核酸檢測與酶聯(lián)免疫吸附檢測平行篩查血液在基層血站中的意義

繆茜虹

【摘要】 目的：探討核酸檢測與酶聯(lián)免疫吸附（酶免）檢測平行篩查血液在基層血站中的意義。方法：選擇2016年10月-2019年9月寧德市中心血站39 905份血液標(biāo)本，對其進(jìn)行酶免檢測及核酸檢測。結(jié)果：經(jīng)酶免檢測，A試劑檢測HBsAg均為陰性，B試劑檢測HBsAg有25份為弱陽性及灰區(qū)。經(jīng)核酸檢測，A試劑檢測HBsAg陰性標(biāo)本中有102份為陽性，B試劑檢測HBsAg弱陽性及灰區(qū)25份標(biāo)本均為陽性，B試劑檢測HBsAg陰性標(biāo)本中有77份為陽性。結(jié)論：在基層血站血液篩查中采用酶免檢測與核酸檢測平行篩查，可提高血液篩查準(zhǔn)確性。

【關(guān)鍵詞】 血液篩查 無償獻(xiàn)血 酶聯(lián)免疫吸附法 核酸檢測

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.12.030 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2020）12-00-03

Significance of Parallel Screening of Blood by Nucleic Acid Detection and Enzyme Linked Immunosorbent Assay in Primary Blood Stations/MIAO Qianhong. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（12）： -70

[Abstract] Objective： To explore the significance of parallel screening of blood by nucleic acid detection and enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） in primary blood stations. Method： From October 2016 to September 2019， 39 905 blood samples from Ningde City Center Blood Station were selected for ELISA and nucleic acid detection. Result： By ELISA， HBsAg was negative in reagent A， and in reagent B， there were 25 weak positive and grey areas. According to the nucleic acid detection， 102 of the negative samples of HBsAg in reagent A were positive， while 25 of the weak positive and gray areas of HBsAg in reagent B were positive， and 77 of the negative samples of HBsAg in reagent B were positive. Conclusion： The accuracy of blood screening can be improved by parallel screening of ELISA and nucleic acid detection in blood screening of primary blood stations.

[Key words] Blood screening Volunteer blood donation Enzyme linked immunosorbent assay Nucleic acid detection

First-authors address： Ningde City Center Blood Station， Ningde 352100， China

近年來，隨著我國社會公益事業(yè)的發(fā)展和人們公益意識的提高，無償獻(xiàn)血已得到大力提倡，自愿進(jìn)行無償獻(xiàn)血的志愿者也明顯增多。無償獻(xiàn)血為臨床輸血提供了血液資源，為保證臨床輸血安全，需對血液標(biāo)本進(jìn)行嚴(yán)格篩查，對HBsAg、HCV、HIV等常見血液傳染性疾病病毒進(jìn)行檢測，以及時發(fā)現(xiàn)不合格血液標(biāo)本，避免在臨床輸血時出現(xiàn)報廢情況[1-3]。以往，基層血站對血液進(jìn)行篩查主要是依靠血清酶聯(lián)免疫吸附法檢測，可在一定程度上檢出HBsAg、HCV、HIV，但仍存在部分弱陽性及灰區(qū)標(biāo)本，具有局限性[4]。近年來，核酸檢測逐漸被用于血液篩查中，具有更高的靈敏度，可對酶免檢測弱陽性及灰區(qū)、陰性標(biāo)本進(jìn)行嚴(yán)格篩查，提高血液篩查的準(zhǔn)確性[5-6]。本研究為探討核酸檢測與酶免檢測平行篩查在基層血站血液篩查中的應(yīng)用價值，針對39 905份血液標(biāo)本進(jìn)行檢測。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年10月-2019年9月寧德市中心血站無償獻(xiàn)血者捐獻(xiàn)的39 905份血液標(biāo)本，每份血液標(biāo)本為5 ml。獻(xiàn)血者納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合GB18467-2001健康獻(xiàn)血者檢查標(biāo)準(zhǔn);（2）自愿參加無償獻(xiàn)血。排除標(biāo)準(zhǔn)：無法配合獻(xiàn)血工作。男26 236人，女13 669人;年齡18～55歲，平均（32.46±13.52）歲;學(xué)生3 147人，軍人499人，普通公司職員7 070人，醫(yī)務(wù)工作者684人，教師653人，其他27 852人。獻(xiàn)血者對獻(xiàn)血要求知情同意。

1.2 方法

試劑及儀器：（1）酶免檢測：A試劑為廈門英科新創(chuàng)HBsAg，B試劑為意大利索靈Murex HBsAg Version，酶免檢測儀器為哈美頓STAR加樣儀、FAME全自動酶免后處理系統(tǒng);（2）核酸檢測：檢測試劑為上海浩源核酸檢測試劑，儀器為上海浩源Chitas bss 1200全自動核酸純化儀、ABI7500實時熒光定量PCR分析儀。

在獻(xiàn)血者充分放松狀態(tài)下采集肘部靜脈血10 ml，取5 ml置于酶免管，并以3 000 r/min離心3 min后進(jìn)行試驗;另5 ml置于核酸管，采集后4 h內(nèi)在低溫條件下以離心力1 500～1 800 g離心20 min后進(jìn)行試驗。

采用酶免檢測試劑A試劑、B試劑對血液標(biāo)本中的乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）進(jìn)行檢測;采用酶免法對血液標(biāo)本中的丙型肝炎抗體（hepatitis C antibody，HCV）、艾滋病病毒（human immunodeficiency virus，HIV）進(jìn)行檢測，嚴(yán)格按照檢測試劑及儀器說明書進(jìn)行操作，分析檢測結(jié)果。對A試劑檢測HBsAg陰性標(biāo)本、B試劑檢測HBsAg弱陽性及灰區(qū)標(biāo)本、B試劑檢測HBsAg陰性標(biāo)本、HCV陰性標(biāo)本、HIV陰性標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測，嚴(yán)格按照檢測試劑及儀器說明書進(jìn)行操作，進(jìn)一步篩查血液標(biāo)本。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察酶免檢測、核酸檢測對血液標(biāo)本HBsAg、HCV、HIV的檢出情況。

