紅細(xì)胞分布寬度對氣虛質(zhì)大鼠輔助診斷的評價(jià)

徐 文，鄒 明，高丕明，張紅梅，劉小莉，張 靜，郭 莉，虞亞明

(1.成都體育學(xué)院附屬體育醫(yī)院，四川 成都 610041；2.四川省骨科醫(yī)院，四川 成都 610041)

紅細(xì)胞分布寬度(RDW)是衡量紅細(xì)胞體積異質(zhì)性的指標(biāo)，主要用于貧血的鑒別診斷，由血液分析儀通過測定大量紅細(xì)胞的體積，依據(jù)其粒度分布曲線得到，將其表示為紅細(xì)胞分布寬度標(biāo)準(zhǔn)差(RDW-SD)和紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)(RDW-CV)，二者表示的臨床意義相似。但令人感興趣的是RDW也與多種疾病的發(fā)病率和死亡率緊密相關(guān)，其影響機(jī)制仍尚不清楚，推測主要是通過機(jī)體處于慢性炎癥來影響疾病的發(fā)生[1]。由于氣虛質(zhì)者氣息低弱，其可能對血液循環(huán)的推動及血液成分造成影響，通過建立脾氣虛質(zhì)大鼠模型，了解機(jī)體是否處于炎癥狀態(tài)，并試圖從常規(guī)檢查中篩選出方便、快速及廉價(jià)的指標(biāo)以輔助診斷氣虛質(zhì)體質(zhì)。

1 材料與方法

1.1 動物分組與造模于2014年12月至2016年9月選擇4周齡SPF級SD雄性大鼠60只，購于四川省達(dá)碩生物技術(shù)有限公司，許可證編號：SCXK(111)2013-24，體重(202.9±5.6)g，采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為A組(脾氣虛質(zhì)組，30只)和B組(對照組，30只)。A組大鼠：參考中醫(yī)體質(zhì)的成因，采用限制飲食結(jié)合干擾睡眠的方法，建立大鼠脾氣虛質(zhì)模型[2～4]。采用無鼠糧供給2 d、足量鼠糧供應(yīng)1 d的方式進(jìn)行干預(yù)，鼠糧投放及撤除時(shí)間均為每日早8：30。飲用水(本院純凈水)始終足量供應(yīng)。每日測量剩余食/水量，食/水量均值=(投放量-剩余量)/大鼠只數(shù)。睡眠剝奪，將大鼠置于跑臺跑道內(nèi)，設(shè)置跑臺速度為1 m/min左右，緩慢移動形成不穩(wěn)定平面，大鼠不能長時(shí)間靜止站立不動或趴下，無法睡眠，每次24 h，隔日1次。每7 d觀察1次大鼠體表特征，測量1次大鼠體重、腋溫、攝食量、飲水量、抓力，體溫及抓力連續(xù)測量3次取平均值，造模干預(yù)時(shí)間為28 d，B組大鼠正常飼養(yǎng)，成功建立大鼠脾氣虛質(zhì)模型[4]。

1.2 標(biāo)本收集與處理造模完成后，10%(0.15 ml/100 g)水合氯醛于腹腔注射施行麻醉后，在心臟處行負(fù)壓采血。EDTA.2k抗凝管采血2 ml，日本Sysmex XN1000血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀于2小時(shí)內(nèi)完成全血細(xì)胞計(jì)數(shù)[19]，獲得RDW-CV和Hb。無添加劑采血管采血4 ml，各組大鼠TNF-α、IL-1β水平測定使用深圳欣博盛生物科技有限公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒，用奧地利anthos2010酶標(biāo)儀進(jìn)行測定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS 19.0和MedCalc19.0.2軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較用t檢驗(yàn)。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MedCalc19.0.2受試者工作特征曲線(ROC)評價(jià)觀察指標(biāo)的診斷性能，曲線下面積(AUC)比較采用Delong檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組各檢測指標(biāo)比較A組TNF-α、RDW-CV及IL-1β明顯高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05)，但兩組Hb比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)，見表1。

表1 兩組各實(shí)驗(yàn)檢測指標(biāo)比較

2.2 RDW-CV、TNF-α及IL-1β單獨(dú)用于氣虛質(zhì)大鼠的診斷價(jià)值RDW-CV診斷氣虛質(zhì)大鼠的AUC最大，明顯高于IL-1β及TNF-α(P< 0.05)，而IL-1β和TNF-α間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)，當(dāng)RDW-CV的最佳截?cái)嘀禐?7.6%(95%CI：17.6%～18.7%)時(shí)，敏感性為80%，特異性為80%，陽性預(yù)測值為80%，陰性預(yù)測值為80%，見圖1、表2。

