載DOX納米粒子在SKOV3細胞內累積的研究

劉硯螢 趙巖巖 黃茗宣 謝佳欣 耿瑞瑩 張池 張燕

摘? 要：目的：包載DOX的納米粒子在SKOV3細胞內累積的研究。方法：本實驗將人卵巢癌SKOV3細胞作為研究對象，在激光共聚焦顯微鏡觀測NPs、NPs-DOX熒光染料隨時間變化的累積情況。結果：NPs、NPs-DOX在體外培養(yǎng)的SKOV3細胞內熒光強度逐漸增強。結論：隨時間的增加，細胞內納米粒子的累積量逐漸增加，表現出時間依賴性。

關鍵詞：載藥納米粒子;DOX;SKOV3

中圖分類號：R318 文獻標志碼：A 文章編號：2095-2945（2020）15-0033-02

Abstract： Objective： To study the accumulation of DOX-loaded nanoparticles in SKOV3 cells. Methods： In this experiment， human ovarian cancer SKOV3 cells were used as the research object， and the situationthat NPs and NPs-DOX fluorescent dyes accumulated with time was observed by laser confocal microscope. Results： The fluorescence intensity of NPs and NPs-DOX increased gradually in SKOV3 cells cultured in vitro. Conclusion： with the increase of time， the accumulation of intracellular nanoparticles increased gradually， showing a time-dependent manner.

Keywords： drug-loaded nanoparticles; DOX; SKOV3

現如今，婦科惡性腫瘤種類繁多，卵巢癌所占的死亡率最高，其中大多數原發(fā)于卵巢，隨著目前臨床治療手段的完善，臨床上，應用腫瘤標記物進行篩查，可提前發(fā)現患者腫瘤，及早進行治療。卵巢癌是以手術治療為主，輔以放化療[1]。但其療效仍相對局限，實際上，化療藥在對卵巢癌細胞造成傷害的同時，對機體各個系統(tǒng)和器官也造成不同程度的損害。臨床上的一線化療方案主要還是鉑類聯合紫杉醇，作用于細胞DNA，但在治療過程中，治療效果上仍相對有限，卵巢癌對這類藥物，產生阻滯及外排，在很大程度上影響著臨床腫瘤治療的效果。應用化療藥物后，引起多種并發(fā)癥，降低患者的生活質量，降低患者生存幾率[2-4]。阿霉素（adriamycin;又稱多柔比星，doxorubicin，DOX），目前多在實體腫瘤化療中發(fā)揮作用，它是一種廣譜蒽環(huán)類，可以抗腫瘤的藥物[5]?？萍歼M步，納米技術在多方面皆有應用，其中納米藥物更是引起關注。多篇文獻報道，在抗腫瘤治療中，載體納米藥物有更好的療效。納米藥物，通過物理、化學等方式將傳統(tǒng)化療藥物負載到納米粒子上，得到納米化療藥。納米藥物載體粒徑小，通過腫瘤的特殊效應，聚積于腫瘤內部，改變了化療藥物難溶于水，對非腫瘤細胞有殺傷性等缺點[6，7]。將納米技術與醫(yī)學相結合，改變了化療藥物的溶解度和穩(wěn)定性，利用納米粒子的特性，減輕了化療藥物帶來的毒副作用。本實驗旨在研究包載DOX的納米粒子在人卵巢癌SKOV3細胞內的累積情況。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

（1）實驗細胞與質粒

SKOV3由佳木斯大學生命科學中心細胞庫惠贈;NPs、NPs-DOX由國家納米科學中心提供。

（2）試劑與耗材（見表1）

1.2 實驗方法

（1）載藥納米粒子在細胞內的累積：于激光共聚焦專用平皿中，接種SKOV3細胞，置于培養(yǎng)箱中孵育24h，培養(yǎng)條件為37℃、5% CO2。

（2）加入250μg/mL的NPs、NPs-DOX，分別培養(yǎng)30min、60min、120min后。

（3）使用Olym-pus FV1000共聚焦顯微鏡，檢測細胞內藥物的累積情況。

2 結果

觀察NPs-DOX在SKOV3內累積的情況，結果如圖1所示，隨著時間的增加，細胞內的NPs-DOX熒光強度逐漸增強。反映了納米粒子進入細胞內的量隨時間的增加而增加，呈現了時間依賴性。

3 討論

腫瘤細胞與正常細胞的內外微環(huán)境有很大的差異，pH值、對熱敏感性、谷胱甘肽含量以及血管狀態(tài)等方面對腫瘤細胞均有影響[8]。納米粒子利用這種特點，使載藥納米粒子進入腫瘤細胞內釋放，從而可以大大減少正常組織對藥物副作用的影響。本實驗利用共聚焦顯微鏡，觀察載藥納米粒子隨時間增加，其在SKOV3細胞內逐漸增加。由此可知，納米粒子包裹的DOX可進入腫瘤細胞內，快速釋放DOX，并通過納米粒子的協同治療，發(fā)揮良好的體外抗腫瘤作用。

納米技術在腫瘤的治療中，得到廣泛關注。載藥納米粒子在抗腫瘤藥物中，通過加強有效遞送介質發(fā)揮著重要作用。將靶向性和功能性納米藥物載體與機體的生理環(huán)境結合研究，在治療中發(fā)揮更大的作用，減輕了化療藥物帶來的毒副作用，更少的使用藥物，減少耐藥性。使藥物作用更有效地抑制腫瘤細胞。納米藥物載體的使用，結合化學療法，放療和成像技術等多種腫瘤治療方法，以及多種抗癌合作方式，可以提高腫瘤組織的敏感性，并且藥物的抗腫瘤作用是更有效地發(fā)揮作用。改善納米藥物載體的結構和功能，研究和開發(fā)具有更好生物相容性的納米載體，進一步促進納米藥物載體的臨床研究將成為未來的重要研究領域。

參考文獻：

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