上籠應(yīng)激對(duì)紹興鴨十二指腸組織結(jié)構(gòu)、抗氧化能力及基因mRNA表達(dá)量的影響

顧天天，田勇，周瑋，劉國(guó)發(fā)，陳黎，曾濤，吳信生，徐琪，陳國(guó)宏*，盧立志*

（1.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，杭州 310021；2.揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225009；3.周口桂柳種鴨育種有限公司，河南 周口 461300）

應(yīng)激是指機(jī)體對(duì)外界或內(nèi)部的各種非常刺激（如冷熱應(yīng)激、束縛、饑餓、精神刺激、過(guò)度疲勞以及感染、中毒等）所產(chǎn)生的非特異性應(yīng)答反應(yīng)的總和[1]。適當(dāng)?shù)膽?yīng)激可使機(jī)體逐步適應(yīng)環(huán)境，提高生產(chǎn)性能。如果應(yīng)激反應(yīng)過(guò)強(qiáng)或持續(xù)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)破壞穩(wěn)定的機(jī)體內(nèi)環(huán)境，造成組織和器官的病理性損傷，嚴(yán)重時(shí)引起畜禽大批量死亡，給畜牧業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。研究發(fā)現(xiàn)，在應(yīng)激狀況下，動(dòng)物機(jī)體腸道容易出現(xiàn)因缺血而導(dǎo)致的血量減少和缺氧現(xiàn)象，腸道耗氧量增加，影響腸道滲透性，進(jìn)而引起無(wú)氧代謝，導(dǎo)致局部產(chǎn)生大量酸性代謝產(chǎn)物，腸黏膜上皮細(xì)胞受損水腫，細(xì)胞壞死[2-3]。

動(dòng)物胃腸道不僅是消化吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的場(chǎng)所，而且是動(dòng)物體內(nèi)免疫器官之一。應(yīng)激過(guò)程造成的腸道氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激引起免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)、激活導(dǎo)致疾病進(jìn)一步發(fā)展。SAADET等研究證明，冷熱應(yīng)激過(guò)程可使鼠紅細(xì)胞過(guò)氧化氫酶（catalase,CAT）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活性升高，表明應(yīng)激可能破壞機(jī)體氧化與抗氧化系統(tǒng)平衡，并通過(guò)改變酶促和非酶促2大防御體系，導(dǎo)致蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物以及脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物的大量生成，進(jìn)而對(duì)機(jī)體的組織器官造成氧化損傷[4]。此外，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激啟動(dòng)的凋亡途徑是一種新的凋亡途徑，與缺氧缺血損傷時(shí)的細(xì)胞凋亡有密切關(guān)系。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucose regulated protein 78,GRP78）基因作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的中樞調(diào)節(jié)因子，是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激最敏感的標(biāo)志[5-7]。CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白（CCAAT/enhancerbinding protein-homologous protein,CHOP）基因則在應(yīng)激干擾時(shí)大量表達(dá)，與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激密切相關(guān)[5]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激也與細(xì)胞凋亡的發(fā)生有關(guān)。汪君民等研究表明，小鼠受到熱應(yīng)激處理時(shí)Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）基因mRNA表達(dá)量顯著增加，這表明在高溫?zé)釕?yīng)激過(guò)程中存在著細(xì)胞凋亡[8]。