圖1 RDW-CV、TNF-α及IL-1β單獨(dú)診斷氣虛質(zhì)的ROC

表2 各指標(biāo)單獨(dú)檢測時(shí)診斷分析

2.3 RDW-CV與TNF-α及IL-1β聯(lián)合用于氣虛質(zhì)大鼠的診斷價(jià)值聯(lián)合檢測時(shí)，RDW-CV與TNF-α及IL-1β分別進(jìn)行兩項(xiàng)及三項(xiàng)聯(lián)合檢測，單獨(dú)檢測時(shí)與兩項(xiàng)、三項(xiàng)聯(lián)合檢測相比及兩項(xiàng)與三項(xiàng)聯(lián)合檢測相比，各組AUC差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P> 0.05)。見圖2、表3。

表3 RDW-CV與TNF-α及IL-1β聯(lián)合檢測時(shí)診斷分析

圖2 RDW-CV與其它指標(biāo)聯(lián)合檢測的ROC

3 討論

RDW是反應(yīng)紅細(xì)胞大小異質(zhì)性的參數(shù)，而紅細(xì)胞大小易受季節(jié)、衰老及運(yùn)動等生理因素的影響。但當(dāng)機(jī)體有缺鐵、缺乏維生素B12和葉酸、溶血和輸血等影響紅細(xì)胞大小的病理因素時(shí)，因血流中釋放的紅細(xì)胞比正常人更不成熟，可導(dǎo)致RDW增加。其在臨床主要應(yīng)用于貧血的鑒別診斷及療效觀察，但最近累積的研究證據(jù)表明RDW在糖尿病[5，6]、血糖不良控制[7]、高血壓[1，8]、心血管事件[9～11]、心力衰竭[12]和髖部骨折[13]等多種疾病的診斷和與疾病短期和長期預(yù)后的預(yù)示中是一個(gè)有價(jià)值指標(biāo)。目前認(rèn)為RDW對疾病的影響是因機(jī)體處于慢性炎癥的狀態(tài)，特別是通過炎癥細(xì)胞因子的存在和高氧化應(yīng)激來影響機(jī)體的發(fā)病，甚至Bilal[1]、 Hassan[14]等認(rèn)為RDW升高本身就是慢性炎癥的標(biāo)志物之一，慢性炎癥可能導(dǎo)致RDW升高，而RDW水平升高可能反映潛在的慢性炎癥。而人體健康涉及多方面，由于醫(yī)學(xué)發(fā)展，現(xiàn)在已非常強(qiáng)調(diào)在機(jī)體處于已有病因但尚未發(fā)病的疾病前期時(shí)即對機(jī)體采取干預(yù)措施。即使對已發(fā)生疾病也強(qiáng)調(diào)同病異治，異病同治，這要求臨床醫(yī)生必須正確了解機(jī)體處于何種狀態(tài)，即辨清體質(zhì)，強(qiáng)調(diào)因人而異的重要性。體質(zhì)是客觀存在的生命現(xiàn)象，個(gè)體間有不同的差異，不同的體質(zhì)對疾病的易感性不一，這與機(jī)體先天遺傳和后天獲得有關(guān)，但這種差異性是可分可調(diào)的。王琦[15]將體質(zhì)劃分為9類，認(rèn)為氣虛質(zhì)是由于元?dú)獠蛔悖詺庀⒌腿?、機(jī)體、臟腑功能狀態(tài)低下為主要特征的一種體質(zhì)狀態(tài)，有肌肉不健壯，性格內(nèi)向等表現(xiàn)，為先天本弱，后天失養(yǎng)或病后氣虧所致，不利于機(jī)體血液循環(huán)推動。

TNF-α是重要的促炎細(xì)胞因子，可由巨噬細(xì)胞，NK細(xì)胞等產(chǎn)生，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，通過參與血管擴(kuò)張和水腫的形成，白細(xì)胞粘附，促進(jìn)炎癥部位的氧化應(yīng)激等方式參與炎癥[16]。IL-1也是一種典型的促炎細(xì)胞因子，有IL-1α和IL-1β兩種形式，它們的生物活性相似，常與另一種促炎細(xì)胞因子腫瘤壞死因子協(xié)同作用。IL-1β由巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞及上皮細(xì)胞等分泌的，可以旁分泌的方式或系統(tǒng)地發(fā)揮作用，有多重作用，可參與T細(xì)胞、NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活話，誘導(dǎo)急性期反應(yīng)蛋白、發(fā)熱而發(fā)揮有效促炎活性，生物活性由于其功能的強(qiáng)大和廣泛，其合成、加工、分泌和活性是受到嚴(yán)格調(diào)控的，在正常條件下，在低水平表達(dá)[17]。

