氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析消瘤藤中揮發(fā)油成分

陳 宇 鐘盈盈 劉佳明 盧森華 丘一仙

廣西壯族自治區(qū)玉林市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，廣西 玉林 537000

消瘤藤為虎耳草科植物星毛冠蓋藤(PileostegiatomentellaHand.Mazz)的根，在《中華本草》[1]，《廣西藥用植物名錄》[2]《廣西植物志》[3]等專(zhuān)著均將其收載，具有祛風(fēng)除濕、消腫解毒、散瘀止痛的功效，臨床常應(yīng)用于腰腿疼痛、風(fēng)濕麻木、癰腫瘡毒，外用治跌打損傷、外傷出血、骨折[1-3]。現(xiàn)代藥理研究[4-5]表明消瘤藤提取物具有很大的潛在抗癌活性。有關(guān)化學(xué)成分方面研究的文獻(xiàn)報(bào)道有陸國(guó)壽[6]、王云卿等[7]從消瘤藤中分離得到25個(gè)化合物，其中包括蒲公英賽醇、3β-乙酰氧基-烏蘇酸、7-羥基-8-甲氧基香豆素、茵芋苷、7-羥基香豆素等成分。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，當(dāng)前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)消瘤藤的揮發(fā)油成分研究的報(bào)道，因此，本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)消瘤藤的揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析，為其藥材資源的開(kāi)發(fā)、化學(xué)成分分析及合理用藥方面提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 7890A-5975C 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)Agilent公司)、揮發(fā)油提取器、ML3002電子分析天平(瑞士METTLER TOLEDO公司)。

1.2 材料 實(shí)驗(yàn)所用消瘤藤樣品采自廣西金秀縣，經(jīng)玉林市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心中藥室黎小偉主任中藥師鑒定為虎耳草科植物星毛冠蓋藤(Pileostegia tomentella Hand.Mazz)。無(wú)水硫酸鈉(分析純，廣東光華科技股份有限公司)、乙酸乙酯(色譜純，默克股份兩合公司)，水為三級(jí)水。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備 稱(chēng)取消瘤藤樣品約150 g，剪碎，置2000 mL圓底燒瓶中，加10倍量純凈水，浸泡1 h后按2015年版《中國(guó)藥典》四部通則“2204揮發(fā)油測(cè)定法”下甲法測(cè)定，提取前于揮發(fā)油測(cè)定器上端加入約2 mL乙酸乙酯，提取6 h，靜置，補(bǔ)足乙酸乙酯至體積為2 mL。取乙酸乙酯層，以無(wú)水硫酸鈉干燥，取上清液，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，作為供試品溶液，備用[8]。

2.2 GC-MS分析條件

2.2.1 GC條件 石英毛細(xì)管柱DB-1MS毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，載氣為He(≥99.99%)，流速為1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量為1 μL，分流比為50∶1，進(jìn)樣口溫度為220 ℃，程序升溫：起始溫度60 ℃，保持1 min，以5 ℃·min-1升至250 ℃，保持5 min。溶劑延遲3.0 min。

2.2.2 MS條件 采用EI電離模式，電子能量為70 eV，離子源溫度為230 ℃，四級(jí)桿溫度為150 ℃，質(zhì)譜接口溫度為280℃，全掃描(Scan)采集模式，質(zhì)量范圍m/z 50～400 amu，掃描間隔0.2 s。

2.3 測(cè)量方法 取“2.1”項(xiàng)下制備的供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下的條件設(shè)置GC-MS分析參數(shù)，吸取1 μL進(jìn)樣，記錄總離子流圖，在Nist.08標(biāo)準(zhǔn)普庫(kù)中進(jìn)行檢索，確定各色譜峰代表的化學(xué)成分[9]。

2.4 化合物定性分析 圖1為消瘤藤揮發(fā)油總離子流圖，譜圖在MassHunter工作站經(jīng)Nist.08譜庫(kù)自動(dòng)檢索和解析，采用峰面積歸一法測(cè)定各化學(xué)成分在揮發(fā)油中的相對(duì)百分含量。鑒別出消瘤藤揮發(fā)油成分匹配度大于80的有27個(gè)成分，占總揮發(fā)油的87.73%，相對(duì)含量大于2%的有：棕櫚酸(46.96%)、亞油酸(16.02%)、反油酸(5.12%)、順-9-六癸酸(2.75%)、肉豆蔻酸(2.25%)、正十五酸(2.24%)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 消瘤藤揮發(fā)油成分分析結(jié)果

續(xù)表1表1 消瘤藤揮發(fā)油成分分析結(jié)果

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)采用水蒸氣蒸餾法對(duì)消瘤藤揮發(fā)油成分進(jìn)行分析鑒定及相對(duì)含量測(cè)定，由于消瘤藤中揮發(fā)油成分相對(duì)含量不高，完全按2015年版《中國(guó)藥典》四部通則“2204揮發(fā)油測(cè)定法”下甲法測(cè)定，無(wú)法收集足夠供試品溶液，因此在揮發(fā)油測(cè)定器上端加入約2mL乙酸乙酯，使揮發(fā)油成分溶于乙酸乙酯中，以利于分析。消瘤藤主要成分為棕櫚酸(46.96%)、亞油酸(16.02%)和反油酸(5.12%)等，化學(xué)成分類(lèi)型主要是脂肪族類(lèi)、芳香族類(lèi)、萜類(lèi)。近期有報(bào)道棕櫚酸用于乳腺癌、結(jié)腸癌和宮頸癌的研究[10]，早有研究表明亞油酸具有抗炎、抗氧化作用，范榮等[11]報(bào)道了反油酸用于人神經(jīng)母細(xì)胞瘤的研究，可見(jiàn)瑤藥消瘤藤用于治療腫瘤可能與其揮發(fā)油中所含的脂肪酸含量有關(guān)，與蒲公英賽醇、3β-乙酰氧基-烏蘇酸、7-羥基-8-甲氧基香豆素、茵芋苷、7-羥基香豆素本等其他活性成分[6-7]起協(xié)同作用。本研究可為建立消瘤藤揮發(fā)油提取方法提供參考，為闡述消瘤藤的藥效奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。