IgA腎病病理與臨床指標(biāo)及Notch信號(hào)通路的相關(guān)性研究

張潔，韓麗紅，王彩麗

[摘要] 目的 研究Notch信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與IgA腎病患者各臨床指標(biāo)之間的意義。方法 實(shí)驗(yàn)組方便選取包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腎臟內(nèi)科2013年1月—2014年10月確診的IgA腎病的患者36例，根據(jù)IgAN牛津病理分型腎小管萎縮或間質(zhì)纖維化（T）結(jié)果將實(shí)驗(yàn)組分為N1、N2、N3組。對(duì)照組方便選取包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院泌尿外科腎腫瘤患者。檢測(cè)所有患者的各種生化指標(biāo)，運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)IgAN患者血中的Notch1、Jagged1水平。結(jié)果 24 h尿蛋白定量的結(jié)果在N1（2.05±1.75）g/d、N2（2.27±0.99）g/d、N3（2.46±1.58）g/d組與C組（0.30±0.10）g/d間比較，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 ALB、CHO、TG、HDL-C、LDL-C、UA的結(jié)果在N1、N2、N3組與C組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），Scr的結(jié)果在N1與C組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;N2、N3組與C組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。血Notch1水平在對(duì)照組C和IgA腎病各組N1、N2、N3分別為（0.43±0.24）、（1.19±0.38）、（1.54±0.46）、（3.77±2.99）。血Jagged1水平在對(duì)照組C和IgA腎病各組N1、N2、N3分別為（1.46±0.32）、（2.36±0.43）、（2.44±0.88）、（5.06±2.96）。血Notch1、Jagged1水平在實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組C比較均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 提示腎臟的 Notch1/Jagged1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在IgA腎病時(shí)可能被激活，參與疾病的進(jìn)一步發(fā)生和發(fā)展。

[關(guān)鍵詞] IgA腎病病理;臨床指標(biāo);Notch信號(hào)通路

[中圖分類號(hào)] R692 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1674-0742（2020）01（c）-0028-03

Study on Correlation of IgA Nephropathy and Clinical Parameters or Notch Signal Pathway

ZHANG Jie1， HAN Li-hong2， WANG Cai-li3

1.Department of Nephrology， the Second Affiliated Hospital of Baotou Medical College， Inner Mongolia University of Science and Technology， Baotou， Inner Mongolia， 014030 China;2.Department of Basic Medicine， Putian University， Putian， Fujian Province， 351100 China;3.Department of Nephrology， the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College， Inner Mongolia University of Science and Technology， Baotou， Inner Mongolia， 014010 China

[Abstract] Objective The link between IgA nephropathy pathogenesis and Notch signaling pathway. Methods The experimental group was convenient 36 patients with IgA nephropathy from the Department of Nephrology from January 2013 to October 2014， the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College. The experimental components were grouped into N1， N2， and N3 groups based on the results of IgAN Oxford pathological classification of renal tubular atrophy or interstitial fibrosis （T）. The control group was the normal tissues adjacent to the tumor in patients with renal tumors in the urology department of the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College. Various biochemical indicators of all patients were detected， and the levels of Notch1 and Jagged1 in the blood of IgAN patients were detected by enzyme-linked immunosorbent assay. Results The results of 24 h urine protein quantification were statistically significant between the N1 （2.05±1.75）g/d， N2 （2.27±0.99）g/d， N3 （2.46±1.58）g/d and C groups （0.30±0.10） （P<0.05）. The results of Hb， ALB， CHO， TG， HDL-C， LDL-C， and UA were not statistically significant between the N1， N2， and N3 groups and the C group （P>0.05）. The results of Scr were compared between the N1 and C groups. The difference was not statistically significant（P>0.05）; there was statistical significance between the N2 and N3 groups and the C group （P<0.05）. The levels of blood Notch1 in the control group C and IgA nephropathy groups N1， N2， N3 were （0.43±0.24）， （1.19±0.38）， （1.54±0.46）， （3.77±2.99）. The levels of Jagged1 in blood were （1.46±0.32）， （2.36±0.43）， （2.44±0.88）， （5.06±2.96） in the control group C and IgA nephropathy in each group. The levels of blood Notch1 and Jagged1 were increased in the experimental group and the control group C， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion In patients with IgA nephropathy， clew kidney Notch1/Jagged1 signal transduction pathway may be activated when the IgA nephropathy， participate in the further occurrence and development of the disease.

