兒童幽門螺桿菌四種毒力因子表達的相關性研究

褚明亮 胡建軍 楊俊梅

【摘要】 目的：研究幽門螺桿菌四種毒力因子尿素酶A（Ure A）、尿素酶B（Ure B）、細胞空泡毒素（Vac A）和細胞毒相關蛋白（Cag A）在兒童幽門螺桿菌中分布的相關性。方法：統(tǒng)計2017年6月-2018年6月筆者所在醫(yī)院門診及住院有上消化道癥狀的患兒共633例。其中男369例，女264例;年齡1～16歲。采用免疫印跡法檢測兒童血清中的四種幽門螺桿菌毒力因子。相關性分析采用Spearman檢驗，r≥0.8時，視為有高度相關性。結果：Ure B與Ure A、Vac A和Cag A這三個毒力因子之間的表達有相關性（r<0.6），且Ure B與Ure A+/Vac A+/Cag A+（三因子共陽性）的相關性較低（r=0.527）。但是Ure A、Vac A和Cag A與另外三種毒力因子聯(lián)合共陽性的相關性都很高（r>0.8）。結論：Ure A、Vac A和Cag A分別與其他另外三種毒力因子共陽性表達相關性較高，可反映四毒力因子的整體表達陽性情況。

【關鍵詞】 兒童 幽門螺桿菌 毒力因子 相關性分析

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.12.063 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2020）12-0-03

The Expression and Relevance of Helicobacter Pylori Four Virulence Factors in Children/CHU Mingliang， HU Jianjun， YANG Junmei. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（12）： -151

[Abstract] Objective： To evaluate the expression and relevance of Ure A， Ure B， Vac A and Cag A in Helicobacter pylori of children.Method： From June 2017 to June 2018， a total of 633 blood samples of outpatient and hospitalization children （369 male， 264 female， 1-16 years old） with upper gastrointestinal symptoms were included in the study. The expression and relevance of four virulence factors were analyzed by immunoblotting and Spearman test. r≥0.8 was considered to be highly correlated. Result： The correlation was low between Ure B with other three virulence factors Ure A， Vac A and Cag A （r<0.6）. And the correlation was very low between Ure B with Ure A+ /Vac A+ /Cag A+ （r=0.527）. But the correlation was high between Ure A， Vac A， Cag A with positive combination of any other three virulence factor （r>0.8）. Conclusion： The correlation is high between Ure A， Vac A， Cag A with positive combination of any other? three virulence factor， and they can reflect the whole positive expression of four virulence factors.

[Key words] Children Helicobacter pylori Virulence factor Correlation analysis

First-authors address： First Affiliated Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550001， China

幽門螺桿菌是全球范圍內(nèi)流行較為廣泛的慢性致病菌之一，也是公認的上消化道疾病的主要致病菌[1-2]。兒童是幽門螺桿菌的易感人群，在發(fā)展中國家，幾乎近半數(shù)兒童感染過此菌，且研究發(fā)現(xiàn)超過75%的成年感染患者是在其幼年時期被感染的[3-5]。幽門螺桿菌富含尿素酶，特別是尿素酶A（Ure A）和尿素酶B（Ure B），約含菌體蛋白的8%，活性極高[6]。尿素酶通過催化水解尿素形成“氨云”，在細菌周圍形成“保護層”，利于幽門螺桿菌在高酸環(huán)境下生存[7]。此外，幽門螺桿菌通過產(chǎn)生空泡毒素A（Vac A）和細胞毒素相關蛋白A（Cag A）損傷胃黏膜上皮細胞，導致其變性、壞死，實現(xiàn)其致病性。迄今為止，關于毒力因子Ure A、Ure B、Vac A和Cag A在兒童幽門螺桿菌中的表達及其相關性研究尚未報道。本文通過比較四種毒力因子的檢測結果并分析其相關性，揭示其可能的內(nèi)在規(guī)律。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年6月-2018年6月鄭州兒童醫(yī)院門診及住院有上消化道癥狀的患兒共633例。其中男369例，女264例;年齡1～16歲。

