葡萄皮提取物的免疫功能和血脂調(diào)節(jié)功能的研究

高文英 劉超

摘要：為了研究葡萄皮提取物對(duì)免疫和血脂的調(diào)節(jié)作用，按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》2003年版中增強(qiáng)免疫力功能檢驗(yàn)方法和《關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評(píng)價(jià)方法等9個(gè)保健食品功能評(píng)價(jià)方法的通知》中附件6輔助降血脂功能評(píng)價(jià)方法進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，血脂實(shí)驗(yàn) 與模型組比較，各劑量組葡萄皮提取物能顯著降低大鼠血清中總膽固醇TC、甘油三酯TG（P<0.05），高劑量組顯著降低低密度脂蛋白LDL-C的含量（P<0.05）;免疫試驗(yàn) 與對(duì)照組比較，高劑量組小鼠ConA誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖能力顯著增加（P<0.05），中、高劑量組小鼠對(duì)DNFB誘導(dǎo)的DTH反應(yīng)顯著增大（P<0.05）;與對(duì)照組比較，中、高劑量組小鼠碳廓清吞噬指數(shù)、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率和小鼠吞噬指數(shù)均顯著增大（P<0.05）;小鼠體液免疫和NK細(xì)胞活性無(wú)明顯影響。說(shuō)明葡萄皮提取物可以調(diào)節(jié)大鼠血脂水平，同時(shí)可以增強(qiáng)小鼠的免疫力。

關(guān)鍵詞：葡萄皮;白藜蘆醇;血脂;免疫;甘油三脂;NK細(xì)胞

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們生活水平亦不斷提高，飲食結(jié)構(gòu)和生活方式的發(fā)生改變，正常人群高脂血癥的發(fā)病率逐年升高。不止城市人高血脂人群增加，農(nóng)村高血脂人群增加更快，目前高達(dá)20%～30%。高脂血癥是引發(fā)心腦血管疾病、脂肪肝、腎病的重要危險(xiǎn)因素，影響身體免疫狀態(tài)。因此開(kāi)發(fā)和研制具有調(diào)節(jié)血脂作用的安全有效的保健品意義重大[1]。

葡萄中除了含有大量的營(yíng)養(yǎng)成分外， 還含有豐富的生物活性成分，其中原花青素和齊墩果酸等具有降血脂作用。葡萄皮除含有豐富的原花青素外，還含有比葡萄肉和籽中更豐富的白藜蘆醇，具有降血脂、抗血栓、預(yù)防動(dòng)脈硬化、增強(qiáng)免疫力等作用[2]。葡萄皮提取物26.6mg/kg.bw灌胃，可有效降低大鼠甘油三酯和總膽固醇[3]。白藜蘆醇能使高脂血癥大鼠的TC、TG、LDL-c及AI明顯降低，升高HDL-C和HDL-C/TC比值[4]。白藜蘆醇可提高NK細(xì)胞的殺傷活性，提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率[5]。Sfaxi等發(fā)現(xiàn)葡萄籽提取物中的總酚和黃酮含量高于葡萄皮提取物，但葡萄皮提取物中的濃縮單寧酸是葡萄籽提取物的3倍，濃縮單寧酸具有調(diào)節(jié)免疫力的作用[6]。本實(shí)驗(yàn)觀察葡萄皮提取物對(duì)小鼠免疫功能的影響，研究葡萄皮提取物對(duì)高血脂大鼠血脂的調(diào)節(jié)作用。

1材料與方法

1.1受試樣品：葡萄皮提取物由天津市尖峰天然產(chǎn)物研究開(kāi)發(fā)有限公司提供。人推薦劑量為1.2g/人/日，白藜蘆醇含量為5.08%。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：選用SPF級(jí)昆明種雌性小鼠200只，用于增強(qiáng)免疫功能實(shí)驗(yàn)。選用健康SPF級(jí)Wistar雄性大鼠50只，用于調(diào)節(jié)血脂實(shí)驗(yàn)。

1.3主要儀器與試劑：動(dòng)物天平、電子天平、離心機(jī)、酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、手術(shù)器械、恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡;膽固醇、膽酸鈉、血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C），高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）測(cè)定試劑盒等。

1.4 高脂飼料：基礎(chǔ)飼料78.8% 、膽固醇1% 、蛋黃粉10% 、豬油10% 、膽鹽 0.2%。

1.5劑量分組及受試物給予：

增強(qiáng)免疫功能實(shí)驗(yàn)分為五個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組40只小鼠。免疫實(shí)驗(yàn)一組進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn);實(shí)驗(yàn)二組進(jìn)行淋巴器官/體重比值測(cè)定和碳廓清實(shí)驗(yàn);實(shí)驗(yàn)三組進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)和NK細(xì)胞活性測(cè)定;實(shí)驗(yàn)四組進(jìn)行血清溶血素的測(cè)定和抗體生成細(xì)胞檢測(cè);實(shí)驗(yàn)五組進(jìn)行小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。每組實(shí)驗(yàn)設(shè)置低、中、高三個(gè)劑量組和一個(gè)空白對(duì)照組，三個(gè)劑量組分別為人體推薦量的5倍、10倍、30倍，即以0.1g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.6g/kg.bw葡萄皮提取物灌胃小鼠?？瞻讓?duì)照組灌胃等體積純化水。