蛋鴨籠養(yǎng)是一種新型的養(yǎng)殖模式，不僅可以從根本上解決蛋鴨產(chǎn)業(yè)的污染問(wèn)題，提高生物安全和產(chǎn)品品質(zhì)，而且可以通過(guò)實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，提高蛋鴨養(yǎng)殖效益。然而，當(dāng)?shù)傍喩L(zhǎng)至一定階段，將其轉(zhuǎn)為籠養(yǎng)方式進(jìn)行養(yǎng)殖的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈的應(yīng)激反應(yīng)。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，特別是在蛋鴨上籠養(yǎng)殖初期，由于多種環(huán)境因素改變導(dǎo)致其生長(zhǎng)緩慢、免疫力下降，甚至死亡，給養(yǎng)鴨業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重制約著蛋鴨籠養(yǎng)技術(shù)的推廣普及[9-11]。目前，對(duì)于上籠引起蛋鴨組織器官的形態(tài)學(xué)變化，國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究報(bào)道甚少。本研究以紹興鴨為動(dòng)物模型，上籠作為應(yīng)激原，從組織學(xué)、生化指標(biāo)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激基因和炎癥基因以及凋亡基因mRNA表達(dá)水平的角度，揭示上籠應(yīng)激所致的蛋鴨腸道組織器官的變化，闡明上籠應(yīng)激誘發(fā)消化道相關(guān)基因mRNA表達(dá)量變化的發(fā)生機(jī)制，為蛋鴨的規(guī)模化養(yǎng)殖和上籠應(yīng)激誘發(fā)癥的科學(xué)預(yù)防提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

試驗(yàn)選用同一條件下地面平養(yǎng)的200日齡健康紹興鴨80只，隨機(jī)分成2組：常規(guī)對(duì)照組繼續(xù)采用地面平養(yǎng)，自由采食，自由飲水；試驗(yàn)處理組轉(zhuǎn)移至層疊式籠舍進(jìn)行單籠飼養(yǎng)，籠子規(guī)格為28 cm×40 cm×40 cm，通過(guò)乳頭飲水器飲水，食槽喂食，自由采食。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品采集與處理

于上籠的第1、2、4、7、10天，在選取的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每組分別隨機(jī)抽取5只紹興鴨，采集血樣后，頸部放血處死，打開(kāi)腹腔，分離出十二指腸，在固定位置剪取2段，其中一段用無(wú)菌生理鹽水輕輕晃動(dòng)去除腸道內(nèi)容物后，剪成2份，置于液氮中保存；另一段置于4%甲醛溶液中進(jìn)行固定。本研究所用動(dòng)物按照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理審查指南》（GB/T 35892—2018）進(jìn)行飼養(yǎng)和處理。

1.2.2 組織學(xué)觀察

將固定于4%甲醛溶液中的十二指腸組織切片，依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ、無(wú)水乙醇Ⅰ、無(wú)水乙醇Ⅱ、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇中，最后用蒸餾水洗至脫水，石蠟包埋，切片，蘇木精-伊紅（HE）染色，光學(xué)顯微鏡下觀察組織切片并記錄組織學(xué)變化。

1.2.3 十二指腸抗氧化指標(biāo)測(cè)定

將采集的十二指腸樣用于測(cè)定組織總抗氧能力（total antioxidant capacity,T-AOC）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、GSH-Px、CAT活性和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。所有指標(biāo)均由北京華英生物技術(shù)研究所采用化學(xué)比色法檢測(cè)。

1.2.4 實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

采用Trizol法提取各腸組織樣總RNA，利用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)總RNA的質(zhì)量。按照Toyobo反轉(zhuǎn)錄試劑盒（Toyobo biotech公司，日本）說(shuō)明書將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。然后以cDNA為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR）。采用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)引物序列（表1），由北京擎科生物技術(shù)有限公司合成。使用SYBR Green反應(yīng)混合液試劑盒（南京諾唯贊生物科技有限公司）在LightCycler 96熒光定量PCR儀（Roche公司，瑞士）上進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)體系為:10 μL 2×AceQ熒光定量PCR SYBR Green反應(yīng)混合液，上游引物和下游引物（10 μmol/L）各0.4 μL，0.4 μL 50×ROX標(biāo)準(zhǔn)染料，100 ng cDNA模板，加ddH2O至20 μL。反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性30 s；95℃變性10 s，60℃退火及延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)。β-actin作為內(nèi)參基因，結(jié)果采用2－ΔΔCT方法計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，試驗(yàn)采用Excel 2016作圖，采用SPSS 17.0軟件中單因素方差分析的鄧肯方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 紹興鴨十二指腸組織病理學(xué)觀察