1.2 檢測方法

采用免疫印跡法檢測兒童血清中的四種幽門螺桿菌毒力因子。取患兒靜脈血1～2 ml，分離血清，嚴格按照免疫印跡法Hp抗體分型檢測試劑說明書（深圳市伯特勞生物制品有限公司）進行操作。用聚丙烯酰胺凝膠電泳法將血清中的Ure A、Ure B、Cag A和Vac A按分子量大小依次分開，電轉至印跡膜上，最后加入顯色劑反應，通過陽性顯色區(qū)帶的分子量不同即可判斷四種毒力因子的結果。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計，相關性分析采用Spearman檢驗，r≥0.8時，視為有高度相關性。

2 結果

2.1 Ure A、Ure B、Vac A和Cag A四種毒力因子的表達陽性率

Ure A、Ure B、Vac A和Cag A四種毒力因子的表達陽性率分別是18.48%（117/633）、39.49%（250/633）、16.59%（105/633）和19.43%（123/633），四種毒力因子共陽性的表達率是15.64%（99/633），其中Ure B的陽性表達率最高。

2.2 毒力因子之間的表達相關性

Ure B與Ure A、Vac A和CagA這三個毒力因子之間的表達相關性r值均小于0.6（表1、表2、表3、表4），但是Ure A、Vac A和Cag A這三個毒力因子之間的表達相關性r值均大于0.8（表1、表2、表3、表4）。

2.3 Ure A、Ure B、Vac A和Cag A分別與另外三種毒力因子共陽性相關性比較

表5、表6、表7、表8結果表明，Ure A、Vac A和Cag A與另外三種毒力因子聯(lián)合共陽性的相關性都很高，r值均大于0.8;而Ure B與Ure A+/Vac A+/Cag A+（三因子共陽性）的相關相關性r值較低，為0.527。

3 討論

幽門螺桿菌和胃炎、胃腺癌等的發(fā)生有密切關系[8-12]，特別是在兒童慢性活動性胃炎中，其感染率高達90%以上，因此幽門螺桿菌是兒童慢性胃炎的一個重要影響因素[8-12]。臨床檢測患者胃內(nèi)是否存在幽門螺桿菌，一般常采用血清免疫印跡法、胃黏膜活檢和呼氣采樣三種檢測方法[13-16]。由于胃鏡及胃黏膜活檢是一種侵入方式，有一定創(chuàng)傷性，患兒及其家屬依從性較差，臨床難以普及應用。而尿素呼氣試驗具有操作簡單、無創(chuàng)、靈敏度高等優(yōu)點而在臨床廣泛使用，但是呼氣試驗不能精確對幽門螺桿菌不同的毒力因子進行分型。血清免疫印跡法能一次性檢測血清幽門螺桿菌毒力因子譜的全貌，且靈敏度高、特異強，適用于兒童幽門螺桿菌感染檢測及其分型[17-20]。

筆者的試驗結果發(fā)現(xiàn)Ure A、Ure B、Vac A和Cag A四種毒力因子在兒童上消化道癥狀患兒中的表達陽性率分別是18.48%、39.49%、16.59%和19.43%，其中Ure B的陽性表達率最高。這可能與Ure B亞單位具有強烈的抗原性，其免疫反應性最強，是Hp的優(yōu)勢免疫原有關[21]。Ure B雖然在兒童幽門螺桿菌中的表達陽性率較高，但其與另外三種毒力因子Ure A/Vac A

/Cag A的相關表達相關性不高，因此Ure B不能很好地反映整體四種毒力因子的陽性表達情況。而Ure A、Vac A和Cag A分別與其他另外三種毒力因子共陽性表達相關性較高，可反映四毒力因子的整體表達陽性情況。

總之，筆者發(fā)現(xiàn)了兒童幽門螺桿菌4種毒力因子的內(nèi)在聯(lián)系，這為未來更好的研究幽門螺桿菌毒力因子提供了部分基礎。

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（收稿日期：2019-12-23） （本文編輯：何玉勤）