外周血CD40、CD40L表達(dá)及血清BAFF水平對(duì)ITP患者療效的預(yù)測(cè)價(jià)值

尹鳳雷 尹娟 趙芳 張睿 劉靜 張薇 李淑晨 王娟

原發(fā)免疫性血小板減少癥（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）為臨床上常見(jiàn)的獲得性免疫介導(dǎo)出血性疾病，主要以血小板減少、骨髓巨核細(xì)胞正?；蛟龆酁槠渲饕R床表現(xiàn)［1-2］。該病發(fā)病機(jī)制尚不明確，可能與血小板膜抗原產(chǎn)生抗血小板抗體而使血小板破壞，而影響淋巴細(xì)胞的活化及免疫反應(yīng)［3］。B 細(xì)胞激活因子水平過(guò)高可破壞自身B 細(xì)胞的免疫耐受而出現(xiàn)免疫性疾病，但其水平過(guò)低又可導(dǎo)致免疫球蛋白成熟受阻而引起體液免疫缺陷，導(dǎo)致變異型免疫缺陷疾病的發(fā)生［4］。多項(xiàng)研究顯示外周血CD40、CD40L 表達(dá)及血清BAFF 水平在ITP 發(fā)生發(fā)展中具有重要的意義，但對(duì)于上述指標(biāo)對(duì)ITP 患者療效預(yù)測(cè)方面的研究較少，因此本研究旨在通過(guò)探討外周血CD40、CD40L 表達(dá)及血清BAFF 水平對(duì)ITP 患者療效的預(yù)測(cè)價(jià)值以期為該病的療效預(yù)測(cè)提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年12月至2019年3月在本院接受治療的ITP 患者80例（觀察組）及同期健康體檢患者100例（對(duì)照組）進(jìn)行研究。其中對(duì)照組男44例，女36例；年齡23～58 歲，平均（42.23±6.11）歲；BMI 指數(shù)21～29 kg/m2，平均（26.58±3.05）kg/m2。觀察組男55例，女45例；年齡21～59 歲，平均（42.22±6.31）歲；身體質(zhì)量指數(shù)（Body Mass Index，BMI）20～28 kg/m2，平均（26.33±2.88）kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn)：①觀察組患者符合《成人原發(fā)免疫性血小板缺少癥診治的中國(guó)專(zhuān)家共識(shí)》［5］中的相關(guān)診斷，對(duì)照組不符合相關(guān)診斷；②受試者無(wú)精神性疾??；③患者對(duì)本研究知情并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①病毒感染繼發(fā)ITP 的患者；②惡性腫瘤的患者；③藥物致出血者。兩組患者性別、年齡、BMI 指數(shù)對(duì)比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

①外周血CD40、CD40L 檢測(cè)：抽取觀察組治療前及對(duì)照組空腹外周靜脈血4 mL，加含單克隆熒光標(biāo)記抗體的鼠抗人CD40-FITC 及CD40L-PE各10 μL（試劑盒均購(gòu)自于美國(guó)R＆G 公司），混勻后室溫下孵育，以PBS 緩沖液清洗后進(jìn)行美國(guó)賽默飛世爾公司Attune NxT 型流式細(xì)胞儀檢測(cè)，每管收獲10 000 個(gè)細(xì)胞，以儀器配套軟件分析。②血清BAFF 檢測(cè)：采集調(diào)查對(duì)象血氧2 mL，在3 000 r/min 轉(zhuǎn)速下離心15 min，吸取0.8 mL 冷凍待測(cè)，以酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)BAFF 水平，試劑盒購(gòu)于美國(guó)Sigma 公司。③療效判斷標(biāo)準(zhǔn)：完全緩解：血小板計(jì)數(shù)在100×109L 以上，出血癥狀消失；有效：血小板計(jì)數(shù)在30×109L 以上且較治療前增加2 倍以上，無(wú)出血；無(wú)效血小板計(jì)數(shù)不足30×109L，與治療前相比上升不足2 倍或出現(xiàn)出血癥狀。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)將觀察組分為2 組，完全緩解及有效的患者劃入治療反應(yīng)組，無(wú)效的患者劃入治療無(wú)反應(yīng)組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用（）表示，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，相關(guān)性分析采用Perason 相關(guān)系數(shù)法，以受試者工作曲線（ROC）分析外周血CD40、CD40L 表達(dá)及血清BAFF 水對(duì)ITP 患者療效預(yù)測(cè)價(jià)值，以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2 組受試者外周血CD40、CD40L 表達(dá)及血清BAFF 水平對(duì)比

觀察組外周血CD40、CD40L 表達(dá)及血清BAFF 水平均明顯高于對(duì)照組的，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 2 組患者外周血CD40、CD40L 表達(dá)及血清BAFF水平對(duì)比（±s）Table1 Comparison of CD40，CD40L expression and serum BAFF levels in peripheral blood of 2 groups of patients（±s）

表1 2 組患者外周血CD40、CD40L 表達(dá)及血清BAFF水平對(duì)比（±s）Table1 Comparison of CD40，CD40L expression and serum BAFF levels in peripheral blood of 2 groups of patients（±s）

組別對(duì)照組觀察組t 值P 值CD40 7.31±2.07 12.92±3.05 6.721 0.000 CD40L 3.24±1.06 6.09±1.70 5.947 0.000 BAFF（ng/L）603.17±112.38 716.44±137.48 2.936 0.005