從圖1可以看出，對(duì)照組十二指腸呈現(xiàn)正常的組織結(jié)構(gòu)（圖1A～E），而上籠應(yīng)激后，隨著上籠應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，十二指腸組織表現(xiàn)出一定的組織損傷（圖1F～J），特別是在上籠應(yīng)激后期，即上籠后第4、7和10天，十二指腸組織出現(xiàn)腸腺上皮細(xì)胞脫落，并有較多的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，且隨著上籠時(shí)間的增加，腸腺上皮細(xì)胞脫落程度更加嚴(yán)重（圖1H～J）。

表1 RT-PCR引物信息Table 1 Information for RT-PCR primers

2.2 紹興鴨十二指腸組織抗氧化能力分析

籠養(yǎng)初期紹興鴨十二指腸抗氧化能力相關(guān)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖2?？梢钥闯觯篗DA含量、T-AOC、SOD和GSH-Px活性隨上籠應(yīng)激時(shí)間延長(zhǎng)呈現(xiàn)波動(dòng)性變化，且在上籠應(yīng)激試驗(yàn)后期，處理組MDA含量、SOD和T-AOC活性高于對(duì)照組，但除T-AOC外其余差異均不顯著（P＞0.05）；與對(duì)照組相比，十二指腸CAT活性隨著應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)先下降后上升再下降的變化趨勢(shì)，且在上籠后第7天顯著增加（P＜0.05）。

2.3 上籠應(yīng)激對(duì)紹興鴨十二指腸應(yīng)激相關(guān)基因mRNA表達(dá)量的影響

由圖3可知：與對(duì)照組相比，上籠應(yīng)激過(guò)程中處理組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因CHOP的mRNA水平呈現(xiàn)波動(dòng)性變化（圖3A），且在上籠應(yīng)激后第2和10天顯著增加（P＜0.05）；而處理組GRP78基因的mRNA相對(duì)表達(dá)水平在各時(shí)間點(diǎn)均高于對(duì)照組（圖3B），且在第2、7、10天顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。

2.4 上籠應(yīng)激對(duì)紹興鴨十二指腸凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)量的影響

由圖4可以看出：較對(duì)照組而言，隨著上籠應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，凋亡相關(guān)基因Bax的mRNA表達(dá)水平顯著增加（圖4A），特別是在上籠應(yīng)激后第7和10天達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；而半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶3（cysteinecontaining aspartate-specific proteases-3,Caspase3）的表達(dá)水平在兩組間無(wú)顯著變化（圖4B）。

2.5 上籠應(yīng)激對(duì)紹興鴨十二指腸炎癥相關(guān)基因mRNA表達(dá)量的影響

由圖5可知：與對(duì)照組相比，隨著上籠應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，炎癥相關(guān)基因環(huán)氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）的mRNA表達(dá)量增加（圖5A），特別是在上籠應(yīng)激后第10天時(shí)與對(duì)照組相比達(dá)到顯著水平（P＜0.05）。而一氧化氮合酶（inducible nitric oxide,iNOS）的mRNA表達(dá)量變化趨勢(shì)與COX-2不同：在上籠應(yīng)激早期，試驗(yàn)組iNOSmRNA表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），而在上籠應(yīng)激后期，iNOSmRNA表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）（圖5B）。

3 討論

3.1 上籠應(yīng)激對(duì)紹興鴨十二指腸組織結(jié)構(gòu)的影響

圖1 上籠應(yīng)激對(duì)紹興鴨十二指腸組織結(jié)構(gòu)的影響Fig.1 Effect of caged stress on the structure of duodenum in Shaoxing duck

