具有潛在改善炎癥反應(yīng)益生菌的篩選

崔鵬月1,2,彭 燦3,劉松玲2,4,5,朱宗濤2,蘇 敦2,4,5,雙 全

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,內(nèi)蒙古呼和浩特 010018; 2.深圳市華大農(nóng)業(yè)應(yīng)用研究院,廣東深圳 518120; 3.深圳市環(huán)境微生物基因組學(xué)與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東深圳 518083; 4.深圳華大生命科學(xué)研究院,廣東深圳 518083; 5.深圳國(guó)家基因庫(kù),廣東深圳 518120)

炎癥反應(yīng)是由組織損傷或病原體感染引發(fā)的免疫反應(yīng)過(guò)程,當(dāng)免疫反應(yīng)發(fā)生紊亂或者持續(xù)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),會(huì)使細(xì)胞持續(xù)分泌促炎因子,從而引發(fā)慢性炎癥損傷,進(jìn)一步引發(fā)多種慢性疾病,包括動(dòng)脈粥樣硬化、肥胖、糖尿病等[1]。過(guò)去幾十年來(lái),人們對(duì)益生菌在這些慢性疾病的炎癥反應(yīng)中所起的作用表現(xiàn)出濃厚的興趣[2-3]。越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn),益生菌可通過(guò)其免疫作用[4]、代謝作用[5]和調(diào)節(jié)腸道菌群[6]等多種機(jī)制來(lái)緩解炎癥反應(yīng)進(jìn)而維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)。

目前的研究主要集中在改善炎癥反應(yīng)益生菌的鑒定[7-8]和改善炎癥反應(yīng)機(jī)理[9]。然而,如何篩選具有炎癥調(diào)節(jié)作用的益生菌菌株是個(gè)難題。巨噬細(xì)胞是主要的免疫細(xì)胞,分泌細(xì)胞因子的水平在評(píng)價(jià)細(xì)胞免疫功能中至關(guān)重要[10],因此研究益生菌與炎癥巨噬細(xì)胞體外的相互作用對(duì)具有炎癥調(diào)節(jié)作用益生菌的篩選有著重要意義。

為了找到具有潛在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的益生菌,本文利用細(xì)胞模型分析10株供試菌株對(duì)炎癥模型細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用,并比較優(yōu)選出的4株潛在益生菌的胃腸道耐受能力、粘附能力、抑菌能力和抗生素敏感性,以期為特定功能益生菌的開(kāi)發(fā)與利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

菌株來(lái)源 深圳華大農(nóng)業(yè)應(yīng)用研究院,試驗(yàn)所用10株菌的菌株來(lái)源如表1所示,菌種存于50%甘油管中,放置于-20 ℃保存?zhèn)溆?BS培養(yǎng)基和MRS培養(yǎng)基 中國(guó)青島海博生物技術(shù)有限公司;佛波酯、脂多糖Lipopolysaccharides(LPS) Sigma;ELISA:3種免疫因子檢測(cè)試劑盒 R&D Systems;PRMI 1640培養(yǎng)基、胎牛血清(FBS)、FALCON胰蛋白酶(1∶250) Gibco;胃蛋白酶(1∶10000) Coolaber;細(xì)胞培養(yǎng)板 Axygen;PBS緩沖液 Beyotime;慶大霉素、鏈霉素、卡那霉素、新霉素、氨芐青霉素、四環(huán)素、紅霉素、克林霉素、氯霉素、甲氧芐啶、環(huán)丙沙星、利福平、萬(wàn)古霉素 BBI Life Sciences;實(shí)驗(yàn)所用其他試劑 均為國(guó)產(chǎn)分析純;HT-29人結(jié)腸癌細(xì)胞 協(xié)和醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)所細(xì)胞中心。

