不同加工方法對(duì)骨碎補(bǔ)質(zhì)量影響研究

楊 潤(rùn)，王 亮，謝 宇，羅 君，薛鑫宇，張麗艷*

(1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽(yáng) 550025；2.貴州廣濟(jì)堂藥業(yè)有限公司，貴州 貴陽(yáng) 550014；3.貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550001)

骨碎補(bǔ)為水龍骨科植物槲蕨Drynariafortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根莖，味苦性溫，歸肝、腎經(jīng)，具有內(nèi)服療傷止痛、補(bǔ)腎強(qiáng)骨，外用消風(fēng)祛斑的功效[1]，化學(xué)成分為黃酮類、苯丙素類、木脂素、三萜類等，其主要活性成分為黃酮類中柚皮苷[2-4]。由于骨碎補(bǔ)生品藥材表面密被鱗片和絨毛，這不利于煎煮或粉碎以及有效成分溶出，目前臨床上常采用砂燙法炮制骨碎補(bǔ)后入藥。對(duì)于骨碎補(bǔ)砂燙炮制后的含量有無(wú)影響，近年來(lái)，大量研究學(xué)者對(duì)骨碎補(bǔ)藥材炮制前后進(jìn)行了有效成分溶出以及含量對(duì)比研究，證實(shí)了骨碎補(bǔ)炮制后可提高其總黃酮中柚皮苷的含量[5-9]。由于骨碎補(bǔ)在存放過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生一定的雜質(zhì)，這可能會(huì)影響其有效成分的溶出和含量的變化。為進(jìn)一步探究骨碎補(bǔ)生品與炮制品中雜質(zhì)對(duì)有效成分溶出和含量的影響，本研究通過(guò)測(cè)量不同產(chǎn)地骨碎補(bǔ)未去毛生品、去毛生品、未去毛炮制品、去毛炮制品的水分、總灰分、醇溶性浸出物、柚皮苷的含量，并對(duì)其進(jìn)行對(duì)比分析研究，從而保證骨碎補(bǔ)質(zhì)量的提升，為臨床選擇性用藥提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

蒸發(fā)皿、具塞錐形瓶、坩堝、干燥器、SX-4-10型箱式電阻爐控制箱(天津市泰斯特儀器有限公司)；ABZ04-S型電子天平(上海梅特勒有限公司)；DK-98-I型數(shù)顯恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海賀德實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；粉碎機(jī)(武義海納電器有限公司)；電熱爐(方科儀器有限公司)等。

1.2 試藥

柚皮苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，含量：93.4%，批號(hào)：110722-200309)；骨碎補(bǔ)藥材自采于貴州省惠水縣、長(zhǎng)順縣、平壩縣、納雍縣、三都縣、荔波縣、獨(dú)山縣、凱里市、望謨縣、冊(cè)亨縣，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)魏升華教授鑒定，骨碎補(bǔ)為水龍骨科植物槲蕨Drynariafortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 水分及總灰分測(cè)定

取各產(chǎn)地骨碎補(bǔ)生品及炮制品，對(duì)其進(jìn)行去除磷毛、絨毛處理，并將其分為去毛、未去毛生品和去毛、未去毛炮制品各四組，各組取粉末2.0 g(過(guò)二號(hào)篩)，精密稱定，按2015版《中國(guó)藥典》四部通則0832水分測(cè)定法項(xiàng)下烘干法和通則2302進(jìn)行測(cè)定。每個(gè)產(chǎn)地平行測(cè)定2份，結(jié)果見(jiàn)表1、表2、表3、表4。對(duì)比分析結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。

表1 不同產(chǎn)地未去毛生品水分、總灰分和醇溶性浸出物測(cè)定 (n=2，%)

表2 不同產(chǎn)地去毛生品水分、總灰分和醇溶性浸出物測(cè)定 (n=2，%)

表3 不同產(chǎn)地未去毛炮制品水分、總灰分和醇溶性浸出物測(cè)定 (n=2，%)

表4 不同產(chǎn)地去毛炮制品水分、總灰分和醇溶性浸出物測(cè)定 (n=2，%)