十二指腸是消化道內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收和眾多消化酶活動(dòng)的重要場(chǎng)所，所以良好的十二指腸結(jié)構(gòu)和功能是保證動(dòng)物正常生長(zhǎng)和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的基本條件。本試驗(yàn)研究了上籠應(yīng)激對(duì)十二指腸組織結(jié)構(gòu)的影響。與對(duì)照組相比，隨著上籠應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，試驗(yàn)組在上籠應(yīng)激的后期，其組織結(jié)構(gòu)受到一定程度的損傷。胡艷欣等[12]報(bào)道，熱應(yīng)激導(dǎo)致豬十二指腸黏膜結(jié)構(gòu)損傷嚴(yán)重，黏膜上皮出現(xiàn)大面積脫落并裸露固有層；寧章勇等[13]報(bào)道，當(dāng)肉仔雞處于高溫條件下時(shí)，十二指腸出現(xiàn)明顯的病理?yè)p傷性變化，特別是在熱應(yīng)激后期，肉仔雞腸上皮細(xì)胞嚴(yán)重脫落，腸絨毛斷裂，并出現(xiàn)黏膜固有層水腫。本試驗(yàn)結(jié)果與上述研究結(jié)論有一致性。本試驗(yàn)結(jié)果也顯示了在上籠應(yīng)激過(guò)程中，對(duì)照組十二指腸表現(xiàn)出正常的組織結(jié)構(gòu)，而上籠應(yīng)激組在上籠后第4、7和10天出現(xiàn)腸腺上皮細(xì)胞變性，大面積脫落，并有較多的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。這表明上籠應(yīng)激可導(dǎo)致十二指腸組織結(jié)構(gòu)的改變，從而影響腸道的生理功能。

圖2 上籠應(yīng)激對(duì)紹興鴨十二指腸抗氧化能力的影響Fig.2 Effect of caged stress on the duodenal antioxidant capacity of Shaoxing duck

圖3 上籠應(yīng)激對(duì)紹興鴨十二指腸應(yīng)激相關(guān)基因mRNA表達(dá)量的影響Fig.3 Effect of caged stress on the mRNAexpression level of duodenal stress-related genes of Shaoxing duck

圖4 上籠應(yīng)激對(duì)紹興鴨十二指腸凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)量的影響Fig.4 Effect of caged stress on the mRNAexpression level of duodenal apoptosis-related genes of Shaoxing duck

圖5 上籠應(yīng)激對(duì)紹興鴨十二指腸炎癥相關(guān)基因mRNA表達(dá)量的影響Fig.5 Effect of caged stress on the mRNAexpression level of duodenal inflammation-related genes of Shaoxing duck

