雜質(zhì)吸附型凈化結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定谷物和動物飼料中37種霉菌毒素

王瑞國, 郭麗麗, 王培龍, 蘇曉鷗*, 宋志超, 林 剛, 朱榮華

(1. 中國農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究所, 農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究重點實驗室, 北京 100081; 2. 河南省獸藥飼料監(jiān)察所, 河南 鄭州 450008; 3. 奧特奇生物制品(中國)有限公司, 北京 100600)

霉菌毒素(mycotoxins)由霉菌在生長或生殖過程中產(chǎn)生[1],種類多達數(shù)百種[2],且化學性質(zhì)穩(wěn)定[3],是當前全球普遍關(guān)注的一類食品危害物[4]。霉菌對農(nóng)作物的污染幾乎無處不在,并且在谷物田間生長和加工儲存等各個環(huán)節(jié)都可能產(chǎn)生霉菌毒素[5]。谷物及其加工副產(chǎn)物是動物飼料的主要原料,由于霉菌毒素在谷物加工過程中的濃縮效應(yīng),飼料與一般谷物食品相比更容易受到霉菌毒素污染[6]。某些種類的霉菌毒素還能夠通過“飼料→養(yǎng)殖動物→動物性食品”殘留對人類健康造成威脅[7]。目前,飼料行業(yè)關(guān)注的霉菌毒素主要包括黃曲霉毒素、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、T-2毒素和玉米赤霉烯酮等數(shù)十種,可導致動物生產(chǎn)性能下降、繁殖力降低、免疫力低下和嘔吐、腹瀉、器官壞死等慢性和急性中毒癥狀[8]。鑒于霉菌毒素對人類健康的風險,世界衛(wèi)生組織將霉菌毒素納入食品安全體系重點監(jiān)測內(nèi)容[9],我國也對食品和飼料中黃曲霉毒素、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、T-2毒素、赭曲霉毒素A、展青霉素、伏馬毒素等規(guī)定了最高限量標準[10,11]。

谷物和動物飼料中霉菌毒素檢測方法可以分為快速篩查和確證檢測兩大類。其中,快速篩查方法包括酶聯(lián)免疫試劑盒[12]、膠體金試紙條[13]、熒光定量試紙卡[14]和適配體傳感器法[15]等,具有簡單、快速、成本低廉等特點,但存在一定的假陽性和假陰性,難以準確定量。確證檢測方法主要有高效液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)等,其中LC-MS/MS方法由于具有定性和定量準確、靈敏度高、多組分同步檢測等優(yōu)點,是當前食品和飼料中霉菌毒素確證檢測的主流方法[16]。樣品前處理技術(shù)是霉菌毒素LC-MS/MS檢測的關(guān)鍵步驟,主要包括免疫親和法[17]、固相萃取[18]、QuEChERS[19]等,這些方法雖然能夠有效去除樣品中的雜質(zhì)干擾,但存在操作復雜、費時耗力等缺點。近年來,通過雜質(zhì)吸附原理進行凈化的技術(shù)逐漸興起,以多功能柱為代表,該方法不需要柱活化、淋洗和洗脫等步驟,具有操作簡單、檢測通量高等顯著優(yōu)點[20],已經(jīng)成功應(yīng)用于食品[21]和飼料[22,23]樣品中多種霉菌毒素的同步檢測。

本研究采用一種國產(chǎn)新型雜質(zhì)吸附型固相萃取柱MLJ-1對谷物和飼料樣品進行凈化,結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜,同時測定37種霉菌毒素。傳統(tǒng)的固相萃取或QuEChERS凈化方法需要多個步驟操作,而本方法僅需要對樣品提取液“一步”過濾,即可完成樣品凈化過程,極大地節(jié)約了樣品前處理時間,提高了檢測效率。同類技術(shù)[21-23]一次測定5～26種霉菌毒素,而本方法可同時測定37種毒素,擴大了檢測目標物范圍。同時,通過優(yōu)化流動相和進樣方法,保證了方法靈敏度和準確度,為谷物和飼料中多種霉菌毒素的同步測定提供了一種簡單快速、準確可靠的方法。