[Key words] Pathology of IgA nephropathy; Clinical indicators; Notch signaling pathway

IgA 腎?。↖gA nephropathy，IgAN）是世界范圍內(nèi)較常見的原發(fā)性腎小球腎炎，近10年有明顯上升的趨勢(shì)。上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化（epithelial-mesenchymaltransition， EMT）在IgA腎病腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用。TGF-β1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)腎間質(zhì)纖維化及EMT起到重要作用。它調(diào)節(jié)著細(xì)胞的增生，分化，生長(zhǎng)和凋亡等，并參與了許多腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展。該課研究方便選取2013年1月—2014年10月確診的IgA腎病的患者36例，試圖在IgA腎病腎臟病理與臨床指標(biāo)及信號(hào)通路之間進(jìn)一步的研究和探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 ?資料與方法

1.1 ?主要試劑

Rabbit Anti- Hey 1（北京博奧森公司）人Notch-1 ELISA檢測(cè)試劑盒（SD分裝）、人Jagged -1 ELISA檢測(cè)試劑盒（SD分裝）、Cr 和 BUN（TBA120FR 全自動(dòng)生化分析儀）、24 h 尿蛋白定量（雙縮脲比色法）。

1.2 ?材料

方便選取包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腎臟內(nèi)科確診的IgA腎病的患者36例，所用病例均經(jīng)病史、臨床檢查及腎穿刺活檢病理診斷為IgA腎病。

1.3 ?實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 ?分組 ?根據(jù)IgA腎病牛津病理分型（2009年國(guó)際腎臟病理協(xié)會(huì)組織制定）將患者分為3組，即N1、N2、N3組。根據(jù)病理中腎小管萎縮或間質(zhì)纖維化（T）結(jié)果，N1組病理腎小管萎縮或間質(zhì)纖維化程度0%～25%[n=12，男：女=6：6，平均年齡（34.3±12.1）歲] ，N2組病理腎小管萎縮或間質(zhì)纖維化程度26%～50%[n=17，男：女=7：10，平均年齡（40.7±10.9）歲]，N3組病理腎小管萎縮或間質(zhì)纖維化程度>50%[n=7，男：女=3：4，平均年齡（38.96±14.5）歲]。對(duì)照組：方便選取包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院泌尿外科腎腫瘤患者5例（C組，n=5，男：女=3：2），所有病理標(biāo)本取自遠(yuǎn)離腫瘤的瘤旁組織，并經(jīng)光鏡證實(shí)為正常腎組織做為對(duì)照組。

1.3.2 ?一般資料的收集 ?包括性別、年齡、體重、血壓、病程、血清白蛋白（ALB）、血總膽固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、24 h尿蛋白定量（24 h-Upro）、血肌酐（Scr）、尿酸（UA）等。

1.3.3 ?腎組織標(biāo)本的留取 ?腎活檢標(biāo)本離體后在中性福爾馬林固定液固定24 h，給予乙醇脫水，再用二甲苯透明，浸蠟，石蠟包埋，制作好蠟塊，備用。

1.3.4 ?酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）檢測(cè) ?Notch1、Jagged1在外周血清中的水平將患者的血清樣本進(jìn)行編號(hào)，備用。將洗滌緩沖液與蒸餾水按1：20稀釋備用，在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加入待測(cè)樣本10 μL，再加入樣品緩沖液40 μL，空白孔不加。除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品及樣品孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100 μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，置37℃恒溫箱孵育1 h。用自動(dòng)洗板機(jī)洗板5次。每孔中加入底物A、B，37℃孵育15 min。于各反應(yīng)孔中加入終止液50 μL，終止反應(yīng)。在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

1.4 ?統(tǒng)計(jì)方法

所得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料用（x±s）表示，用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 ?結(jié)果

2.1 ?尿蛋白定量的檢測(cè)

24 h尿蛋白定量在N1、N2、N3組與C組間比較，3組均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 ?生化指標(biāo)的檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)組患者的Hb、ALB、UA、CHO、TG、HDL-C、LDL-C指標(biāo)與C組患者比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。Scr的指標(biāo)在N1、N2、N3組與C組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.3 ?ELISA結(jié)果

①腎病各組N1、N2、N3組的Notch 1檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組C比較結(jié)果 Notch 1在IgA 腎病N1、N2、N3組的水平與對(duì)照組C比較均有增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