3.2 上籠應(yīng)激對(duì)紹興鴨十二指腸組織抗氧化能力的影響

動(dòng)物在非生物或生物應(yīng)激狀態(tài)下會(huì)產(chǎn)生各種有害的活性氧類（reactive oxygen species,ROS），如過(guò)氧化物、自由基和超氧化物。這些物質(zhì)過(guò)多的產(chǎn)生容易對(duì)機(jī)體組織細(xì)胞造成嚴(yán)重?fù)p傷并引起脂質(zhì)過(guò)氧化、蛋白質(zhì)被氧化、酶活被抑制等破壞生物機(jī)體正?，F(xiàn)象的產(chǎn)生，從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡[14-18]。動(dòng)物在進(jìn)化過(guò)程中對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化作用的損傷既能形成酶促抗氧化系統(tǒng)，又能生成非酶促抗氧化系統(tǒng)，且兩者可使機(jī)體在自由基的產(chǎn)生和消除中形成復(fù)雜的防御系統(tǒng)。SOD、GSH-Px、CAT作為抗氧化酶系統(tǒng)的主要成員，是動(dòng)物體內(nèi)抗氧化防御的第1道屏障，其含量可以反映對(duì)組織的損傷水平。MDA是評(píng)價(jià)脂質(zhì)過(guò)氧化水平的指標(biāo)之一，其含量可反映氧自由基介導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化程度。T-AOC代表機(jī)體酶類和非酶類抗氧化機(jī)制的綜合效應(yīng)，常用于衡量機(jī)體的抗氧化能力。呂朝輝[19]研究表明：急性、慢性冷應(yīng)激可使雛雞十二指腸MDA含量明顯升高，說(shuō)明冷應(yīng)激使機(jī)體產(chǎn)生大量自由基，引起脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)；十二指腸SOD含量先降低后升高，表明雛雞由于應(yīng)激產(chǎn)生大量的自由基，而SOD在清除自由基的同時(shí)又被消耗。曾濤[20]的研究結(jié)果也表明，熱應(yīng)激使番鴨肝臟產(chǎn)生大量的ROS，從而增加了相關(guān)抗氧化酶SOD和CAT活性、T-AOC和MDA含量以消除過(guò)量的ROS。本試驗(yàn)研究結(jié)果與上述一致。隨著上籠應(yīng)激時(shí)間的增加，紹興鴨十二指腸SOD和GSH-Px活性、T-AOC和MDA含量上下波動(dòng)，且在上籠應(yīng)激前期SOD、CAT、GSH-Px活性和MDA含量低于對(duì)照組，這可能由于急性上籠應(yīng)激導(dǎo)致了紹興鴨體內(nèi)發(fā)生嚴(yán)重的生理代謝紊亂，機(jī)體需要適應(yīng)一段時(shí)間來(lái)抵抗上籠應(yīng)激環(huán)境造成的損傷。因此，本試驗(yàn)結(jié)果表明，上籠應(yīng)激能夠影響紹興鴨體內(nèi)自由基含量，從而使機(jī)體氧化與抗氧化作用失衡，進(jìn)而改變紹興鴨抗氧化能力。

3.3 上籠應(yīng)激對(duì)紹興鴨十二指腸內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、炎癥及凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)量的影響

氧化應(yīng)激的發(fā)生導(dǎo)致活性氧和抗氧化能力之間的平衡遭到破壞，并通過(guò)各種信號(hào)傳導(dǎo)途徑（如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)）引發(fā)細(xì)胞凋亡[21]。已有研究證實(shí)，GRP78作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生的標(biāo)志之一，在參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用[7]。CHOP是GRP78下游重要的靶基因，同時(shí)也是介導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的重要成員之一。ALEMU等試驗(yàn)結(jié)果表明，牛卵泡顆粒細(xì)胞處于高溫源下，GRP78的表達(dá)量上調(diào)，Bax的含量也隨之增加[22]。同時(shí)，SHAO等[23]的報(bào)道也證實(shí)，禽類肝細(xì)胞損傷時(shí)伴隨著GRP78蛋白高表達(dá)，表明GRP78蛋白參與組織損傷過(guò)程，而GRP78蛋白作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的分子伴侶，影響著內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)蛋白的折疊能力，GRP78在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生應(yīng)激時(shí)表達(dá)量增加。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過(guò)程中，鈣離子信號(hào)介導(dǎo)細(xì)胞凋亡是其主要機(jī)制之一，其中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)高濃度的鈣離子是保證蛋白折疊的重要因素，如鈣離子大量排出，可誘導(dǎo)產(chǎn)生多種細(xì)胞凋亡信號(hào)，最終通過(guò)線粒體途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而位于線粒體中的促凋亡蛋白Bax主要通過(guò)調(diào)控線粒體中鈣離子濃度來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡，因此，細(xì)胞中Bax蛋白表達(dá)量增加[24]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，籠養(yǎng)應(yīng)激導(dǎo)致十二指腸中CHOP和GRP78mRNA表達(dá)量增加，這表明十二指腸細(xì)胞發(fā)生了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，進(jìn)而促進(jìn)BaxmRNA的表達(dá)水平上升，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。