1 實驗部分

1.1 儀器、試劑與材料

XEVO TQ-S超高效液相色譜-電噴霧電離源-串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國Waters公司); RVC 2-18臺式離心濃縮儀(德國CHRIST公司); N-EVAP-112型氮吹儀(美國Organomation公司); 3K15高速冷凍離心機(美國Sigma公司); VX-Ⅲ多管渦旋振蕩器(北京踏錦科技有限公司); Milli-Q超純水系統(tǒng)(美國Millipore公司)。

37種霉菌毒素標準品見表1,純度除伏馬毒素B3(≥95% )、α-玉米赤霉醇(≥97% )、β-玉米赤霉醇(≥97% )外,其他均≥98% ;雜色曲霉素、麥角柯寧堿、蛇形菌素、新茄病鐮刀菌烯醇、騰毒素、疣孢青霉原、青霉震顫素A、婁地青霉素C、黃綠青霉素等購于以色列Fermentek公司,其他購于美國Sigma公司。乙腈、甲醇、乙酸銨和甲酸(色譜純,美國Fisher公司); MLJ-1雜質(zhì)吸附型固相萃取柱(2.5 mL, 0.4 g,北京六角體公司); 0.22 μm尼龍濾膜(天津艾杰爾公司);實驗用谷物和動物飼料等樣品由國家飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心(北京)惠贈。

1.2 標準溶液的配制

根據(jù)限量要求和化合物在儀器上的響應(yīng)情況,將37種霉菌毒素分為A、B、C 3組(分組信息見表1), A組和B組用乙腈、C組用乙腈-甲醇(1∶1, v/v,下同)將單一霉菌毒素標準品配制成質(zhì)量濃度為100 mg/L 的標準儲備液;再分別移取適量A組、B組和C組標準儲備液用乙腈配制成質(zhì)量濃度分別為0.5、5、10 mg/L 的全混合標準溶液;進一步用乙腈稀釋,配制全混合標準系列工作液，待測物的質(zhì)量濃度分別為：A 組為0.5、2.0、5.0、10、15和25 μg/L;B 組為5、20、50、100、150和250 μg/L;C 組為10、40、100、200、300和500 μg/L。

1.3 樣品前處理

1.3.1 提取

稱取粉碎并過0.42 mm分樣篩的試樣5 g(精確至0.01 g)于50 mL離心管中,準確加入20 mL 84%乙腈提取液(含0.1%(體積分數(shù),下同)甲酸),渦旋混勻,振蕩提取20 min,于 8 000 r/min 離心5 min,立即移取上清液,備用。

1.3.2 凈化

將微孔濾膜連接到MLJ-1雜質(zhì)吸附型固相萃取柱的出口端,準確移取1 mL上清液加載到萃取柱上,施加正壓使過柱速度保持在約1滴/s,收集全部濾液于進樣小瓶中,UPLC-MS/MS測定。

1.3.3 基質(zhì)匹配混合標準系列溶液制備

選取類型相同、均勻一致且在待測物保留時間處的儀器響應(yīng)值小于方法檢出限30%的飼料樣品作為空白樣品,按1.3.1節(jié)提取步驟，得到空白基質(zhì)提取溶液。準確移取1 mL全混合標準系列工作液,于60 ℃真空濃縮或氮吹至近干,加入1 mL空白樣品提取溶液,渦旋使之充分溶解。再按1.3.2節(jié)凈化步驟操作,得到基質(zhì)匹配混合標準系列溶液。

1.3.4 標準加入法試樣溶液制備

無法得到理想的空白樣品時,可采用標準加入法進行定量。先從全混合標準系列工作溶液中選擇兩個不同的質(zhì)量濃度點(約為試樣中估算質(zhì)量濃度的1～5倍)的溶液各1 mL,于60 ℃真空濃縮或氮吹至近干,分別加入1 mL試樣提取溶液,渦旋混勻,然后另取一份1 mL試樣提取溶液,再分別按1.3.2節(jié)凈化步驟操作,得到3份待測試樣溶液。

