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    紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞中49種無機元素比較研究

    2020-06-06 04:55:32開建榮王彩艷趙丹青李彩虹王曉靜
    食品與發(fā)酵工業(yè) 2020年9期
    關(guān)鍵詞:種元素限量枸杞

    開建榮,王彩艷,趙丹青,李彩虹,王曉靜*

    1(寧夏農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究所,寧夏 銀川,750002) 2(寧夏農(nóng)林科學院,寧夏 銀川,750002)

    寧夏全區(qū)枸杞種植面積由2013年的85萬畝增加到了2018年100萬畝,年產(chǎn)量達18萬t,產(chǎn)值150億,種植面積和產(chǎn)量占到全國的40%左右,但主要種植紅枸杞。紅枸杞果實呈紅橘黃色,因為它的色素以脂溶性的類胡蘿卜素為主,紅枸杞果實的功能性成分[1]及其增強免疫力,抗衰老、抗腫瘤、抗疲勞、調(diào)節(jié)血脂、降血糖、降血壓等[2-6]多重功效已有諸多報道。除了紅枸杞之外,還有黑枸杞和黃枸杞,均為茄科,枸杞屬。黑枸杞分布于中國陜西北部、寧夏、甘肅、青海、新疆和西藏等地,果實成熟后呈紫黑色,因為其色素主要為水溶性的花色苷,黑枸杞富含蛋白質(zhì)、氨基酸、枸杞多糖、維生素、微量元素、礦物質(zhì)等多種營養(yǎng)成分,還有天然原花青素,被譽為“軟黃金”[7-8]。黃枸杞屬于寧夏枸杞的一個變種,主要分布于寧夏,被稱為“黃金枸杞”,種植面積較小。目前,對枸杞中無機元素的研究主要集中在微量元素[9-11]和重金屬[12-13]上,對枸杞中其他礦質(zhì)元素的研究較少。關(guān)于黑枸杞的研究主要集中在微量元素[9,11]等無機成分和色素[14]、花青素等有機成分[15-19]上。黃枸杞的研究鮮有報道。隨著人們對健康需求的增加,我國農(nóng)產(chǎn)品功能性營養(yǎng)成分的檢測分析也越來越多地被人們所關(guān)注,到底哪種枸杞的營養(yǎng)價值更高、對人體更有益,具有更高的藥用價值,有待于進一步研究。本試驗采集同一基地的紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞為研究對象,檢測分析三者中無機元素含量的差異性,以期為中藥材功能篩選提供數(shù)據(jù)支撐。

    1 材料與方法

    1.1 儀器與試劑

    ELAN DRC-e 型 ICP- MS 儀,美國 Perkin Elmer公司;Mars6 Xpress 微波消解儀,內(nèi)置雙光路溫度控制系統(tǒng)和全罐異常壓力監(jiān)控系統(tǒng),美國CEM公司;Milli Plus 2150 超純水處理器 ,美國 MILLIPORE公司;梅特勒-托利多電子天平(AL104)。

    本項目選擇4組混合標準溶液及Hg標準溶液。包括Al、As、B、Ba、Be、Bi、Cd、Ce、Co、Cr、Cs、Cu、Dy、Eu、Gd、Ge、Hg、Ho、Li、Lu、Mg、Mn、Mo、La、Nb、Nd、Ni、Pb、Pr、Rb、Sb、Sc、Se、Sm、Sn、Sr、Tb、Ti、Th、Tl、Tm、U、V、Y、Yb、Fe、Zn、P、Ca,共計49種元素?;旌蠘藴嗜芤?美國 Perkin Elmer公司;Hg標準溶液(1 000 mg/L),中國計量科學研究院;HNO3為優(yōu)級純,德國Merck公司。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 樣品前處理

    紅果枸杞(樣本數(shù)n=10)、黑果枸杞(樣本數(shù)n=7)和黃果枸杞(樣本數(shù)n=3)樣品均采自寧夏中寧地區(qū)的同一基地,鮮品曬干,置于50 ℃烘箱中烘干,然后進行充分研磨,過100目篩后備用。

