小兒重癥毛細(xì)支氣管炎治療前后外周血單個(gè)核細(xì)胞 Treg Th17細(xì)胞水平及臨床意義

王文慧，李敏副，王 茹，蘇紅苗

(海南省瓊海市人民醫(yī)院兒科，海南 瓊海 571400)

毛細(xì)支氣管炎是嬰幼兒常見呼吸系統(tǒng)疾病之一，約3%的1歲以下嬰兒因毛細(xì)支管炎住院治療。重癥毛細(xì)支氣管炎起病急驟、病情進(jìn)展迅速，如不治療易引發(fā)多種嚴(yán)重并發(fā)癥，發(fā)生支氣管哮喘風(fēng)險(xiǎn)也較高，嚴(yán)重威脅小兒生命和健康[1]。有文獻(xiàn)指出，毛細(xì)支氣管炎最主要病原體為呼吸道合胞病毒，病毒侵入人體會(huì)誘發(fā)T細(xì)胞免疫應(yīng)答，除Th1/Th2細(xì)胞應(yīng)答失衡外，Th17細(xì)胞反應(yīng)在其發(fā)病過程中也較為重要[2]。馮柱興[3]等學(xué)者的研究也顯示，小兒毛細(xì)支氣管炎經(jīng)治療后Treg細(xì)胞明顯升高、Th17細(xì)胞明顯下降?；诖?，本研究選取106例重癥毛細(xì)支氣管炎患兒作為研究對(duì)象，以探究小兒重癥毛細(xì)支氣管炎治療前后外周血單個(gè)核細(xì)胞Treg、Th17細(xì)胞水平變化，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：納入2017年9月至2018年9月間收治的106例重癥毛細(xì)支氣管炎患兒作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合重癥毛細(xì)支管炎診斷標(biāo)準(zhǔn)者；年齡<2歲者；入組前未經(jīng)激素及其他免疫抑制劑治療者；患兒監(jiān)護(hù)人知情同意；經(jīng)我院倫理委員會(huì)審核通過。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重器官功能障礙、免疫功能紊亂者；其他先天性疾病者；治療期間出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥或過敏癥狀而更換治療方案者。106例重癥毛細(xì)支氣管炎患兒中男女分別為60例、46例，月齡6～20個(gè)月、平均月齡(15.05±3.49)個(gè)月。

1.2 治療方法：所有患兒均嚴(yán)密監(jiān)測病情變化，采取對(duì)癥支持治療，霧化吸入布地奈德(生產(chǎn)企業(yè)：AstraZeneca Pty Ltd，規(guī)格：2mL：0.5 mg，批準(zhǔn)文號(hào)：H20090902)、異丙托溴銨(生產(chǎn)企業(yè)：Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG，規(guī)格：2 mL:異丙托溴銨500 μg，批準(zhǔn)文號(hào)：H20100682)、干擾素α-1b(生產(chǎn)企業(yè)：北京三元基因工程有限公司，規(guī)格：10 μg：0.5mL/支，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字S20040039)治療，布地奈德0.5mg、異丙托溴銨2mL、干擾素α-1b 1 μg/mL、生理鹽水2mL混合行經(jīng)氧霧化吸收，10 min/次。如患兒合并細(xì)菌感染加用抗菌藥物治療。

1.3 評(píng)估方法：治療前后均采集患兒外周靜脈血，使用AccuriC6型流式細(xì)胞儀(美國BD公司生產(chǎn))測定患兒Treg(CD3+CD8-IL-17+T)、Th17(CD4+CD25highCD127lowT)頻率；采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定患兒白介素-17(IL-17)、白介素-23(IL-23)、白介素-10(IL-10)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)水平，試劑盒均購自上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司和上海江萊生物科技有限公司，酶標(biāo)儀購自上海沛歐分析儀器有限公司(318C+型)，進(jìn)行檢測前對(duì)所有質(zhì)控品進(jìn)行檢測，測定質(zhì)控品均在控后再對(duì)各組樣本進(jìn)行檢測，檢測流程均嚴(yán)格按照試劑盒說明書和儀器操作手冊(cè)進(jìn)行。

1.4 評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)：臨床療效根據(jù)患兒癥狀體征分為顯效(治療7d后癥狀體征明顯改善，哮鳴音、濕羅音消失)、有效(治療7d后癥狀體征有所改善，哮鳴音、濕羅音基本消失)、無效(治療7d后癥狀體征仍無改善或加重)3級(jí)，總有效率=(顯效+有效)/總例數(shù)×100%。

1.5 觀察指標(biāo)：評(píng)估患兒療效，比較治療前、治療1周后患兒Treg、Th17水平及相關(guān)細(xì)胞因子水平(IL-17、IL-23、IL-10、TGF-β)，評(píng)估不同療效患兒的Treg、Th17水平，分析療效與Treg、Th17水平的相關(guān)性。

2 結(jié) 果

2.1 臨床療效：治療7d后，106例重型毛細(xì)支氣管炎患兒顯效61例、有效38例，無效7例，總有效率93.40%(99/106)。

2.2 治療前后患兒Treg、Th17水平對(duì)比：治療7d后，患兒Treg水平高于治療前(P<0.05)，Th17水平低于治療前(P<0.05)，見表1。

2.3 治療前后患兒相關(guān)細(xì)胞因子水平對(duì)比：治療7d后，患兒IL-10、TGF-β水平均高于治療前(P<0.05)，IL-17、IL-23水平均低于治療前(P<0.05)，見表2。