1.4 UPLC-MS/MS分析條件

液相色譜條件:Acquity UPLC BEH RP18色譜柱(100 mm×2.1 mm, 1.7 μm,美國Waters公司);流動相A: 0.1 mmol/L 乙酸銨溶液(含0.1%甲酸);流動相B:甲醇溶液(含0.1%甲酸);柱溫40 ℃;流速0.3 mL/min;進樣體積0.5 μL。梯度洗脫程序:0～2.0 min, 95%A; 2.0～4.0 min, 95%A～80%A; 4.0～12.0 min, 80%A～5%A; 12.0～12.1 min, 5%A～1%A; 12.1～13.0 min, 1%A; 13.0～13.5 min, 1%A～95%A; 13.5～15.0 min, 95% A。

質(zhì)譜條件:玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、α-玉米赤霉醇和β-玉米赤霉醇為電噴霧負離子(ESI-)模式,其他目標物為電噴霧正離子(ESI+)模式;毛細管電壓:ESI+, 0.6 kV, ESI-, 2.5 kV;離子源溫度:150 ℃;脫溶劑溫度:450 ℃;脫溶劑氣和錐孔氣均為N2;脫溶劑氣流速:1 000 L/h;錐孔氣流速:40 L/h;采用多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式,母離子、子離子、錐孔電壓(CV)、碰撞能量(CE)等參數(shù)見表1。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

以甲醇-水(50∶50)為流動相,采用結(jié)合(combine)進樣方式,應(yīng)用儀器自帶的Masslynx軟件IntelliStart功能對目標化合物離子化方式、子離子及對應(yīng)的最佳錐孔電壓和碰撞能量等參數(shù)進行自動優(yōu)化。其中,正電離模式下獲得[M+H]+、[M+NH4]+或[M+Na]+,負電離模式下獲得[M-H]-。選擇響應(yīng)值高、質(zhì)荷比大且背景干擾低的2個子離子作為定量和定性離子。離子源溫度和毛細管電壓對目標物相應(yīng)強度影響顯著,考察目標物在不同離子源溫度(350～500 ℃)和錐孔電壓(±0.5～±2.5 kV)范圍的響應(yīng)值,發(fā)現(xiàn)離子源溫度450 ℃, ESI+ 0.6 kV/ESI- 2.5 kV時,平均響應(yīng)值最佳。此外,根據(jù)目標物色譜保留時間分段采集信號,每個化合物采集時間為RT±0.4 min,不采集時設(shè)置進樣狀態(tài)為“waste”,避免樣品進入質(zhì)譜,從而有效降低樣品基質(zhì)對質(zhì)譜的污染。

表 1 37種霉菌毒素的保留時間、加合方式、母離子、子離子、錐孔電壓和碰撞能量Table 1 Retention times (RTs), adducts, precursor ions, product ions, cone voltages (CVs)and collision energies (CEs) of the 37 mycotoxins

*Quantification ion.

2.2 色譜條件的優(yōu)化

本方法進樣液中含有84%的乙腈,部分目標物色譜峰的溶劑效應(yīng)明顯,表現(xiàn)為峰變寬、分叉、拖尾,峰面積重復性降低。本課題組前期研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn),降低進樣體積可有效消除溶劑效應(yīng),優(yōu)化的進樣體積為0.5 μL,可同時獲得良好的峰形和響應(yīng)強度,具體數(shù)據(jù)可參見文獻[20]。

圖 1 37種霉菌毒素(50 μg/L)在兩種流動相體系下的峰面積比較Fig. 1 Comparison of peak areas of the 37 mycotoxins (50 μg/L) with two different mobile phase systemsNos. are consistent with those of mycotoxins in Table 1.

圖 2 流動相中添加0.1 mmol/L 乙酸銨對37種霉菌毒素(50 μg/L)峰面積的影響Fig. 2 Effect of 0.1 mmol/L ammonium acetate in mobile phase on the peak areas of the 37 mycotoxins (50 μg/L) Percentage=(A1 -A0)/A0×100% , where A1 is the peak area of the analyte with 0.1 mmol/L ammonium acetate in mobile phase, and A0 is the peak area of the analyte without ammonium acetate in mobile phase.Nos. are consistent with those of mycotoxins in Table 1.

