MACC1基因在乳腺癌中的表達及其臨床意義

郭宏艷，何利珍，張 虹，成 慧，張云霏，楊國嶸，安文文

(1.西北民族大學附屬醫(yī)院·甘肅省第二人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000；2.廣州醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院病理科，廣東 廣州 510000；3.解放軍第一醫(yī)院病理科，甘肅 蘭州 730030)

乳腺癌是嚴重危害廣大婦女身心健康和生命的重大疾病，發(fā)病率居歐美女性惡性腫瘤首位。乳腺癌在我國的發(fā)病率是41.64/10萬，位居女性癌癥首位[1]，且其發(fā)病率呈明顯的逐年上升趨勢。本研究運用免疫組織化學方法檢測MACC1在乳腺癌中的蛋白表達水平，分析MACC1蛋白表達在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其與臨床病理特征之間的關系，為臨床早期診斷、早期治療乳腺癌提供可行的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料收集甘肅省第二人民醫(yī)院病理科2016年1月至2018年12月乳腺活檢及乳腺癌根治手術標本110例，其中乳腺良性上皮增生40例，乳腺癌70例。乳腺良性上皮增生組包括普通型導管增生(UDH)20例、非典型性導管增生(ADH) 20例；乳腺癌組包括導管原位癌(DCIS)15例、乳腺浸潤性導管癌(IDC)淋巴結轉移陰性26例及淋巴結轉移陽性29例。所選病例均為女性，年齡25～78歲[(47.6±11.6)歲]。其中UDH及ADH取自乳腺局部切除的標本，乳腺癌病例取自根治標本，所有病人術前均未接受化療、放療及其它輔助治療。

1.2 方法所有組織均調(diào)取存檔相關切片及蠟塊，由一位副主任醫(yī)師及一位主任醫(yī)師復診所有病例的HE切片，重新進行組織學分類和分級。其中，組織學分級：Ⅰ級2例，Ⅱ級29例，Ⅲ級24例；腫瘤直徑>2 cm者37例，≤2 cm者18例。所有標本經(jīng)10%甲醛固定后，用石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片備用，進行EnVision免疫組織化學法檢測。濃縮型兔抗人多克隆抗體MACC1購自美國Sigma公司，常規(guī)石蠟切片脫蠟至水，3% H2O2去離子水室溫孵育10分鐘，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗3次，每次2分鐘；再滴加10%正常山羊血清，室溫孵育10 min，以消除非特異性染色，滴加稀釋至1∶200 MACC1抗體，置于4 ℃冰箱過夜，次日用PBS沖洗3次，每次2分鐘，然后滴加聚合物輔助劑(Polymer Helper)，室溫孵育20分鐘，PBS沖洗沖洗3次，每次2分鐘，再滴加辣根酶標記羊抗兔/小鼠IgG聚合物，室溫孵育30分鐘，PBS沖洗3次，每次2分鐘，DAB顯色，顯微鏡下觀察5分鐘，蒸餾水沖洗、復染、脫水、透明、封片。以PBS緩沖液置換一抗作為陰性對照，用已知MACC1陽性的切片作為陽性對照。

1.3 結果判斷MACC1蛋白產(chǎn)物主要表達在胞漿，少數(shù)可在細胞核表達，胞漿或胞核染色呈黃色或棕褐色者視為陽性細胞，根據(jù)陽性細胞百分率和染色程度進行半定量分析。染色強度評分：無色=0；淡黃色=1；棕黃色=2；棕褐色=3。在高倍視野下隨機計數(shù)500個腫瘤細胞中陽性細胞所占的比例，劃分3級，未見陽性表達或陽性細胞數(shù)<5%為陰性(-)=0；5%≤陽性細胞數(shù)<30%為陽性(+)=1；30%≤陽性細胞數(shù)<60%為中度陽性(++)=2；≥60%的為強陽性(+++)=3。兩種評分結果相加后劃分為4級：0～1分，陰性；2分“+”，弱陽性；3～4分“++”，中度陽性；5～6分“+++”，強陽性(過表達)。

1.4 統(tǒng)計學方法采用SPSS 13.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料組間比較采用采用χ2檢驗。P< 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同乳腺病變組織中MACC1蛋白的表達乳腺癌組織中MACC1表達率與乳腺上皮增生組織比較，差異有統(tǒng)計學意義(P< 0.05)。見表1、圖1。

表1 不同乳腺組織中MACC1的表達[n(%)]

圖1 不同乳腺組織中MACC1的表達 (EnVision免疫組化法)a：UDH組織中陰性表達，×10；b：ADH1組織中MACC1陰性表達，×20；c：DCIS組織中MACC1弱陽性表達，×10；d：DCIS組織中弱陽性表達，×20；e：淋巴結轉移陰性的IDC組織中陽性(2+)表達，×20；f：淋巴結轉移陽性的IDC組織中MACC1強陽性(3+)表達，×20

2.2 不同臨床病理特征組間MACC1蛋白表達的比較乳腺癌患者不同年齡MACC1表達率比較，差異無統(tǒng)計學意義(P> 0.05)； 不同腫瘤直徑、病理分級和淋巴結是否轉移的患者之間，MACC表達不同，差異有統(tǒng)計學意義(P< 0.05)。見表2。

表2 不同臨床病理特征組間MACC1蛋白表達的比較 [n(%)]

