斯里蘭卡姜黃中α-姜黃烯含量測(cè)定的方法學(xué)研究

楊 瀚，白雪飛，楊麗英，聶 揚(yáng)，彭紅芳，鄭取韜,3，金 玲,3，高 嵐，郭利群

(1．云南省科學(xué)技術(shù)院 云南現(xiàn)代民族藥工程技術(shù)研究中心，云南 昆明 650106；2.國(guó)家中藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心 云南民族藥分中心，云南 昆明 650106；3.楚雄醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校 藥學(xué)系，云南 楚雄 675005)

斯里蘭卡具有資源豐富性、生態(tài)環(huán)境獨(dú)特性和大健康文化特有性的特點(diǎn).斯里蘭卡人的餐桌離不開咖喱，而咖喱的主要成分之一就是姜黃.

姜黃(CurcumalongaL.)為姜科(Zingiberaceae)植物姜黃(CurcumalongaL)的根莖，又名：郁金、寶鼎香等.味辛、苦，溫.歸脾、肝經(jīng)，有破血行氣、通經(jīng)止痛的功效[1].姜黃的揮發(fā)油種含有多種化學(xué)成分，主要為單萜、倍半萜類化合物[2].藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明姜黃類藥物對(duì)急性心肌缺血具有協(xié)同保護(hù)作用[3-4]，其提取物具有抗腫瘤活性[5].而姜黃揮發(fā)油對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌具有較好的抑制作用[6].同時(shí)姜黃又可作烹調(diào)配料或制成醬菜、糖姜.莖、葉、根莖均可提取芳香油，用于食品、飲料及化妝品香料中[7].

α-姜黃烯為姜黃中主要的指標(biāo)成分.文中以α-姜黃烯含量為指標(biāo)，采用氣相色譜法測(cè)定斯里蘭卡姜黃中α-姜黃烯的含量.旨在“一帶一路”政策部署下，充分將云南的地域和技術(shù)優(yōu)勢(shì)與斯里蘭卡的資源和地域優(yōu)勢(shì)相融合，為斯里蘭卡姜黃質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù).為后續(xù)大健康產(chǎn)品開發(fā)提供技術(shù)支持和保障.

斯里蘭卡姜黃樣品由云南現(xiàn)代民族藥工程技術(shù)研究中心總工程師郭毅新鑒定，標(biāo)本存放于云南現(xiàn)代民族藥工程技術(shù)研究中心標(biāo)本室，標(biāo)本號(hào)：CDYN-HS-00112-1.

1 儀器與材料

Agilengt 7890B氣相色譜儀，電子天平(賽多利斯 SI-224，d=0.1 mg)，超聲波清洗器(天津恒奧科技 HU-15-005)，α-姜黃烯標(biāo)準(zhǔn)品(EXTRASYNTHESE，批號(hào)：2016)，石油醚(60～90 ℃)：(四川西隴化工有限公司，批號(hào)：160810)，姜黃(干品)，2019年6月20日購(gòu)于斯里蘭卡).

2 方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定條件

Agilent 7890B氣相色譜儀(FID檢測(cè)器)，色譜柱：DB-1(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，進(jìn)樣口溫度250 ℃，檢測(cè)器溫度300 ℃，分流比 5∶1，氮?dú)饬魉伲? mL/min.程序升溫：初始溫度50 ℃，以50 ℃/min升溫至 165 ℃，保持 8 min.

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品儲(chǔ)備溶液配制

取α-姜黃烯標(biāo)準(zhǔn)品 20 mg，精密稱定，置于 10 mL 的容量瓶中，加石油醚定容至刻度，搖勻，即可得(質(zhì)量濃度為 2 mg/mL).

2.2.2 對(duì)照品上機(jī)溶液配制

量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液 1 mL 至 10 mL 容量瓶中，用石油醚稀釋至刻度，搖勻即可得(質(zhì)量濃度為 0.2 mg/mL).

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的配制

分別量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液10、20、40、100、250 μL于 1 mL 量瓶中，用石油醚稀釋至刻度，搖勻即可，質(zhì)量濃度分別為20、40、80、200、500 μg /mL.

2.2.4 樣品溶液的制備

稱取過(guò)2號(hào)篩的試樣約 3 g，精密稱定，置于 100 mL 具塞錐形瓶中，精確加入石油醚(60～90 ℃)25 mL，密封.置于超聲提取器內(nèi)(提取溫度25 ℃)提取 30 min，靜置 10 min，取上清液用 0.45 μm 濾膜濾過(guò)，即得.

3 方法學(xué)考察

3.1 線性關(guān)系與線性范圍考察

取配置好的對(duì)照品溶液，進(jìn)樣 1 μL.以峰面積為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣(ng)量為橫坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程Y=2.339 70X+33.455 08(R= 0.996)，進(jìn)樣量在20～500 ng 范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好,結(jié)果分別見(jiàn)表1、圖1.

表1 α-姜黃烯線性關(guān)系

3.2 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品上機(jī)溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，記錄峰面積，結(jié)果見(jiàn)表2.