    稱取0.5 g (精確到0.000 1 g) 枸杞樣品,采用微波消解法消解樣品,具體操作步驟如下:置于微波消解管中,加入HNO310 mL,常溫靜置3 h后,放入微波消解儀中進行樣品消煮,選擇溫度控制,5 min爬升至120 ℃,保持10 min;5 min爬升至150 ℃,保持20 min;5 min爬升至190 ℃,保持30 min,消解完畢后冷卻,輕輕擰開蓋子,將微波消解管置于趕酸儀上,120 ℃趕酸2 h,然后冷卻至室溫,用超純水洗至50 mL刻度試管中,并用超純水定容,搖勻;同時做試劑空白。

    1.2.2 元素含量的測定

    采用電感耦合等離子體-質(zhì)譜法(inductively coupled plasma-mass spectrometry, ICP-MS)測定枸杞中元素含量。具體工作條件為:發(fā)生器功率1 300 W;霧化器流量0.95 L/min;等離子炬冷卻氣流量17.0 L/min;輔助器流量1.20 L/min;檢測器模擬階電壓-2 350 V;離子透鏡電壓6.00 V。

    1.3 數(shù)據(jù)分析

    采用Excel 進行數(shù)據(jù)初步整理,采用SPSS 25.0進行單因素方差分析及主成分分析。結(jié)果以“平均值±標準差”表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞樣品中49種元素含量的測定

    如表1可知,枸杞中含有多種無機元素,除了黑枸杞中Mo元素未檢出外,紅枸杞、黃枸杞和黑枸杞中49種元素均有檢出,且含量差別較大,如Mg的含量在1 055~1 911 mg/kg范圍內(nèi),K和P的含量同Mg均在同一數(shù)量級;Fe和Zn的含量在同一數(shù)量級;B、Ba、Cu、Rb、Sr、Li、Mn、Ti含量在同一數(shù)量級;As、Cd、Cs、Eu、Gd、Ge、Hg、Lu、Sb、Pr、Sm、Tb、Tm的含量數(shù)量級類似。與前人報道的黑果枸杞[20]結(jié)果相比,本試驗中Cu(4.4 mg/kg)、Zn(13.6 mg/kg)、Fe(75.8 mg/kg)含量低于報道黑枸杞Cu(10 mg/kg)、Zn(17 m/kg)、Fe(128 mg/kg)含量,Mn的含量(13.0 mg/kg)稍高于報道中黑枸杞Mn含量(11 mg/kg),Ca(1 957 mg/kg)、Mg(1 911 mg/kg)含量遠遠高于報道中黑枸杞中Ca(136 mg/kg)、Mg(205 mg/kg)含量,因文獻報道中枸杞為新疆枸杞,可能是地域差異造成枸杞中元素含量差異;紅枸杞中Cu、Pb含量低于趙麗莉等[21]的測定結(jié)果,而K、Ca、Mg、Fe、Mn、Zn、Cr 的含量較高。

