膠囊中綠原酸的含量

荀秀彪王月德

摘要：目的? 建立銀菊感冒膠囊中綠原酸含量測(cè)定的高效液相色譜法。方法? 采用Hypersil ODS2（4.6 mm×250 mm，5μm）色譜柱;乙腈-0.4%磷酸溶液（9∶91）為流動(dòng)相;流速：1.0 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：327 nm;柱溫：30 ℃;進(jìn)樣量：10 μl;理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算不低于1000。結(jié)果? 綠原酸進(jìn)樣量在0.04348～0.39132 μg內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9997（n=6），平均回收率為98.66%，RSD=0.83%（n=5）。結(jié)論? 本次建立的方法操作簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果可靠，可用于銀菊感冒膠囊中綠原酸的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;銀菊感冒膠囊;綠原酸;含量測(cè)定

中圖分類號(hào)：R725.1? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.09.052

文章編號(hào)：1006-1959（2020）09-0155-03

Determination of Chlorogenic Acid in Yinju Ganmao Capsules by HPLC

XUN Xiu-biao，WANG Yue-de

（Qujing City Food and Drug Inspection and Testing Center，Yunnan Province，Qujing 655000， Yunnan，China）

Abstract：Objective? To establish a high performance liquid chromatography method for the determination of chlorogenic acid in Yinju Ganmao capsules.Methods? Hypersil ODS2 （4.6 mm × 250 mm， 5 μm） chromatographic column; acetonitrile-0.4% phosphoric acid solution （9∶91） as mobile phase; flow rate： 1.0 ml/min; detection wavelength： 327 nm; column temperature： 30 ℃ Injection volume： 10 μl; theoretical plate count is not less than 1000 based on chlorogenic acid peak calculation.Results? The chlorogenic acid injection volume was in a linear relationship between 0.04348 and 0.39132 μg， r=0.9997（n=6）， the average recovery was 98.66%， and RSD=0.83%（n=5）.Conclusion? The method established this time is simple and quick， and the results are reliable. It can be used for the determination of chlorogenic acid in Yinju Ganmao capsules.

Key words：High performance liquid chromatography;Yinju Ganmao capsules;Chlorogenic acid;Content determination

銀菊感冒膠囊為曲靖市中醫(yī)醫(yī)院的院內(nèi)醫(yī)院制劑（批準(zhǔn)文號(hào)：滇ZJGF＼2005-538），由金銀花、菊花、射干、氨基比林、馬來(lái)酸氯苯那敏等組成，具有清熱解毒、解熱鎮(zhèn)痛的作用。臨床用于感冒、發(fā)熱、頭痛、咽喉腫痛等癥。制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中綠原酸僅有薄層色譜定性鑒別，無(wú)含量測(cè)定方法[1]。本文參考有關(guān)文獻(xiàn)資料[1，2]，采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)該品種中金銀花和菊花中總的綠原酸含量進(jìn)行測(cè)定，旨在為銀菊感冒膠囊質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1儀器與器材料

1.1儀器? Agilent1260型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）（四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，紫外檢測(cè)器）;METTLE MS205DU電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）;KQ-300UDB型雙頻數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;一體式超純水儀（PURELAB Flex 3，英國(guó)ELGA公司）。

1.2藥品與試劑? 銀菊感冒膠囊（批號(hào)190915、191017、191120，規(guī)格0.25 g/粒）樣品均來(lái)自云南省曲靖市中醫(yī)醫(yī)院;綠原酸對(duì)照品（批號(hào)110753-2011817，含量96.8%）購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院;乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為超純水。

2方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1對(duì)照品溶液制備? 取綠原酸對(duì)照品10.87 mg，精密稱定，置10 ml棕色容量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取1 ml置50 ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，制成含綠原酸21.74 μg/ml的對(duì)照品溶液，即得（10 ℃以下保存）。

2.1.2供試品溶液制備? 取銀菊感冒膠囊20粒，計(jì)算平均裝量，取內(nèi)容物，研細(xì)，混勻，取適量（約相當(dāng)于綠原酸4 mg），精密稱定，放入具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，稱定重量，密塞，超聲處理（功率250 W，頻率35 kHz） 30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，濾液再用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.1.3陰性樣品溶液制備? 根據(jù)制劑處方及工藝，配制缺金銀花、菊花的陰性樣品（由云南省曲靖中醫(yī)醫(yī)院提供），再按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.2色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)? 色譜柱：Hypersil ODS2 5 μm，4.6 mm×250 mm;乙腈-0.4%磷酸溶液（9：91）為流動(dòng)相;流速：1.0 ml/min;柱溫：30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：327 nm;進(jìn)樣量：10 μl。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算不低于1000。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1專屬性試驗(yàn)? 精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10 μl，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件下，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)圖1。結(jié)果顯示綠原酸色譜峰能有效進(jìn)行分離，分離度大于1.5，理論板數(shù)按所測(cè)色譜峰計(jì)算大于1000，說(shuō)明測(cè)定方法專屬性較好，無(wú)干擾。