流動相的組成、配比和洗脫梯度不但影響目標化合物的色譜行為,還對目標化合物離子化效率和方法靈敏度有著很大影響。本研究首先考察了0.1%甲酸水/乙腈體系和0.1%甲酸水/甲醇體系對37種霉菌毒素色譜分離和相應(yīng)強度的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),各種化合物在乙腈和甲醇體系下均能正常出峰,但響應(yīng)強度存在很大差異(見圖1)。乙腈作為流動相時洗脫強度大,對同分異構(gòu)體及目標物與樣品基質(zhì)中的干擾雜質(zhì)分離度較甲醇差,而且甲醇的價格較乙腈低廉。因此,本研究選用甲醇作為流動相成分。進一步研究發(fā)現(xiàn),流動相中添加乙酸銨對黃曲霉毒素、T-2毒素等大部分霉菌毒素響應(yīng)值具有顯著增強作用,對伏馬毒素等少數(shù)毒素有抑制作用,但是流動相中較高濃度的乙酸銨會導致部分目標物峰形變差。流動相中添加0、0.05、0.1、0.5、1.0 mmol/L 乙酸銨的優(yōu)化結(jié)果顯示,添加0.1 mmol/L 乙酸銨既能保證良好的峰形又能增強大部分目標物的響應(yīng)強度(見圖2)。優(yōu)化條件下的37種霉菌毒素總離子流色譜圖見圖3。

研究過程中還發(fā)現(xiàn),赭曲霉毒素A、B和伏馬毒素B1、B2、B3易在儀器進樣針殘留,通常采用的洗針液乙腈-水(90∶10)無法有效去除,殘留量可達到10% ～20% ,從而對隨后的樣品產(chǎn)生污染。比較不同溶劑和配比的洗針液,發(fā)現(xiàn)甲酸-甲醇-水(5∶85∶10)清洗30 s能夠有效去除赭曲霉毒素和伏馬毒素在進樣針上的殘留。

圖 3 37種霉菌毒素(50 μg/L)的定量離子色譜圖Fig. 3 Quantitative ion chromatograms of the 37 mycotoxins (50 μg/L)Nos. are consistent with those of mycotoxins in Table 1.

2.3 樣品前處理

現(xiàn)有的霉菌毒素標準[24]和文獻[25]中,84%乙腈水溶液常被用于多種霉菌毒素同步測定的提取溶液。提取溶液中添加有機酸可以保持穩(wěn)定的pH值,有利于提高回收率。因此,本研究采用84%乙腈(含0.1%甲酸)作為樣品提取溶液,對伏馬毒素B1、B2、B3以外的目標物回收率能夠達到60%以上,但對于谷物中伏馬毒素的回收率只有40% ～60%左右,飼料特別是蛋白類飼料中伏馬毒素的回收率低至10%以內(nèi)。研究發(fā)現(xiàn),提高提取溶液中水的比例能夠顯著提高伏馬毒素的回收率,采用50%乙腈(含0.1%甲酸)時,谷物中伏馬毒素的回收率達到90% ～110% ,飼料中伏馬毒素回收率達到60%以上。但是,隨著提取溶液中水的比例增加,樣品基質(zhì)中共提取的雜質(zhì)含量也大幅度提高,增加了樣品凈化的難度,降低了檢測靈敏度。因此,從方法實用性的角度出發(fā),本研究仍然采用84%乙腈(含0.1%甲酸)作為樣品提取溶液。

圖 4 MLJ-1凈化玉米提取溶液實物效果圖Fig. 4 Example of extracted solution from corn sample purified by MLJ-1 cartridge

由于霉菌主要侵染在谷物和飼料的表面,相對于樣品內(nèi)源性成分而言,霉菌毒素屬于比較容易提取的物質(zhì)。實驗表明,常規(guī)的提取方式如超聲或振蕩20 min,即可到達霉菌毒素最大回收率。進一步增加提取時間,不但不能達到提高目標物回收率的目的,相反,會導致樣品內(nèi)源性雜質(zhì)的大量溶出,降低檢測的靈敏度和準確度。因此,應(yīng)嚴格控制樣品提取時間,避免樣品與提取溶液過長時間的接觸。

