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    2019 年夏季成都市病死豬圓環(huán)病毒II 型感染情況分析

    2020-06-01 06:55:30李敏周瀟瀟肖金鵬向曉雪黃迪李俐睿
    四川畜牧獸醫(yī) 2020年5期
    關(guān)鍵詞:病死豬圓環(huán)無(wú)害化

    李敏,周瀟瀟,肖金鵬,向曉雪,黃迪,李俐睿

    (四川省成都市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,四川 成都 610041)

    豬圓環(huán)病毒II 型(PCV2)主要引起豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)[1-2],母豬繁殖障礙[3]、斷奶豬和育肥豬的呼吸道疾?。?]、豬皮炎和腎病綜合征[5](PDNS)以及豬先天性震顫[6]等一系列疫病,被稱為豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病(PCVAD)。在我國(guó)豬群中,圓環(huán)病毒感染普遍存在,豬群血清陽(yáng)性率可達(dá)20%~80%[7]。2002 年,楊漢春[8]對(duì)北京、天津、廣東、深圳、山東、山西等地規(guī)模化豬場(chǎng)的臨床發(fā)病情況進(jìn)行了調(diào)查,結(jié)合PCR 診斷,結(jié)果發(fā)現(xiàn)11 個(gè)豬場(chǎng)發(fā)生了由PCV2 感染所致的PMWS,1個(gè)豬場(chǎng)表現(xiàn)為PDNS。近兩年來(lái),成都地區(qū)夏季的病死豬呈一定程度的上漲趨勢(shì)。為詳細(xì)了解病死豬群中的PCV2 感染情況,筆者從成都地區(qū)三個(gè)無(wú)害化處理場(chǎng)采集了病死豬的淋巴結(jié)、脾臟和肝臟樣品,對(duì)圓環(huán)病毒II 型(PCV2)進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果報(bào)告如下:

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 樣品來(lái)源 樣品采集于成都市3個(gè)無(wú)害化處理場(chǎng),來(lái)源于15個(gè)區(qū)(市)縣。于2019年6月~9月每月在每個(gè)區(qū)(市)縣各采集5頭病死豬的淋巴結(jié)、脾臟和肝臟混合樣,共計(jì)236份。

    1.1.2 主要試劑 磁珠法病毒DNA/RNA 提取試劑盒、豬圓環(huán)病毒(PCV2)單重?zé)晒釸T-PCR檢測(cè)試劑盒,均購(gòu)自北京世紀(jì)元亨生物技術(shù)有限公司。

    1.2 PCV2熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法

    1.2.1 樣品處理 向無(wú)菌的2 mL Lysing Matrix組織研磨管中加入1 mL PBS液,再加入適量組織混合樣品,置于FastPrep-24?5G 研磨儀中研磨30 s 后取出,再置于離心機(jī)以8 000 r/min 離心1 min,取上清備用。

    1.2.2 DNA抽提 采用磁珠法病毒DNA/RNA提取法通過(guò)KingFisher DUO 自動(dòng)化提取儀對(duì)病毒DNA 進(jìn)行提取,執(zhí)行Tian_KingFisher_Duo.bdz 程序進(jìn)行DNA 抽提。程序執(zhí)行完畢,取出DNA,用封口膜封好并保存于-20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.3 熒光定量RT-PCR反應(yīng) 從試劑盒中取出無(wú)菌無(wú)核酸酶水、PCR反應(yīng)液、熒光探針,振蕩混勻后,瞬時(shí)離心備用。向PCR反應(yīng)管內(nèi)依次加入無(wú)菌無(wú)核酸酶水5.9 μL、PCR 反應(yīng)液10 μL、熒光探針2.1 μL、DNA模板2 μL,配制成20 μL反應(yīng)體系,并設(shè)立陰、陽(yáng)性對(duì)照。反應(yīng)條件如下:95 ℃2 min;循環(huán)95 ℃2 min,60 ℃35 s,共40個(gè)循環(huán);在60 ℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào),報(bào)告基團(tuán)“FAM”,淬滅基團(tuán)“NONE”。

    1.2.4 結(jié)果判定 若陽(yáng)性對(duì)照Ct 值≤30,陰性對(duì)照無(wú)Ct值,則實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。如Ct值≤30并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線,判為PCV2陽(yáng)性;如30<Ct值<37,需重新提取DNA進(jìn)行擴(kuò)增,如仍為可疑,則判定為陽(yáng)性;如Ct值≥37判為陰性。

    2 結(jié)果

    2019 年6 月至9 月,共檢測(cè)病死豬內(nèi)臟樣品236 份,其中豬圓環(huán)病毒II 型(PCV2)核酸陽(yáng)性有160 份,平均陽(yáng)性率達(dá)68%。具體測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