    表1 樣品測定結(jié)果 單位:mg/kg

    注:同一行中不同小寫字母表示在P<0.05水平上差異顯著;“-”為未檢出

    從表1可以看出,紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞49種元素中,Al、B、Ba、Bi、Cd、Co、Cu、Dy、Hg、Ho、Lu、Mn、Ni、Rb、Se、Sm、Tb、Tl、Tm、U、Y、Yb、Zn 22種元素含量不存在顯著差異(P>0.05);Mo元素在黑果枸杞中未檢出,其含量在紅枸杞和黃枸杞中差異不顯著(P>0.05),說明紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞對這些元素的吸收能力不存在顯著差異;As、Eu、Li、Sb、Sc、Ti、Th、Fe、P、Ca 10種元素的含量在紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞存在顯著差異(P<0.05),在這10種元素中,As、Eu、Li的含量依次是黑枸杞>黃枸杞>紅枸杞,Sb、Sc、Ti、Fe的含量依次是黃枸杞>黑枸杞>紅枸杞,Th的含量為黃枸杞>紅枸杞>黑枸杞,P的含量為黑枸杞>紅枸杞>黃枸杞;黑枸杞和黃枸杞中Be、Ce、Cs、Nd、Pr、V、La含量顯著高于紅枸杞,但其Gd含量低于紅枸杞,黃枸杞中的Ge、Nb、Sn含量高于紅枸杞和黑枸杞,黑枸杞中的Mg、Pb、Sr高于紅枸杞和黃枸杞。本試驗測定的紅枸杞中Fe含量低于黑枸杞,這與葉琦等[22]的研究結(jié)果相同;且本試驗黑枸杞中Ge、Sb、Tl的含量分別為紅枸杞的1.5倍、1.5倍和2倍,這與何艷等[23]的研究結(jié)果有所不同,但在整體上,黑果枸杞和黃果枸杞中大部分元素含量均高于紅果枸杞。

    Al、As、Hg、Pb、Cd、Cr、Ni、Sn、Mo、V、Tl、Sb、Ba 13種元素均為有害元素,《食品安全地方標準 枸杞》(DBS 64/001—2017)中僅對Pb、Cd做出了限量要求,限量值分別為1.0和0.3 mg/kg,上述樣品中Pb、Cd的含量遠低于標準限量值;同時也低于《食品國家安全標準 食品中污染物限量》中小粒水果的限量值(Pb、Cd的限量值分別為0.2和0.05 mg/kg);根據(jù)2015年版《中國藥典》[24]和《藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標準》[25]對中藥材中的 5 種重金屬元素的限量值(ω(As)≤2 mg/kg,ω(Hg)≤0.2 mg/kg,ω(Pb)≤5 mg/kg,ω(Cd)≤0.3 mg/kg,ω(Cu)≤20 mg/kg),在我國,中藥材除以上5種重金屬元素外,其余重金屬元素限量均未制定國家標準[26],枸杞中5種重金屬元素含量也低于限量標準。因此,該基地的枸杞質(zhì)量安全,可放心食用。

    2.2 49種元素的主成分分析

    主成分分析是一種將原來有很多變量的數(shù)據(jù)縮減成較少維度,用少量因素反應原始數(shù)據(jù)提供的大部分信息[27-28]。對紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞中49種元素進行主成分分析(表2、表3),以特征值大于1作為選擇主成分的依據(jù),結(jié)果表明,可篩選出8個主成分。第一主成分特征值為23.158,代表了49種元素的47.260%信息,以此類推,前8個主成分累計方差貢獻率為94.323%,用這8個主成分可以較好的替代上述49種元素的全部信息,因此,構(gòu)成枸杞元素組分特征的物質(zhì)由49個降到了8個不相關(guān)的主成分,成功達到了評價不同產(chǎn)地無機元素含量指標降維的目的。

    表2 49種元素主成分分析Table 2 Princple component analysis of mineral element content

    表3是經(jīng)方差最大正交旋轉(zhuǎn)后的因子載荷矩陣,用于鑒別有實際意義的因子。從表3中可以看到,第1主成分主要綜合了枸杞樣品中Eu、Nd、Pr、Gd、Ge、V、Tb、Be、Sm、Lu和Ca元素的含量信息;第2主綜合了Sn、Nb元素的含量信息;第3主成分綜合了Lu、Tm和Yb元素的含量信息;第4主成分主要表示Pb的含量信息;第5主成分綜合了Zn的含量信息;第6主成分主要表示Mn的含量信息;第7主成分主要表示Bi的含量信息;第8主成分主要表示P的含量信息。因為總方差94%以上的貢獻來自于前8個主成分,所以,根據(jù)各無機元素在前8個主要主成分上的載荷,可以認為Eu、Nd、Pr、Gd、Ge、V、Tb、Be、Sm、La、Ca、Sn、Nb、Lu、Tm、Yb、Pb、Zn、Mn、Bi和P是區(qū)分紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞的特征元素。