樣品凈化方面,本研究采用了一種國產(chǎn)新型雜質(zhì)吸附型固相萃取柱MLJ-1對樣品提取液進行凈化。實驗顯示,MLJ-1凈化柱能夠有效吸附樣品溶液中的色素和脂類物質(zhì),降低基質(zhì)效應(yīng),提高檢測靈敏度(見圖4)。MLJ-1凈化柱含有復合凈化材料,通過疏水作用力、離子交換等多重機制吸附樣品溶液中的雜質(zhì),對檢測目標物無吸附作用,不需要活化和洗脫過程,可直接過濾后上機測定,操作簡單、快速。但是,這類產(chǎn)品對樣品溶液中雜質(zhì)去除的能力有限,特別是樣品提取溶液中高濃度的干擾雜質(zhì)可能“穿透”凈化柱,從而造成較強的基質(zhì)效應(yīng)。為保證檢測結(jié)果的穩(wěn)定、一致,本研究采用1 mL樣品溶液凈化,均勻一致地施加正壓,使溶液的過柱速度保持在約1滴/s,收集全部濾液于進樣小瓶中,能夠獲得滿意的結(jié)果。

2.4 定量方法

質(zhì)譜檢測時,目標物受樣品基質(zhì)影響從而不可避免地產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)(離子抑制或離子增強),應(yīng)用同位素內(nèi)標或基質(zhì)匹配校準曲線可以抵消或降低基質(zhì)效應(yīng)對檢測準確度的影響。由于霉菌毒素同位素內(nèi)標價格昂貴,且只有少數(shù)幾種同位素內(nèi)標具有成熟的商業(yè)化產(chǎn)品。因此,本研究采用基質(zhì)匹配校準曲線進行定量。但是,在實際中很難獲得未受脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、伏馬毒素等污染的谷物和飼料空白樣品。對于這種情況,可以采用標準加入法,即向被測樣品提取溶液中添加標準品的方式進行定量。計算方法為:以加入標準溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標,對應(yīng)的峰面積為縱坐標,做線性回歸外推至橫坐標上截距的絕對值即為樣品溶液中目標物的質(zhì)量濃度。

表 2 37種霉菌毒素的基質(zhì)效應(yīng)、定量限和線性范圍和Table 2 Matrix effects, limits of quantitation (LOQs), and linear ranges of the 37 mycotoxins

Nos. are consistent with those of mycotoxins in Table 1.

2.5 方法學評價

2.5.1 基質(zhì)效應(yīng)

本研究采用基質(zhì)標準曲線斜率與溶劑標準曲線斜率的比值評價基質(zhì)效應(yīng)。兩者比值<0.8,并且越小說明基質(zhì)抑制作用越強;比值>1.2,并且越大說明基質(zhì)增強效應(yīng)越強;比值介于0.8～1.2之間,則說明基質(zhì)效應(yīng)影響不大[26]。表2顯示了37種霉菌毒素在玉米、面粉、棉粕、豆粕、豬濃縮飼料、豬配合飼料和牛精料補充料樣品中的基質(zhì)效應(yīng)。結(jié)果表明,目標物的基質(zhì)效應(yīng)同時受到目標物種類和樣品種類的影響,黃曲霉毒素類、赭曲霉毒素類、玉米赤霉烯酮類等約半數(shù)的目標物受基質(zhì)影響較小;伏馬毒素類有較強的基質(zhì)增強效應(yīng);麥角柯寧堿、膠霉毒素、HT-2毒素等具有較強的基質(zhì)抑制效應(yīng);同一目標物在不同樣品中存在基質(zhì)效應(yīng)差異較大的情況。為提高檢測準確度和精密度,本實驗采用基質(zhì)匹配曲線對方法性能的各項參數(shù)進行考察。