表1 治療前后患兒Treg Th17水平對(duì)比

表2 治療前后患兒相關(guān)細(xì)胞因子水平對(duì)比

2.4 不同療效患兒Treg、Th17水平：治療7d后，患兒顯效者、有效者Treg水平均高于治療前(P<0.05)，Th17水平均低于治療前(P<0.05)；無效者Treg、Th17水平與治療前對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，顯效者、有效者、無效者治療后Treg、Th17水平對(duì)比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 不同療效患兒Treg Th17水平

3 討 論

毛細(xì)支氣管炎是以免疫球蛋白E介導(dǎo)的、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤為主的，多種炎癥介質(zhì)共同介導(dǎo)的小氣道炎癥，輔助型T細(xì)胞亞群細(xì)胞比例失調(diào)是氣道高反應(yīng)發(fā)生進(jìn)展的關(guān)鍵。Th17和Treg是近年發(fā)現(xiàn)的一種新型CD4+效應(yīng)T細(xì)胞亞群，應(yīng)琴[4]等學(xué)者的研究顯示，孟魯司特鈉可通過調(diào)節(jié)毛細(xì)支氣管炎患兒體內(nèi)Th17/Treg平衡來提高毛細(xì)支氣管炎療效。張進(jìn)軍[5]等學(xué)者的研究也發(fā)現(xiàn)，毛細(xì)支氣管炎患兒經(jīng)治療IL-10、TGF-β1水平均高于治療前。但回顧既往文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，目前國內(nèi)對(duì)小兒毛細(xì)支氣管炎，尤其是重型毛細(xì)支氣管炎，發(fā)生發(fā)展與Th17/Treg的變化研究較少。故本研究就此方面入手，進(jìn)一步了解毛細(xì)支氣管炎與Th17/Treg失衡的關(guān)系，以指導(dǎo)臨床治療。

毛國其[6]等學(xué)者的研究顯示，毛細(xì)支氣管炎患兒Treg頻率低于健康嬰幼兒，而Th17頻率則高于健康嬰幼兒，Th17/Treg失衡與毛細(xì)支氣管炎發(fā)生密切相關(guān)。本研究中，106例患兒治療總有效率為93.40%。對(duì)比治療前后發(fā)現(xiàn)，治療7w后，患兒Treg細(xì)胞頻率較治療前明顯升高，Th17細(xì)胞頻率較治療前明顯降低，這提示治療后Th17/Treg失衡狀態(tài)有所改善。本研究數(shù)據(jù)還顯示，治療7d后，患兒IL-10、TGF-β均高于治療前，IL-17、IL-23水平均低于治療前。機(jī)體正常情況下，Th17/Treg呈相互拮抗、相互轉(zhuǎn)化的狀態(tài)。Th17細(xì)胞是人體內(nèi)起著促進(jìn)炎癥反應(yīng)作用的一類CD4+T細(xì)胞亞群，其通過分泌IL-17細(xì)胞因子發(fā)揮強(qiáng)烈的致炎作用[7]。而Treg細(xì)胞則能夠?qū)γ庖呒?xì)胞產(chǎn)生負(fù)性調(diào)節(jié)作用，通過促進(jìn)釋放出IL-10等效應(yīng)因子，從而對(duì)T細(xì)胞的活性及增殖產(chǎn)生抑制作用，發(fā)揮免疫抑制的功能。當(dāng)發(fā)生毛細(xì)支氣管炎時(shí)，病毒侵襲使Th17上升促進(jìn)炎性反應(yīng)，使Treg下降減弱其對(duì)免疫功能的調(diào)節(jié)作用，故引發(fā)不同程度的免疫應(yīng)答，產(chǎn)生各種病理癥狀體征。而治療后患兒IL-17等炎癥因子水平被控制，IL-10、TGF-β等抗炎因子水平升高，有文獻(xiàn)指出，Treg細(xì)胞能夠通過IL-10依賴的方式抑制Th17的促炎作用，高濃度TGF-β下誘導(dǎo)T細(xì)胞向Treg細(xì)胞分化，因此患兒治療后Th17/Treg失衡獲得糾正。

本研究進(jìn)一步分析毛細(xì)支氣管炎療效與Treg/Th17的關(guān)系，數(shù)據(jù)顯示，治療后不同療效患兒Treg、Th17水平對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中，治療無效者Th17、Treg水平與治療前對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這說明患兒Th17/Treg仍處失衡狀態(tài)。同時(shí)，患兒經(jīng)治療后，顯效者、有效者和無效者Treg、Th17水平存在顯著差異，出現(xiàn)Treg水平越高患兒療效越好、Th17水平越低患兒療效越好的趨勢。而治療前Th17、Treg水平均與療效無關(guān)，考慮與本組樣本均為重型毛細(xì)支氣管炎患兒，Th17/Treg失衡較嚴(yán)重不足以反映明顯線性關(guān)系有關(guān)。這提示，在小兒重型毛細(xì)支氣管炎治療中，對(duì)患兒不僅要予以抗炎、給氧等對(duì)癥支持性治療，還需根據(jù)患兒免疫功能狀況以調(diào)節(jié)和治療患兒免疫功能失衡。另外，Th17在毛細(xì)支氣管炎和支氣管哮喘的發(fā)病過程中均起重要作用。因此，反復(fù)發(fā)作的毛細(xì)支氣管炎患兒血清Th17頻率較高可能是其病情向支氣管哮喘轉(zhuǎn)歸的原因之一。

綜上所述，治療后小兒重型支氣管炎患兒Treg及其細(xì)胞因子水平高于治療前、Th17細(xì)胞因子低于治療前，治療后Treg與療效呈正相關(guān)關(guān)系，Th17與療效呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。