高效液相色譜法測(cè)定C16-18醇聚氧乙烯醚中乙酸含量

沙 美

(南京威爾藥業(yè)股份有限公司,江蘇 南京 210042)

脂肪醇聚氧乙烯醚是最重要的一類(lèi)非離子表面活性劑。分子中的醚鍵不易被酸、堿破壞，所以穩(wěn)定性較高，水溶性較好，耐電解質(zhì)，易于生物降解，泡沫小，該類(lèi)表面活性劑大都以環(huán)氧乙烷為乙氧基化試劑，以氫氧化鈉或者氫氧化鉀為催化劑[1]，在后續(xù)反應(yīng)的精制過(guò)程中，會(huì)用到乙酸來(lái)中和多余的催化劑，使產(chǎn)品本身的性質(zhì)保持在中性或弱酸性，成品中會(huì)殘留少量的乙酸，作為雜質(zhì)會(huì)影響到產(chǎn)品質(zhì)量，常規(guī)乙酸方法的測(cè)定會(huì)采用氣相色譜法[2]，但可能會(huì)遇到峰型不佳或者檢測(cè)靈敏度偏低的情況，也有文獻(xiàn)報(bào)道采用高效液相色譜法[3]，但流動(dòng)相為甲醇-緩沖液系統(tǒng)，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm，因?yàn)榧状嫉慕刂共ㄩL(zhǎng)接近210 nm，所以我們改用乙腈和磷酸鹽緩沖系統(tǒng)，建立了輔料C16-18醇聚氧乙烯醚中乙酸的測(cè)定方法，該方法靈敏度和準(zhǔn)確度較高。

1 儀器與試劑

儀器：Thermou3000高效液相色譜儀

試劑：乙酸(ACS，色譜級(jí)，批號(hào)LOT27Y1709DK)，乙腈(ACS，色譜級(jí)，批號(hào)LOT45Y1708BR)，磷酸二氫鉀(分析純)，磷酸(分析純)，C16-18醇聚氧乙烯醚(南京威爾藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)20190701k)

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：CAPCELL PAK C18(4.6 mm*250 mm，5 μm)；流動(dòng)相A：乙腈-pH3.0磷酸鹽緩沖液(5∶95)；流動(dòng)相B：乙腈；柱溫35 ℃；進(jìn)樣量20 μl；流速1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，流動(dòng)相梯度見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相梯度表

2.2 溶液配制

2.2.1對(duì)照品溶液

取乙酸適量，加水溶解并定量稀釋至濃度為25 μg/ml的溶液，作為對(duì)照溶液。

2.2.2供試品溶液

取本品100 mg，精密稱(chēng)定，置20 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1專(zhuān)屬性試驗(yàn)

取空白溶劑和乙酸對(duì)照溶液各20 μl，分別注入液相色譜儀，結(jié)果空白溶劑在乙酸出峰位置沒(méi)有干擾。

2.3.2檢測(cè)限和定量限

取乙酸溶液逐級(jí)稀釋至S/N約為10作為定量限，S/N約為3作為檢測(cè)限，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 乙酸檢測(cè)限和定量限

乙酸的定量限濃度為0.25 μg/ml，相當(dāng)于0.005%可以定量，檢測(cè)限濃度為0.125 μg/ml，相當(dāng)于0.0025%被檢出。

2.3.3線性范圍

分別取濃度約為100 μg/ml的乙酸對(duì)照溶液0.5、1.0、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0 ml置10 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為不同濃度的對(duì)照溶液，分別取不同濃度的乙酸對(duì)照溶液20 μl注入液相色譜儀，以濃度C(μg/ml)為橫坐標(biāo)，以峰面積A為縱坐標(biāo)進(jìn)行直線回歸，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 乙酸線性

結(jié)果表明：乙酸濃度在5.49～54.90 μg/ml之間時(shí)，濃度與峰面積線性關(guān)系良好。

2.3.4進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

取線性4#溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，考察進(jìn)樣精密度，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 乙酸進(jìn)樣精密度

結(jié)果表明乙酸進(jìn)樣的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD小于2.0%，說(shuō)明測(cè)定數(shù)據(jù)間的波動(dòng)性小，即本方法精密度試驗(yàn)符合要求。

2.3.5重復(fù)性

取20190701k批樣品適量，精密稱(chēng)定，加水溶解并制成每1 ml含5 mg的溶液，作為供試品溶液，取乙酸適量，精密稱(chēng)定，加水溶解并定量稀釋至濃度約為25 μg/ml的溶液，作為對(duì)照溶液，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，平行測(cè)定6份，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 乙酸重復(fù)性

結(jié)果表明：該方法的重復(fù)性良好。

2.3.6中間精密度試驗(yàn)

不同人員不同時(shí)間按照測(cè)定方法平行測(cè)定6份，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 乙酸中間精密度

結(jié)果表明：該方法的中間精密度良好。

2.3.7回收率試驗(yàn)

取20190701k樣品適量，加水溶解后，按照限度的80%、100%和120%加入一定量的乙酸溶液，每個(gè)水平平行操作3份，計(jì)算回收量和回收率，結(jié)果如下：

表7 乙酸加樣回收率

結(jié)果表明：該方法測(cè)定乙酸，回收率良好。

2.3.8溶液穩(wěn)定性

取供試品溶液，分別于0、2.5、5、7.5、10和16 h進(jìn)樣，供試品溶液中乙酸的峰面積變化見(jiàn)表8。

表8 乙酸溶液穩(wěn)定性

結(jié)果表明：供試品溶液室溫放置16h穩(wěn)定。

3 討論

該方法測(cè)定C16-18醇聚氧乙烯醚中的殘留的乙酸，準(zhǔn)確可靠，可以應(yīng)用到同類(lèi)輔料的項(xiàng)目中，具有一定的實(shí)用意義。