本研究發(fā)現(xiàn)脾氣虛質(zhì)大鼠TNF-α、IL-1β明顯高于對照組，表明機(jī)體處于炎癥狀態(tài)，已有研究表明機(jī)體RDW升高與高敏C反應(yīng)蛋白、紅細(xì)胞沉降率等炎癥標(biāo)志物強(qiáng)相關(guān)。因而RDW-CV水平升高與炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β表達(dá)水平升高相關(guān)。炎性細(xì)胞因子的過高表達(dá)，可通過調(diào)節(jié)紅細(xì)胞生成，包括抑制紅細(xì)胞成熟、鐵代謝受損以及抑制促紅細(xì)胞生成素的產(chǎn)生或反應(yīng)及增加細(xì)胞凋亡等損害紅細(xì)胞的存活，導(dǎo)致未成熟紅細(xì)胞過早的進(jìn)入血液循環(huán)，使得RDW增加[6]。本研究通過限制大鼠飲食的方法來構(gòu)建脾氣虛質(zhì)模型，可能會引起對脾氣虛質(zhì)大鼠的營養(yǎng)攝入而致貧血進(jìn)而影響RDW-CV，因而將氣虛質(zhì)與對照組的血紅蛋白的含量進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)二者的含量并未出現(xiàn)明顯變化，也進(jìn)一步表明其RDW的升高與貧血沒有相關(guān)性，是因機(jī)體炎性因子升高所致，與Hassan等[14]排除貧血患者后發(fā)現(xiàn)RDW的升高與炎癥因子的升高相關(guān)一致。

正常血液不停地周流于全身，運(yùn)載營養(yǎng)及代謝物質(zhì)，使得各組織和器官血液供應(yīng)得有效保證。要保證血液循環(huán)正常流動則需機(jī)體能提供充足動力，祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為氣為血帥，血為氣母，氣行則血行，氣虛則血行無力[18]。氣虛質(zhì)實(shí)因元?dú)獠蛔闼?，若需元?dú)獬渑鎰t需后天之精氣不斷滋養(yǎng)。機(jī)體若要獲得充足之精氣來維持元?dú)獬渑?，則需主運(yùn)化之脾功能正常，因其有運(yùn)化水谷精微功能，為氣血生化之源，為化生精、氣、血、津液提供足夠動力。脾氣虛質(zhì)者則氣血無源，脈中氣虛血少，血行也難以正常，可致組織、器官的血、氧供應(yīng)不足和代謝障礙，其RDW-CV的升高可能代表多種生理機(jī)制的綜合指標(biāo)，即慢性炎癥、更大的氧化應(yīng)激、營養(yǎng)不足、器官供血供氧不足等共同作用[7，10，11]。對于治未病，包括未病先防均需先辨清體質(zhì)，而氣虛質(zhì)的辨識現(xiàn)多依據(jù)相關(guān)臨床的主觀表現(xiàn)，如何通過實(shí)驗(yàn)室的客觀指標(biāo)快速有效進(jìn)行定量判斷仍尚缺乏。本研究顯示，單獨(dú)檢測時(shí)，RDW-CV較TNF-α、IL-1β有更好的診斷效能。為提高RDW-CV在氣虛質(zhì)大鼠中的診斷性能，通過與TNF-α、IL-1β進(jìn)行兩項(xiàng)和三項(xiàng)聯(lián)合檢測，并不能明顯提高診斷性能。而RDW可通過自動血細(xì)胞計(jì)數(shù)很方便、快捷的獲得，是一個(gè)廉價(jià)、常規(guī)可用的實(shí)驗(yàn)室參數(shù)，從檢測的便捷性、檢測成本及診斷性能等方面綜合考慮，在氣虛質(zhì)診斷時(shí)，RDW可作為臨床診斷中較好的客觀輔助指標(biāo)。本研究顯示，RDW可以作為脾氣虛質(zhì)風(fēng)險(xiǎn)辨識的標(biāo)記物，在機(jī)體向疾病轉(zhuǎn)化，出現(xiàn)臨床癥狀前可以盡早發(fā)現(xiàn)，進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估并積極采取干預(yù)措施進(jìn)行體質(zhì)調(diào)節(jié)，防止機(jī)體向疾病轉(zhuǎn)化，對治未病具有十分重要的意義。

綜上所述，RDW與氣虛質(zhì)有直接關(guān)系，其升高與機(jī)體處于炎癥狀態(tài)相關(guān)。作為一項(xiàng)相對容易獲得的測試，它可以作為一個(gè)早期預(yù)警指標(biāo)，供臨床醫(yī)生用來識別氣虛質(zhì)，為調(diào)節(jié)體質(zhì)，防疾病過早出現(xiàn)提供客觀的輔助診斷，但因本研究是在脾氣虛質(zhì)大鼠中進(jìn)行的觀察，臨床應(yīng)用及其升高機(jī)制需要進(jìn)一步的在大樣本的人群中進(jìn)行觀察。