2.5.2 定量限和線性

根據(jù)安全限量要求和目標物在質(zhì)譜上的響應(yīng)強度,把37種霉菌毒素分成A、B、C 3類(見表1),分別確定定量限和線性范圍(見表2)。A、B、C 3類霉菌毒素的定量限分別為2、20、40 μg/kg,并用7種不同類型的谷物和飼料空白樣品做定量限濃度加標回收試驗,全部能夠滿足信噪比>10的要求。以空白樣本制備6個水平的基質(zhì)加標溶液,以目標化合物定量離子的峰面積為縱坐標,質(zhì)量濃度為橫坐,標繪制工作曲線。37種霉菌毒素在7類典型樣品基質(zhì)中線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)(R2)在0.981～0.999之間。

2.5.3 回收率和精密度

取玉米、面粉、棉粕、豆粕、豬濃縮飼料、配合飼料和牛精料補充料等7種典型谷物和飼料樣品,做4個水平(方法定量限及其5倍、10倍和25倍)的加標回收試驗,每個水平5個平行,回收率結(jié)果見圖5。結(jié)果顯示,絕大部分霉菌毒素在4個添加水平下的回收率介于80% ～120%之間;伏馬毒素B1、B2和B3的回收率較低且差異大,在豬濃縮飼料和牛精料補充料樣品中的回收率<10% ,在豆粕和棉粕樣品中的回收率介于16.6% ～32.9%之間,在玉米、面粉和豬配合飼料樣品中的回收率介于43.5% ～73%之間。平行測定的標準相對偏差(RSD)結(jié)果顯示,除伏馬毒素B1、B2和B3的RSD最高值分別為25.8% 、22.9%和22.0%外,其他目標物的RSD均<20% 。

以上結(jié)果表明,除個別霉菌毒素受樣品基質(zhì)類型影響外,本方法對絕大部分目標化合物的準確性和精密度較為理想,能夠滿足谷物和飼料樣品中37種霉菌毒素的篩查和定量檢測要求。

圖 5 37種霉菌毒素在7種典型樣品基質(zhì)中回收率結(jié)果箱式圖分析(n=5)Fig. 5 Box-plot analysis of recoveries of the 37 mycotoxins in seven typical sample matrices (n=5)Nos. are consistent with those of mycotoxins in Table 1.

2.6 能力驗證

應(yīng)用本方法參加2016年由歐盟國家參考實驗室比利時聯(lián)邦農(nóng)業(yè)與化學研究中心(coda-cerva)組織的國際食品和飼料中多種霉菌毒素檢測能力驗證(本實驗室編號為L4),對2個小麥粉中11種霉菌毒素進行定量測定,除伏馬毒素B1和B2結(jié)果離群外,其他8種霉菌毒素(黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、赭曲霉毒素A、T-2、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮)的測定結(jié)果均為滿意(|z|<2);參加2018年由上海市農(nóng)業(yè)科學院和比利時公共健康研究院(Sciensano)聯(lián)合的舉辦的亞洲和太平洋地區(qū)真菌毒素檢測能力驗證(本實驗室編號為211),對玉米粉和大麥芽粉樣品中赭曲霉毒素A、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮等3種目標物進行同步測定,結(jié)果均為滿意(|z|<2)。由此可見,除伏馬毒素因回收率低僅適合于篩查外,本方法具有良好的準確性和國際實驗室間的可比性,并且在檢測時間、成本和適用范圍上更具優(yōu)勢,可用作谷物和飼料中多種霉菌毒素的快速篩查和定量測定。

3 結(jié)論

本研究針對谷物和飼料易受多種霉菌毒素同時污染的現(xiàn)狀,采用新型雜質(zhì)吸附型凈化技術(shù),結(jié)合UPLC-MS/MS開發(fā)了37種霉菌毒素的同步測定方法。通過優(yōu)化色譜方法、進樣液體積、樣品提取和凈化方法等,有效提高了檢測靈敏度和準確度。樣品提取液直接過濾凈化后上機檢測,前處理操作簡單、快速。檢測結(jié)果經(jīng)過國際霉菌毒素檢測能力驗證,可用作谷物和飼料中多種霉菌毒素篩查和定量測定方法。