3 討論

Stein等[2]2009年從結腸癌細胞cDNA文庫中克隆出來一個新基因，命名為MACC1，MACC1位于人類7號染色體上(7p21.1)，由7個外顯子和6個內(nèi)含子構成，其cDNA序列含有2559個核苷酸，編碼一個含有852個氨基酸殘基組成的結合蛋白。Harpaz等研究發(fā)現(xiàn)MACC1基因具有多種單核苷酸多態(tài)性[3]。還有研究發(fā)現(xiàn)MACC1在肝細胞生長因子/肝細胞生長因子受體(HGF/C-met)信號轉導通路中是一個關鍵的調(diào)節(jié)因子，在結腸癌侵襲和轉移中起著重要作用，MACC1可明顯上調(diào)C-met蛋白的表達，極大促進了腫瘤細胞的化學趨向性和侵襲性，增強了腫瘤細胞的遷移蠕動功能[4，5]。此外，在體外實驗中發(fā)現(xiàn)，MACC1可通過激活HGF/C-met信號通路，從而導致結腸癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力的增強，而且在動物模型中引起結腸癌細胞移植瘤的肝轉移和肺轉移表現(xiàn)[4]。也有研究發(fā)現(xiàn)MACC1在結腸癌原發(fā)灶和轉移灶中的表達水平顯著高于結腸黏膜和結腸腺瘤，由此推測在良性病變過渡到惡性病變時(如結腸腺瘤向結腸癌轉變)，MACC1可能起到關鍵性作用；在沒有出現(xiàn)轉移的結腸癌患者中，MACC1表達只出現(xiàn)在腫瘤細胞漿內(nèi)，一旦MACC1表達在腫瘤細胞核內(nèi)，隨訪后發(fā)現(xiàn)均出現(xiàn)遠處轉移[6]。后續(xù)亦有報道表明，MACC1 不僅與結直腸癌轉移有關，與肝癌等也有密切關系，抑制 MACC1表達可以降低腫瘤細胞的轉移能力[7，8]。此外，MACC1還參與其他多種惡性腫瘤的發(fā)展，在胃癌、卵巢癌、肺腺癌、食管癌、前列腺癌等癌組織中過表達。

目前關于MACC1蛋白表達與乳腺癌的相關性研究相對較少。本研究結果表明MACC1 蛋白陽性表達率在乳腺癌組織中顯著高于乳腺DCIS和乳腺上皮增生組織，其陽性表達率明顯呈逐漸上升趨勢，推測MACC1蛋白高表達可能是乳腺癌發(fā)生的必要因素之一，而MACC1蛋白表達上升有可能使MACC1對腫瘤細胞生長抑制及對細胞黏附的作用減弱，使乳腺組織生長失控，從而有助于乳腺癌的發(fā)生。Ren等[9]也有類似研究，他發(fā)現(xiàn)在結直腸腺瘤發(fā)展為原位癌時MACC1表達上調(diào)，原位癌進展為早期浸潤癌時表達進一步增加，從而說明MACC1表達的逐步提高可能是結直腸癌發(fā)展的關鍵點，有可能單獨促進癌的發(fā)生和早期浸潤性生長。而Ashktorab等[10]的研究發(fā)現(xiàn)，腺瘤與癌癥患者之間 MACC1蛋白表達沒有顯著差異，而正?；颊吲c腺瘤患者之間、正常患者與癌癥患者之間的 MACC1 蛋白表達差異具有統(tǒng)計學意義，由此推斷 MACC1蛋白表達水平可以評估結腸惡性病變的潛在風險并加以預防。

此外，本研究發(fā)現(xiàn)在乳腺癌組織中MACC1蛋白表達差異與腫瘤的病灶大小、組織學分級和淋巴結轉移有關，但與患者年齡差異比較無關。乳腺癌腫瘤直徑越大，MACC1陽性表達越高；在乳腺癌高中分化組和低分化組中，分化越差，惡性度越高，MACC1表達水平越高；有淋巴結轉移的乳腺癌組織中MACC1蛋白表達率93.10%明顯高于無淋巴結轉移的乳腺癌組織中MACC1蛋白的表達率69.23%。提示MACC1蛋白的高表達可能促進了腫瘤的發(fā)生發(fā)展，參與了乳腺癌的惡性演變過程。此結果與熊晶等[11]研究結果相一致，MACC1 表達與乳腺癌患者組織學分級、TNM 分期、淋巴結轉移、腫瘤復發(fā)顯著相關。邱麗湞等[12]的研究發(fā)現(xiàn)MACC1在SW480(低轉移潛能)細胞中呈弱或中等陽性表達，在SW620(高轉移潛能)細胞中呈中等陽性或強陽性表達，提示，MACC1 蛋白高表達和腫瘤細胞的轉移有關，在促進腫瘤細胞轉移中發(fā)揮著重要作用。近年來已有研究證實MACC1表達異常與腫瘤的發(fā)生及轉移有關，其在胃癌和結直腸癌等腫瘤組織中明顯高表達，并且具有促進腫瘤細胞生長和惡性轉移的作用[13，14]。由此可見，MACC1蛋白表達與否能夠預示乳腺癌患者的預后。由于臨床分期、組織分化程度與乳腺癌預后直接相關，說明MACC1基因的高表達預示腫瘤預后不良，檢測乳腺癌患者癌組織中MACC1的表達水平有助于臨床有效評價乳腺癌的惡性程度和估計預后。

總而言之，MACC1蛋白的陽性表達及表達缺失在乳腺癌的發(fā)病中具有重要作用，可為不同人群中研究乳腺癌的病因和發(fā)病學環(huán)節(jié)提供有效的分子生物學檢測指標，同時也可為臨床診斷和治療提供重要的理論依據(jù)，有望成為檢測乳腺癌的標記物和評價其預后的指標。