圖1 各組水分測(cè)量結(jié)果對(duì)比分析

圖2 各組總灰分測(cè)量結(jié)果對(duì)比分析

2.2 浸出物測(cè)定

按照“2.1”項(xiàng)下進(jìn)行處理分組，各組取骨碎補(bǔ)粉末2.0 g(過(guò)二號(hào)篩)，精密稱定，按2015版《中國(guó)藥典》四部通則2201醇溶性浸出物測(cè)定法中熱浸法(稀乙醇作為溶劑)進(jìn)行測(cè)定。每組平行測(cè)定2份，結(jié)果見(jiàn)表1、表2、表3、表4。對(duì)比分析見(jiàn)圖3。

圖3 各組醇溶性浸出物測(cè)量結(jié)果對(duì)比分析

2.3 柚皮苷含量測(cè)定

按照“2.1”項(xiàng)下進(jìn)行分組處理骨碎補(bǔ)，參照2015年版《中國(guó)藥典》一部項(xiàng)下“骨碎補(bǔ)”中柚皮苷的含量測(cè)定方法，采用高效液相色譜法測(cè)定藥材中柚皮苷含量。

2.3.1 色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-醋酸-水(35∶4 ∶65)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為283 nm，進(jìn)樣量為10 μL，柱溫為30 ℃，流速為1.0 mL·min-1。理論板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000?？瞻兹軇?、對(duì)照品和供試品溶液的HPLC色譜見(jiàn)圖4(選取貴州貴陽(yáng)產(chǎn)地)，測(cè)量結(jié)果見(jiàn)表5，對(duì)比分析見(jiàn)圖5。

圖4 空白溶劑(A)、對(duì)照品溶液(B)及未去毛生品供試品溶液(C)、去毛生品供試品溶液(D)、未去毛炮制品供試品溶液(E)、去毛炮制品供試品溶液(F)HPLC(1為柚皮苷)

2.3.2 對(duì)照品溶液制備 取柚皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含柚皮苷60 μg的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液制備 每組精密稱取各產(chǎn)地藥材粉末0.25 g，置于錐形瓶中，加甲醇30 mL，加熱回流3 h，放冷，濾過(guò)，濾液置50 mL量瓶中，用少量甲醇分次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

表5 各組橙皮苷測(cè)量結(jié)果 (%)

圖5 各組柚皮苷含量測(cè)量結(jié)果對(duì)比分析

3 討論

不同加工方法處理后，骨碎補(bǔ)的水分、總灰分、醇溶性浸出物、柚皮苷的測(cè)定結(jié)果均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定[1]。

由于骨碎補(bǔ)生品上密被的鱗片和附著的絨毛吸水性較強(qiáng)，未去毛生品水分均高于去毛生品；與此同時(shí)骨碎補(bǔ)砂燙撞去毛后，飲片處于膨脹狀態(tài)，外層無(wú)保護(hù)作用，比較容易吸潮，這才使得未去毛炮制品的水分均低于去毛炮制品。此外，未去毛樣品的總灰分含量均高于去毛樣品，這可能是由于骨碎補(bǔ)表面密被的鱗片和絨毛易吸附沙粒、泥土等雜質(zhì)所導(dǎo)致的。

在醇溶性浸出物測(cè)量時(shí)，對(duì)乙醇的濃度進(jìn)行了考察?？疾炝?5%、80%、70%和60%乙醇作為提取溶劑來(lái)測(cè)浸出物的含量，結(jié)果以70%乙醇作為提取溶劑時(shí)，醇溶性浸出物的含量最高，因此選70%乙醇作為提取溶劑。此外四組藥材醇溶性浸出物測(cè)量結(jié)果顯示，各組去毛藥材均高于未去毛藥材。

在供試品溶液制備中考察了甲醇的濃度，考察了70%、60%甲醇和稀甲醇進(jìn)行回流提取，以出峰量為指標(biāo)，結(jié)果以70%甲醇提取時(shí)，出峰量最多，故選70%甲醇為提取溶劑。同時(shí)四組藥材的柚皮苷含量測(cè)定結(jié)果表明，各組未去毛藥材均低于去毛藥材。

綜上所述，可確定骨碎補(bǔ)表面密被的鱗片和絨毛易吸附雜質(zhì)。在臨床用藥時(shí)，應(yīng)選擇砂燙撞去毛的骨碎補(bǔ)入藥。