炎癥因子是應(yīng)激反應(yīng)引起動(dòng)物組織損傷和宿主防御中的重要指標(biāo)，而NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路作為炎癥因子重要的作用途徑，存在于多種細(xì)胞增殖、凋亡和免疫等過(guò)程中[25]。iNOS和COX-2作為NF-κB信號(hào)通路中2種重要分子，兩者互相協(xié)調(diào)，是炎癥過(guò)程中關(guān)鍵的幾個(gè)基因，對(duì)激活NF-κB具有重要意義[26]。在本研究中，紹興鴨十二指腸組織中iNOSmRNA表達(dá)水平在上籠應(yīng)激后期顯著上調(diào)，這可能是由于在上籠應(yīng)激后，iNOS在炎癥過(guò)程中增加了組織中的一氧化氮合成，使紹興鴨體內(nèi)建立了主動(dòng)的防御機(jī)制[27-28]。這與ZHANG等[29]的研究結(jié)果一致。同時(shí)，紹興鴨十二指腸組織COX-2mRNA的表達(dá)量在上籠應(yīng)激第10天顯著上調(diào)，表明COX-2在上籠應(yīng)激過(guò)程中有導(dǎo)致黏膜損傷、增強(qiáng)組織損傷和炎癥過(guò)程的作用[30]。此外，有研究表明，小鼠在氧化應(yīng)激過(guò)程中可以通過(guò)NF-κB-iNOS信號(hào)通路來(lái)增加iNOS表達(dá)量，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[31]。本研究中，隨著上籠應(yīng)激時(shí)間的增加，NF-κB信號(hào)通路中的iNOS和COX-2mRNA表達(dá)水平也隨之顯著上調(diào)，BaxmRNA表達(dá)量也在上籠應(yīng)激后期顯著上調(diào)。這表明應(yīng)激過(guò)程中產(chǎn)生的大量活性氧和活性氮，通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，進(jìn)而引起組織細(xì)胞損傷。由于家禽商業(yè)化抗體較少，且家禽與哺乳動(dòng)物同源性較低，所以本試驗(yàn)中上籠應(yīng)激是否在蛋白水平對(duì)紹興鴨十二指腸內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、炎癥及凋亡相關(guān)基因有影響還需進(jìn)一步驗(yàn)證。

總之，長(zhǎng)期以來(lái)，以地面平養(yǎng)方式為主的蛋鴨養(yǎng)殖形成了其傳統(tǒng)的養(yǎng)殖模式。然而，隨著我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，國(guó)家相關(guān)法律對(duì)生物安全和產(chǎn)品品質(zhì)要求的提高，畜禽養(yǎng)殖環(huán)境的控制力度加大，土地水源使用率的提高以及勞動(dòng)力成本的增加，傳統(tǒng)的蛋鴨養(yǎng)殖模式受到極大的限制，導(dǎo)致蛋鴨籠養(yǎng)這一新型養(yǎng)殖模式所占比例逐漸增加，并逐漸在全國(guó)范圍內(nèi)推廣開(kāi)來(lái)。該方式不僅能夠有效降低蛋鴨養(yǎng)殖過(guò)程中造成的環(huán)境污染，降低疫病感染率，而且能夠通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化的生產(chǎn)程序，保障鴨蛋產(chǎn)品及食品安全，提升養(yǎng)殖效益，實(shí)現(xiàn)了提質(zhì)增效、減排降耗雙重效益。目前，蛋鴨籠養(yǎng)模式已在江蘇、浙江、河南等地實(shí)施并推廣應(yīng)用。

4 結(jié)論

本研究表明，上籠應(yīng)激能引起紹興鴨十二指腸的組織損傷，增加十二指腸的氧化應(yīng)激損傷程度，并通過(guò)上調(diào)上籠應(yīng)激誘導(dǎo)的十二指腸細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激強(qiáng)度和炎癥反應(yīng)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的產(chǎn)生。