2 結(jié)果

經(jīng)酶免檢測，39 905份血液標(biāo)本中，A試劑檢測HBsAg均為陰性，陰性率為100%（39 905/39 905）;B試劑檢測HBsAg有25份為弱陽性及灰區(qū)，弱陽性及灰區(qū)率為0.063%（25/39 905），

有39 880份為陰性標(biāo)本，陰性率為99.937%（39 880/39 905）;HCV均為陰性，陰性率為100%;HIV均為陰性，陰性率為100%。

經(jīng)核酸檢測，A試劑檢測HBsAg陰性標(biāo)本中有102份為陽性，陽性率為0.256%（102/39 905），有39 803份為陰性，陰性率為99.744%（39 803/39 905）;B試劑檢測HBsAg弱陽性及灰區(qū)25份標(biāo)本均為陽性，陽性率100%（25/25）;B試劑檢測HbsAg陰性標(biāo)本中有77份為陽性，陽性率為0.193%（77/39 880），

有39 803份為陰性，陰性率99.807%（39 803/39 880）;HCV陰性39 905份標(biāo)本均為陰性，陰性率為100%（39 905/39 905）;HIV陰性39 905份標(biāo)本均為陰性，陰性率為100%（39 905/39 905）。

3 討論

無償獻(xiàn)血是指志愿者在自愿、無償?shù)那闆r下捐獻(xiàn)自身適量的血液，無償獻(xiàn)血中獲取的血液資源是臨床輸血血庫的重要來源，可用于多種疾病治療中[7]。在采集完無償獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本后，為保障臨床輸血安全性和血液標(biāo)本質(zhì)量，主張對血液標(biāo)本進(jìn)行篩查[8]。血液標(biāo)本篩查主要是針對輸血傳播病原體，可及時篩查出存在污染的血液標(biāo)本，有利于確保臨床輸血安全性，避免血液資源浪費，防止臨床輸血時出現(xiàn)不良輸血反應(yīng)[8-9]。因此，做好基層血站血液標(biāo)本篩查工作十分重要。

在國內(nèi)，輸血傳播病原體篩查主要是針對乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病等傳染性疾病的病原體進(jìn)行篩查，包括HBsAg、HCV、HIV等[10]。以往，臨床上針對HBsAg、HCV、HIV篩查多采取酶免法對血清樣本進(jìn)行檢測，可在一定程度上篩出攜帶有HBsAg、HCV、HIV的血液標(biāo)本，有利于降低臨床輸血風(fēng)險。但由于酶免檢測血清時受到檢測試劑、檢測時間、檢測溫度等多種因素的干擾，檢測結(jié)果可能會出現(xiàn)假陰性情況，還可能會出現(xiàn)弱陽性及灰區(qū)，故還需進(jìn)一步篩查[11]。

核酸檢測是指采用核酸純化系統(tǒng)對血液標(biāo)本中的病原體核糖核酸進(jìn)行檢測，是一種分子診斷技術(shù)，步驟包括核酸提取、擴(kuò)增、檢測。由于核糖核酸是病毒遺傳信息的主要載體，針對病毒核糖核酸進(jìn)行檢測可獲取病毒遺傳信息，從而對病毒DNA情況進(jìn)行反映，具有高靈敏度、特異度[12]。在血液標(biāo)本受到病毒感染后的數(shù)天內(nèi)，采用核酸檢測即可檢出微量病毒核糖核酸，能夠縮短病毒抗原及抗體蛋白結(jié)構(gòu)變異窗口期，提高檢測準(zhǔn)確性[13]。此外，核酸檢測還具有自動化的特點，檢測結(jié)果不受試劑、病毒基因型等多種因素的干擾，檢測結(jié)果更加可靠[14]。

為提高血液篩查的準(zhǔn)確性，陳艷萍[15]提出對血液標(biāo)本實施酶免檢測與核酸檢測聯(lián)合篩查，即先對血液標(biāo)本進(jìn)行酶免檢測，再對酶免檢測陰性標(biāo)本、弱陽性及灰區(qū)標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測。本研究按此順序?qū)?9 905份血液標(biāo)本進(jìn)行篩查，結(jié)果顯示：（1）經(jīng)酶免檢測，39 905份血液標(biāo)本中，A試劑檢測HBsAg陰性率為100%;B試劑檢測HBsAg陰性率為99.937%，弱陽性及灰區(qū)率為0.063%;HCV、HIV陰性率均為100%。（2）核酸檢測，A試劑檢測HBsAg陰性39 905份標(biāo)本的陽性率為0.256%，陰性率為99.744%;B試劑檢測HBsAg弱陽性及灰區(qū)25份標(biāo)本的陽性率為100%;B試劑檢測HbsAg陰性39 880份標(biāo)本的陽性率為0.193%，陰性率99.807%;HCV、HIV陰性標(biāo)本的陰性率為100%。以上研究結(jié)果說明，在酶免檢測后對血液標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測，可檢出假陰性標(biāo)本，減少不確定性。

綜上所述，在基層血站對無償獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本進(jìn)行篩查時，采用酶免檢測與核酸檢測平行篩查可提高血液篩查準(zhǔn)確性，減少血液傳播疾病風(fēng)險，有利于保障臨床輸血安全性。

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（收稿日期：2020-01-13） （本文編輯：李盈）