    表3 主成分載荷矩陣Table 3 Component matrix

    利用第1主成分和第2主成分的標準化得分作散點圖(圖1),結(jié)果表明,通過第1和第2主成分可區(qū)分紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞樣品。黃枸杞第1主成分、第2主成分得分均為正值,黑枸杞第1主成分得分為正值,第2主成分為負值,紅枸杞的第1主成分和第2主成分得分均為負值??梢姡鞒煞址治隹梢园褬悠分卸嘣氐男畔⑼ㄟ^綜合的方式更直觀地表現(xiàn)出來。

    圖1 第1和第2主成分得分散點圖Fig.1 Scatter plot PC1 and PC2

    2.3 紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞中元素指紋圖譜的建立

    參考文獻[29-30]的方法,篩選出紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞中共有的48種元素,為了繪圖方便,將一些含量懸殊的元素同時擴大或縮小相同倍數(shù)使其含量在同一數(shù)量級(Al、Fe、Ca縮小100倍,K、Mg、P縮小1 000倍,Ni、V擴大10倍,As、Be、Bi、Cd、Ce、Co、Dy、Nd、Nb、Pr、Sn、Th、Tl、U、Y、Yb、La擴大100倍,Cs、Eu、Gd、Ge、Hg、Ho、Lu、Sb、Sc、Sm、Tb、Tm擴大1 000倍)得到各元素的相對含量,以元素為橫坐標,以元素含量的對數(shù)值為縱坐標,繪制指紋圖譜,見圖2。

    圖2 紅果枸杞、黑果枸杞和黃果枸杞元素含量分布曲線Fig.2 Distribution curves of inorganic in red L. barbarum,black L. barbarum and yellow L. barbarum

    結(jié)果顯示,黑枸杞和黃枸杞的峰形基本保持一致,紅枸杞曲線走勢差異較大,如As、Be、Gd、Li、Sc、V等元素,體現(xiàn)出紅枸杞和黑枸杞、黃枸杞在元素含量上存在顯著性差異。紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞的無機元素特征圖譜見圖3,枸杞中常量元素以K、Fe、Mg、Al、P、Ca等較為豐富,微量元素以Zn、Cu、Mn、Sn、Ti、Ni等較為豐富;同時,從圖2可以明顯地看出不同品種枸杞對元素的吸收富集能力,研究結(jié)果可以為后期中藥材功能篩選、產(chǎn)地溯源等方面提供數(shù)據(jù)支撐。

    圖3 紅果枸杞、黑果枸杞和黃果枸杞元素特征譜圖Fig.3 Characteristic spectrum of elements in red L.barbarum,black L. barbarum and yellow L. barbarum

    3 結(jié)論

    紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞中元素含量有其各自的特征,其對元素的吸收能力有明顯差異,As、Eu、Li、Sb、Sc、Ti、Th、Fe、P、Ca十種元素在紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞中有顯著差異;紅枸杞對Gd具有較強的吸收作用;黑枸杞對As、K、Mg、Pb、Sr、Eu和Li具有較強的吸收作用;而黃枸杞對Ge、Nb、Sn、Sc、Sb、Ti、Fe具有較強的吸收作用;通過主成分分析可篩選出Eu、Nd、Pr、Gd、Ge、V、Tb、Be、Sm、La、Ca、Sn、Nb、Lu、Tm、Yb、Pb、Zn、Mn、Bi和P作為區(qū)分紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞的特征元素。建立了紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞的無機元素特征譜。

    該試驗采用統(tǒng)計學方法探討了紅枸杞、黑枸杞和黃枸杞中無機元素含量差異,為后期中藥材功能篩選等方面提供數(shù)據(jù)支撐,也可為醫(yī)藥用枸杞中礦物資源提供了參考。

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