②腎病各組N1、N2、N3組的Jagged 1檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組C比較結(jié)果 Jagged 1在IgA 腎病N1、N2、N3組的水平與對(duì)照組C比較均有增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

表2 ? Notch1、Jagged1在各組間的比較結(jié)果（x±s）

注：■與對(duì)照組C比較P<0.05;▲與IgA腎病N1組比較P<0.05;★與IgA腎病N2組比較P<0.05

3 ?討論

上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化（epithelial- mesenchymaltransition， EMT）在IgA腎病腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用，也是近幾年研究的熱點(diǎn)[1]。上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化過程涉及許多信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，是一個(gè)比較復(fù)雜的過程[3]。

查汗·索林格等[4]研究發(fā)現(xiàn)IgA 腎病腎間質(zhì)纖維化程度與24 h尿蛋白定量存在相關(guān)性，分別為N1組（1.42±0.82）、 N2組（1.72±0.90）、N3組（2.57±1.24）。與該次的結(jié)果相似。24 h尿蛋白定量的結(jié)果在N1（2.05±1.75）、N2（2.27±0.99）、N3（2.46±1.58）組與C組（0.30±0.10）間比較，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。施映楓等[5]回顧性分析同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院腎內(nèi)科 2012—2016 年期間腎活檢病理確診為 IgA 腎病的 73 例患者的病理資料，不同牛津病理分型的患者，其血肌酐N1組（101.89±49.68）μmol/L 、N2組（146.14±60.30）μmol/L、 N3組（205.89±105.36）μmol/L，血尿素氮N1組（5.79±2.49）mmol/L、 N2組（7.13±2.33）mmol/L 、N3組（9.72±5.98）mmol/L，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。該實(shí)驗(yàn)關(guān)于臨床指標(biāo)的比較結(jié)果顯示，在各個(gè)臨床指標(biāo)中血肌酐、尿蛋白定量在各組間差異性較大。血肌酐在N2、N3組與對(duì)照組C差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且N3組與對(duì)照組C差異更顯著，這支持腎損害越重（N3組）血肌酐水平越高;而在對(duì)照組C與N1組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），這可能與N1組患者的病變輕，血肌酐均在正常范圍內(nèi)有關(guān)。陳燕[6]研究發(fā)現(xiàn)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè) Notch 1、Jagged 1 的結(jié)果顯示Notch1 和Jagged 1 隨著腎纖維化程度的加重表達(dá)也隨之增加，Notch1 各組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與該次的結(jié)果相一致。但在N1組的Notch1/Jagged1檢測(cè)中與對(duì)照組C有明顯差異，這提示該次檢測(cè)的IgA腎病患者血中的Notch1/Jagged1的表達(dá)，在臨床指標(biāo)出現(xiàn)改變之前可能就有了早期的改變，即先有信號(hào)通路的表達(dá)上調(diào)，隨后才有腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生，繼而出現(xiàn)腎功能的損害，血肌酐的上升。這可能提供了一個(gè)更加早期預(yù)測(cè)腎臟疾病發(fā)展的新指標(biāo)。

該實(shí)驗(yàn)中血尿酸在對(duì)照組C與N1、N2以及N3組間對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），且從相關(guān)性來說，也與Notch1并無明顯相關(guān)性。但有些研究提示高尿酸血癥在早期慢性腎損傷中起著重要的作用。這可能與該實(shí)驗(yàn)中的患者高尿酸血癥者極少，血尿酸水平普遍偏低，是否在來院前部分病歷已接受過一定的降尿酸治療，也無從追問，結(jié)果有待進(jìn)一步大樣本資料的證實(shí)。

現(xiàn)在關(guān)于Notch信號(hào)通路阻斷的進(jìn)一步研究已經(jīng)開展了不少，甚至有些已經(jīng)進(jìn)入了Ⅰ期臨床試驗(yàn)，提示大家要重視γ-分泌酶抑制劑（ DAPT）的副作用，因?yàn)槠渥饔梅浅V泛，可能引起多系統(tǒng)的問題[7-8]。

綜上所示，針對(duì)Notch信號(hào)通路及其阻斷劑的研究給該次進(jìn)一步治療提供了新的方法和靶點(diǎn)，提示Notchd/Jagged1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在IgA腎病時(shí)可能被激治療與疾病的發(fā)展。

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（收稿日期：2019-10-20）