2.2 觀察組不同療效患者外周血CD40、CD40L表達(dá)及血清BAFF 水平對(duì)比

治療無(wú)反應(yīng)組患者患者外周血CD40、CD40L表達(dá)及血清BAFF 水平均明顯高于治療反應(yīng)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 ITP 患者外周血CD40、CD40L 表達(dá)及血清BAFF 水平與療效相關(guān)性分析

ITP患者外周血CD40、CD40L表達(dá)及血清BAFF水平均與療效呈顯著負(fù)相關(guān)，（r值分別為-0.691、-0.713、-0.652）。差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 觀察組不同療效患者外周血CD40、CD40L 表達(dá)及血清BAFF 水平對(duì)比（±s）Table2 Comparison of CD40，CD40L expression and serum BAFF levels in peripheral blood of patients with different curative effects in the observation groups（±s）

表2 觀察組不同療效患者外周血CD40、CD40L 表達(dá)及血清BAFF 水平對(duì)比（±s）Table2 Comparison of CD40，CD40L expression and serum BAFF levels in peripheral blood of patients with different curative effects in the observation groups（±s）

組別治療反應(yīng)組治療無(wú)反應(yīng)組t 值P 值n 56 24 CD40 11.63±3.73 15.92±5.09 2.127 0.045 CD40L 5.61±1.14 6.88±1.25 2.237 0.034 BAFF（ng/L）683.08±111.88 804.07±117.65 2.155 0.040

2.4 ROC 分析

ROC 曲線分析結(jié)果顯示骨髓CD40 對(duì)ITP 療效預(yù)測(cè)的cutoff 值為12.28 %，AUC 為0.892，靈敏度為83.16%，特異度為92.06%；外周血CD40L 對(duì)ITP 療效預(yù)測(cè)的cutoff 值為6.08%，AUC 為0.784，靈敏度為81.75%，特異度為90.25%；BAFF 對(duì)ITP療效預(yù)測(cè)的cutoff值為745.02 ng/L，AUC 為0.708，靈敏度為81.02%，特異度為90.14%。見(jiàn)圖1。

圖1 ROC 分析圖Figure1 ROC analysis chart

3 討論

臨床上出血性疾病中30%為ITP，該病與機(jī)體對(duì)自身抗原的免疫失耐受密切相關(guān)，但對(duì)于免疫失耐受的具體作用機(jī)制目前尚未被完全闡釋?zhuān)?-7］。ITP 患者自身抗體的產(chǎn)生與血小板、抗原遞呈細(xì)胞、T 細(xì)胞及B 細(xì)胞間的相互作用有關(guān)。該病的臨床治療難度大，部分患者常規(guī)治療難以起效發(fā)展成為難治性ITP。因ITP 發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，目前尚未完全明確，對(duì)于該病的診斷仍以排除性診斷為主，目前尚缺乏特異性較強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)室診斷依據(jù)，因而對(duì)于該病的療效預(yù)測(cè)的研究進(jìn)展較慢，而療效預(yù)測(cè)對(duì)于ITP 治療方案的選擇具有重大的影響，因此尋找合適的ITP 患者療效預(yù)測(cè)指標(biāo)一直是研究的熱點(diǎn)。

CD40、CD40L 為特異性免疫系統(tǒng)中共刺激分子重要的一員，其在體液免疫及細(xì)胞免疫中均有著重要的作用，目前已有大量研究證實(shí)CD40、CD40L 信號(hào)傳導(dǎo)途徑在腫瘤、艾滋病、移植物抗宿主病等多種自身免疫性疾病中發(fā)揮重要的作用［8-13］。本研究結(jié)果提示了ITP 的發(fā)病與CD40、CD40L 有密切的關(guān)系。在健康人體內(nèi)CD40L 僅在激活的T 淋巴細(xì)胞表面有暫時(shí)性的表達(dá)，CD40 在正常情況下表達(dá)量也較大，僅在各種病理?xiàng)l件下才會(huì)出現(xiàn)明顯的上調(diào)，CD40L 長(zhǎng)時(shí)間表達(dá)可抑制活化的自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞凋亡而引起自身免疫性疾病，因此其表達(dá)水平的高低可對(duì)患者的預(yù)后情況具有預(yù)測(cè)作用，預(yù)后較好者表達(dá)水平相對(duì)較高。研究證實(shí)ITP 患者的B 淋巴細(xì)胞增殖、活化、凋亡等均與健康人群有明顯的差異，ITP 患者樹(shù)突狀細(xì)胞接受內(nèi)毒素刺激后釋放BAFF 明顯較多，對(duì)于B 淋巴細(xì)胞的存活具有重要的意義［9］。研究顯示：當(dāng)采用大劑量激素進(jìn)行治療時(shí)，ITP 患者可出現(xiàn)BAFF 水平下調(diào)，提示BAFF 可能為ITP 潛在的治療靶點(diǎn)［14-15］。

綜上所述，ITP 患者外周血CD40、CD40L 表達(dá)及血清BAFF 水平明顯高于健康人群，無(wú)治療反應(yīng)患者外周血CD40、CD40L 表達(dá)及血清BAFF 水平明顯更高，上述指標(biāo)對(duì)ITP 患者療效具有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值。因本研究為單中心研究，樣本量較少，取得的結(jié)果可能有一定的偏差，下步將擴(kuò)大樣本量進(jìn)行進(jìn)一步深入研究。