    3 分析

    根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可以看出,病死豬中豬圓環(huán)病毒II型(PCV2)的陽(yáng)性率高達(dá)68%,說(shuō)明豬群中豬圓環(huán)病毒II型普遍存在。而PCV2又常與多種病原混合感染,造成豬只消瘦、皮膚蒼白、腹瀉、呼吸障礙及輕度黃疸,還包括神經(jīng)癥狀、繁殖障礙、皮炎等臨床癥狀。成都市作為四川的養(yǎng)豬大市,必須對(duì)豬圓環(huán)病毒II型進(jìn)行重點(diǎn)防控。

    2006年,北美廣泛使用PCVAD 疫苗,報(bào)道顯示,超過(guò)98%的豬只在斷奶前后免疫,提高了豬只的生產(chǎn)性能,降低了死亡率[9]。2007 年,有研究表明,對(duì)斷奶仔豬實(shí)施PCV2免疫,雖然能有效控制PCVAD 發(fā)生,降低血液中的病毒水平,降低育成豬的死亡率,但卻并不能根除感染發(fā)生[10],PCV2 在主動(dòng)免疫的情況下依然可以感染豬只。通常4~11周齡的豬對(duì)PCV2較為易感,而哺乳仔豬的感染率較低[11]。實(shí)際生產(chǎn)中,育肥豬的PCV2 感染在各階段均存在,甚至高效價(jià)抗體的豬群也可感染PCV2,表明控制PCV2感染僅靠免疫無(wú)法解決,而且成年母豬可能是該病的重要傳染源[12]。

    表1 2019年夏季成都市無(wú)害化處理場(chǎng)豬圓環(huán)病毒II型的檢測(cè)結(jié)果

    4 防控建議

    PCVAD 的發(fā)生往往不單是因?yàn)镻CV2 感染造成的,需要其他條件或共同因素才得以誘發(fā)臨床病癥,但其相互作用和致病的機(jī)制非常復(fù)雜,因此不能完全依賴免疫等特異性防制措施,只有同時(shí)采取有效的綜合防控措施,才能起到更好的效果。

    4.1 做好相關(guān)疫苗免疫接種 同豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)有關(guān)的豬病往往是由PRRSV、豬流感病毒(SIV)、豬肺炎支原體、豬細(xì)小病毒(PPV)、多殺性巴氏桿菌等多種病原混合感染引起的。因此,除接種PCV2疫苗以外,豬場(chǎng)應(yīng)結(jié)合自身情況,做好PRRSV和PPV等相關(guān)疫病的疫苗接種。

    4.2 做好飼養(yǎng)管理 本病的發(fā)生與豬群的日常管理密切相關(guān),高密度的集中養(yǎng)殖方式本身就易引起疾病。故養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)應(yīng)制定規(guī)范和科學(xué)的養(yǎng)殖程序和飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn),加強(qiáng)豬舍的通風(fēng)換氣和防暑降溫;注意飼料的營(yíng)養(yǎng)和質(zhì)量,保持清潔的飲水;及時(shí)清運(yùn)糞污,降低豬舍內(nèi)有害氣體濃度;做好驅(qū)蟲(chóng)、防蚊、防鼠工作;加強(qiáng)生產(chǎn)母豬的產(chǎn)前和產(chǎn)后保健。一旦豬群感染PCV2 后,可適當(dāng)增強(qiáng)營(yíng)養(yǎng),以降低發(fā)病率和病死率。

    4.3 加強(qiáng)消毒工作 加強(qiáng)豬場(chǎng)內(nèi)外的環(huán)境衛(wèi)生與消毒工作,是防止感染的最有效措施。在進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)的門(mén)口必須設(shè)立消毒池,配制有效消毒液,對(duì)來(lái)往車(chē)輛的輪胎和人的鞋底進(jìn)行消毒。禁止飼養(yǎng)狗、貓等小動(dòng)物,加強(qiáng)滅蚊蠅和滅鼠,控制疫病傳播。嚴(yán)格執(zhí)行消毒制度,做好日常消毒工作,做到“全進(jìn)全出”,每批豬出欄后徹底清洗、消毒圈舍,并空欄1周以上。

    4.4 做好無(wú)害化處理工作 一旦舍內(nèi)發(fā)生豬只死亡,應(yīng)將死豬裝入專用的防滲漏尸體袋中,聯(lián)系無(wú)害化處理公司對(duì)死豬收集處理,不得私自掩埋或高溫處理。同時(shí),要對(duì)圈舍和尸體堆放地點(diǎn)進(jìn)行一次徹底的清洗消毒,防止病原微生物二次污染。

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