2.3.2線性關(guān)系試驗(yàn)? 精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液各2、4、6、10、14、18 μl，分別注入液相色譜儀，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以對(duì)照品溶液進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（x）、峰面積為縱坐標(biāo)（y），得回歸曲線方程：y=30.04777+3.63056，r=0.9997（n=6）。表明進(jìn)樣量在0.04348～0.39132 μg線性關(guān)系良好。

2.3.3穩(wěn)定性試驗(yàn)? 取同一批次銀菊感冒膠囊（批號(hào)190915）的同一份供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12 h不同時(shí)間，按照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件，進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，結(jié)果峰面積RSD為1.52%（n=6）。結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)色譜峰面積變化不大，溶液較穩(wěn)定。

2.3.4精密度試驗(yàn)? 取銀菊感冒膠囊（批號(hào)190915）按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備的供試品溶液，精密吸取? 10 μl，按照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄綠原酸峰面積。結(jié)果綠原酸峰面積的RSD值為0.59%（n=6），表明儀器平行精密度良好。

2.3.5重復(fù)性試驗(yàn)? 取同一批次的銀菊感冒膠囊（批號(hào)190915）0.5 g，平行6份，精密稱定，按“2.1.2”項(xiàng)下的方法操作，按照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，每1 g樣品中含綠原酸7.10 mg，RSD為0.26%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.6加樣回收率試驗(yàn)? 取已知含量的同一批銀菊 感冒膠囊（批號(hào)190915，綠原酸含量7.10 mg/g）5份，每份約0.3 g，精密稱定;另取綠原酸對(duì)照品25.15 mg，精密稱定，置25 ml容量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取2 ml置已稱定樣品中，按“2.1.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定、計(jì)算回收率，見(jiàn)表1。平均回收率為98.66%，RSD值為0.83%（n=5）。表明本含量測(cè)定方法準(zhǔn)確度良好。

2.3.7樣品測(cè)定? 取3個(gè)批次的銀菊感冒膠囊（批號(hào)190915、191017、191120）分別按“2.1.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，每批平行取樣2份，按照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，每份測(cè)定2次，計(jì)算綠原酸含量，見(jiàn)表2。

3討論

根據(jù)中國(guó)藥典及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[3]，同時(shí)通過(guò)實(shí)驗(yàn)，綠原酸在327.5 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，最終選用327 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。有研究報(bào)道[4]，在試驗(yàn)? ?中曾采用流動(dòng)相、50%甲醇、水、乙醇等溶媒超聲? ?30 min進(jìn)行提取，其中以50%甲醇作為提取溶劑為佳;再以50%甲醇為提取溶劑，對(duì)同一批號(hào)樣品的超聲時(shí)間進(jìn)行考察，選擇超聲15、30、45、60 min后處理的樣品溶液分別進(jìn)行分析，結(jié)果各樣品含量基本接近，故選擇超聲時(shí)間30 min處理樣品。本試驗(yàn)采用3種流動(dòng)相進(jìn)行成分分離[5]：①乙腈-磷酸溶液;②甲醇-水;③甲醇-乙腈-水，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙腈-0.4%磷酸溶液（9∶91）為流動(dòng)相保留時(shí)間合適且各成分獲得較好的分離。因此可以采用高效液相色譜法測(cè)定銀菊感冒膠中囊金銀花與菊花的綠原酸的總量的方法來(lái)反映該制劑的內(nèi)在質(zhì)量。

綜上所述，本試驗(yàn)中采用高效液相色譜法測(cè)定銀菊感冒膠中囊金銀花與菊花的綠原酸的總量，該方法操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可用于該制劑質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)：

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收稿日期：2020-01-14;修回日期：2020-01-21

編輯/成森

作者簡(jiǎn)介：荀秀彪（1968.7-），男，云南曲靖人，本科，副主任藥師，主要從事食品、藥品檢驗(yàn)檢測(cè)工作