表2 α-姜黃烯精密度試驗(yàn)

3.3 重復(fù)性試驗(yàn)

參照樣品溶液的配制方法，制備6份樣品溶液，分別依次進(jìn)樣 1 μL.記錄α-姜黃烯的保留時(shí)間和相應(yīng)的峰面積，并計(jì)算α-姜黃烯的含量，結(jié)果見(jiàn)表3.

表3 α-姜黃烯重復(fù)性試驗(yàn)

3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

參照樣品溶液的配制方法，制備2份樣品溶液，每隔2、6、8、24 h 分別依次進(jìn)樣 10 μL.記錄α-姜黃烯的保留時(shí)間和相應(yīng)的峰面積，結(jié)果見(jiàn)表4.

表4 α-姜黃烯穩(wěn)定性試驗(yàn)

3.5 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取制備好的供試品試液，密封，在4 ℃冰箱分別擺放0、0.5、1、2、4、8、12 h 分別進(jìn)樣 1 μL.記錄α-姜黃烯的保留時(shí)間和相應(yīng)的峰面積，結(jié)果見(jiàn)表5.

表5 α-姜黃烯準(zhǔn)確度試驗(yàn)

3.6 專屬性試驗(yàn)

參照對(duì)照品溶的配制方法，配制對(duì)照品溶液1份，用配制對(duì)照品的溶劑作為溶劑空白溶液，分別進(jìn)樣，在對(duì)照品主要成分保留時(shí)間左右的位置，空白溶液相對(duì)應(yīng)的時(shí)間應(yīng)無(wú)雜質(zhì)干擾峰，結(jié)果見(jiàn)圖2、圖3、圖4.

4 提取方法的優(yōu)化

4.1 提取溶劑的影響

取斯里蘭卡姜黃樣品 5 g(精密稱定)6份，分別置于 100 mL 具塞錐形瓶中，分別加入乙醚溶液、石油醚(30～60 ℃)溶液、石油醚(60～90 ℃)各 25 mL，超聲提取 30 min(溫度25 ℃)，靜置冷卻 10 min，取上清液于 0.45 μm 濾膜過(guò)濾，即得.測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表6.

表6 提取溶劑對(duì)α-姜黃烯含量的影響

測(cè)定結(jié)果表明石油醚(60～90 ℃)溶液提取斯里蘭卡姜黃中α-姜黃烯的含量較高，故選取石油醚(60～90 ℃)溶液為提取溶劑.

4.2 稱樣量及提取溶液劑量的影響

分別精密稱定斯里蘭卡姜黃樣品3、5 g ，于 100 mL 的錐形瓶中，并編號(hào)為A、B.A精密加入石油醚溶液 25 mL；B精密石油醚溶液 50 mL，搖勻，超聲提取 30 min(25 ℃)，靜置 10 min，取上清液于 0.45 μm 濾膜過(guò)濾，即得.測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表7.

表7 稱樣量及提取溶液劑量對(duì)α-姜黃烯含量的影響 %

結(jié)果表明稱取量為 3 g，提取溶劑 25 mL 即可.

4.3 樣品浸泡提取時(shí)間的影響

稱取斯里蘭卡姜黃樣品 3 g 精密稱定6份，分別于 100 mL 的錐形瓶中，精密加石油醚溶液 25 mL，搖勻，浸泡0、30 min、1、2、3、4 h、過(guò)夜，超聲提取 30 min，靜置 10 min，取上清液于 0.45 μm 濾膜過(guò)濾，即得.分別精密吸取對(duì)照品溶液、各樣品溶液 1 μL 注入氣相色譜儀測(cè)定.結(jié)果見(jiàn)表8.

表8 樣品浸泡提取時(shí)間對(duì)α-姜黃烯含量的影響

結(jié)果表明，浸泡時(shí)間對(duì)樣品提取率沒(méi)有影響，可以不用浸泡處理.

4.4 樣品超聲提取時(shí)間的影響

稱取斯里蘭卡姜黃樣品 3 g 精密稱定5份，分別于 100 mL 的錐形瓶中，精密加石油醚溶液 25 mL，搖勻，分別超聲提取10、15、30、45、60 min，靜置 10 min，取上清液于 0.45 μm 濾膜過(guò)濾，即得.分別精密吸取對(duì)照品溶液、各樣品溶液 1 μL 注入氣相色譜儀測(cè)定.結(jié)果見(jiàn)表9.

表9 樣品超聲提取時(shí)間對(duì)α-姜黃烯含量的影響

結(jié)果表明，超聲提取時(shí)間以 30 min 為宜.

綜上所述斯里蘭卡姜黃中α-姜黃烯含量測(cè)定，取樣量為 3 g，采用油醚(60～90 ℃)作為提取溶劑，超聲提取時(shí)間 30 min.

5 結(jié)語(yǔ)

本研究建立了斯里蘭卡姜黃α-姜黃烯的含量測(cè)定方法，對(duì)線性范圍、精密度、準(zhǔn)確度等各方面進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)該方法專屬性好、實(shí)用性強(qiáng)，結(jié)果穩(wěn)定可靠.優(yōu)化提取工藝，確定取樣量為 3 g，采用油醚(60～90 ℃)作為提取溶劑，超聲提取時(shí)間 30 min 為姜黃中α-姜黃烯最佳含量測(cè)定.