調(diào)節(jié)血脂實(shí)驗(yàn)：10只大鼠給予維持飼料作為空白對(duì)照組，40只給予模型飼料作為模型對(duì)照組。模型對(duì)照組給予模型飼料8天后，根據(jù)TC水平將模型對(duì)照組隨機(jī)分成4組。設(shè)置低、中、高三個(gè)劑量組和一個(gè)模型對(duì)照組，三個(gè)劑量組分別為人體推薦量的5倍、10倍、30倍，即以0.1g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.6g/kg.bw葡萄皮提取物灌胃大鼠?？瞻讓?duì)照組和模型對(duì)照組灌胃給予相當(dāng)體積的去離子水?？瞻讓?duì)照組喂食維持飼料，模型對(duì)照組和低、中、高劑量組喂食高脂模型飼料。

1.5試驗(yàn)方法

增強(qiáng)免疫功能實(shí)驗(yàn)按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》2003年版（功能學(xué)評(píng)價(jià)檢驗(yàn)方法）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。調(diào)節(jié)血脂實(shí)驗(yàn)按照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局《關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評(píng)價(jià)方法等9個(gè)保健食品功能評(píng)價(jià)方法的通知》（國(guó)食藥監(jiān)?；痆2012]107號(hào)）附件6輔助降血脂功能評(píng)價(jià)方法的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.6試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用方差分析，按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值

2結(jié)果與分析

2.1葡萄皮提取物對(duì)大鼠血脂的調(diào)節(jié)作用

2.1.1葡萄皮提取物對(duì)大鼠體重的影響：受試樣品對(duì)各劑量組大鼠體重均無(wú)明顯影響，與空白對(duì)照組及模型對(duì)照組比較差異均無(wú)顯著性（P>0.05）。

2.1.2實(shí)驗(yàn)前大鼠血脂含量水平：與模型對(duì)照組比較，各劑量組大鼠血清總膽固醇TC、甘油三酯TG、高密度脂蛋白HDL-C、低密度脂蛋白LDL-C含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）?？瞻讓?duì)照組血清總膽固醇TC、甘油三酯TG和低密度脂蛋白LDL-C顯著低于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見(jiàn)表1。

2.1.3實(shí)驗(yàn)后大鼠血脂含量水平：與模型對(duì)照組比較，各劑量組大鼠血清TC、TG均顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;高劑量組大鼠血清LDL-C含量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。各劑量組大鼠血清HDL-C含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）?？瞻讓?duì)照組大鼠血清TC、TG和LDL-C含量顯著低于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見(jiàn)表2。

2.2葡萄皮提取物對(duì)小鼠免疫力的調(diào)節(jié)作用

2.2.1對(duì)小鼠體重的影響：五個(gè)實(shí)驗(yàn)組中，受試樣品對(duì)各劑量組小鼠體重均無(wú)明顯影響，與空白對(duì)照組比較，差異均無(wú)顯著性（P>0.05）。

2.2.3對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響：與空白對(duì)照組比較，高劑量組小鼠ConA誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖能力顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;中、高劑量組小鼠對(duì)DNFB誘導(dǎo)的DTH反應(yīng)顯著增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2.4對(duì)小鼠體液免疫功能的影響：與空白對(duì)照組比較，各劑量組小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)量及血清溶血素含量均無(wú)明顯變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2.5對(duì)小鼠單核-巨噬細(xì)胞功能的影響：與空白對(duì)照組比較，中、高劑量組小鼠碳廓清吞噬指數(shù)、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率和小鼠吞噬指數(shù)均顯著增大，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。低劑量小鼠碳廓清吞噬指數(shù)、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率和小鼠吞噬指數(shù)無(wú)明顯變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2.6對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響：與空白對(duì)照組比較，各劑量組小鼠NK細(xì)胞活性均無(wú)明顯變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3. 結(jié)論

高脂血癥可引起內(nèi)皮細(xì)胞的損傷和灶狀脫落，可導(dǎo)致血管壁的通透性升高。血漿脂蛋白得以進(jìn)入內(nèi)膜。其后引起巨噬細(xì)胞的清除反應(yīng)和血管壁平滑肌細(xì)胞增生，并形成斑塊。同時(shí)，脂質(zhì)成分也能使細(xì)胞膜，包括血小板、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等胞膜的脂質(zhì)成分改變，從而使這些細(xì)胞的生物活性發(fā)生改變，同時(shí)還使體內(nèi)免疫功能發(fā)生改變[7]。高血脂癥的脂質(zhì)代謝紊亂可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞及血管壁細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞黏附分子、化學(xué)因子及炎癥介質(zhì)，同時(shí)損傷血管內(nèi)皮，激活損傷應(yīng)答過(guò)程。同時(shí)脂質(zhì)成分使細(xì)胞膜等胞膜的脂質(zhì)發(fā)生改變，從而使細(xì)胞生物活性改變，從而影響體內(nèi)免疫功能發(fā)生改變。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，血脂實(shí)驗(yàn) 與模型組比較，各劑量組葡萄皮提取物能顯著降低大鼠血清中總膽固醇TC、甘油三酯TG（P<0.05），高劑量組顯著降低低密度脂蛋白LDL-C的含量（P<0.05）;免疫試驗(yàn) 與對(duì)照組比較，高劑量組小鼠ConA誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖能力顯著增加（P<0.05），中、高劑量組小鼠對(duì)DNFB誘導(dǎo)的DTH反應(yīng)顯著增大（P<0.05）;與對(duì)照組比較，中、高劑量組小鼠碳廓清吞噬指數(shù)、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率和小鼠吞噬指數(shù)均顯著增大;小鼠體液免疫和NK細(xì)胞活性無(wú)明顯影響。說(shuō)明葡萄皮提取物可以調(diào)節(jié)大鼠血脂水平，同時(shí)可以增強(qiáng)小鼠的免疫力。

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