表1 實(shí)驗(yàn)菌種Table 1 Lactobacillus strains in experiment

YXQ-30SII立式壓力蒸汽滅菌鍋 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司;FP1100全自動(dòng)生長(zhǎng)曲線(xiàn)儀 芬蘭百奧斯科林公司;58108冷凍高速離心機(jī) 德國(guó)Eppendorf;Galaxy170R CO2培養(yǎng)箱 德國(guó)Eppendorf;Synergy 2酶標(biāo)儀 美國(guó)BioTek;SHP-250Y生化培養(yǎng)箱 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;DW-86L490超低溫保存箱 青島海爾股份有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 菌株對(duì)LPS誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞炎性細(xì)胞因子調(diào)節(jié)作用 參考徐棟花等[11]、謝超等[12]的方法加以改進(jìn)。將待測(cè)菌株中的雙歧桿菌以3%接種量接種于BS培養(yǎng)基中(厭氧管),其余待測(cè)菌株以相同的接種量接種于MRS培養(yǎng)基,37 ℃培養(yǎng)18 h,傳代培養(yǎng)2次。將活化好的待測(cè)菌株,37 ℃培養(yǎng)至穩(wěn)定期,離心收集菌體,PBS洗滌2～3次,熱滅活后,將菌體懸浮于RPMI 1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,調(diào)整為1×107CFU/mL備用。

從液氮罐中取出THP-1細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)復(fù)蘇、傳代培養(yǎng),培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)增至所需用量。調(diào)整THP-1細(xì)胞數(shù)為1×106cell/mL,接種于6孔板(共2 mL培養(yǎng)基),加入100 ng/mL的佛波酯(PMA)對(duì)THP-1進(jìn)行誘導(dǎo)處理72 h成為巨噬細(xì)胞(Macrophage)。去除培養(yǎng)上清,用RPMI1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基洗滌2～3次,加入含有受試菌株菌懸液(1×107CFU/mL)的RPMI 1640培養(yǎng)基進(jìn)行共培養(yǎng)16 h,每個(gè)受試菌株設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。對(duì)照組為Macrophage+RPMI 1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基。模型組為Macrophage+RPMI 1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基,然后除對(duì)照組以外各孔添加脂多糖(LPS)母液,至終濃度為1 μg/mL,處理6 h后,用相應(yīng)的試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量變化,用以篩選出具有抗炎能力的益生菌。

1.2.2 模擬胃腸液耐受試驗(yàn) 參考文獻(xiàn)[13-14]方法加以改進(jìn)后進(jìn)行試驗(yàn)。在pH2.0和pH3.0無(wú)菌PBS中,加入3.5 g/L胃蛋白酶過(guò)濾除菌,制成模擬胃液。在pH8.0無(wú)菌PBS中,加入1.0 g/L胰蛋白酶和0.3%膽鹽過(guò)濾除菌,制成模擬腸液,試驗(yàn)前需要對(duì)人工模擬胃液、腸液進(jìn)行37 ℃預(yù)熱,備用。

供試菌株傳代培養(yǎng)2次,菌株長(zhǎng)至穩(wěn)定期時(shí),各取1 mL菌液,離心收集菌體,PBS洗滌2～3次,分別加入與培養(yǎng)液等量的pH2.0和pH3.0模擬胃液,37 ℃培養(yǎng)3 h,用平板計(jì)數(shù)法測(cè)活菌數(shù)。菌株存活率的計(jì)算公式為:菌株的存活率(%)=3 h活菌數(shù)/0 h活菌數(shù)×100。

取1 mL菌液,離心收集菌體,PBS洗滌2～3次,分別加入與培養(yǎng)液等量的pH3.0模擬胃液,37 ℃培養(yǎng)3 h,離心收集菌體,加入1 mL模擬腸液繼續(xù)37 ℃培養(yǎng)3 h,用平板計(jì)數(shù)法分別檢測(cè)菌體與人工模擬胃液37 ℃共培養(yǎng)0 h時(shí)的活菌數(shù)和檢測(cè)菌體與腸液37 ℃共培養(yǎng)3 h后的活菌數(shù),菌株的存活率的計(jì)算公式為:菌株的存活率(%)=3 h活菌數(shù)/0 h活菌數(shù)×100。

1.2.3 菌株粘附能力試驗(yàn) 參考Gagnon等[15]方法并加以改進(jìn)。離心收集培養(yǎng)至穩(wěn)定期的供試菌株,并用PBS洗滌2～3次,最后用細(xì)胞完全培養(yǎng)基(RPMI 1640+10%胎牛血清)將其重懸至5×108CFU/mL備用。從液氮罐中取出HT-29細(xì)胞,進(jìn)行復(fù)蘇、傳代培養(yǎng),培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)增至所需用量后,將HT-29細(xì)胞接種于12孔板中,待細(xì)胞長(zhǎng)至單層后,用無(wú)菌PBS沖洗細(xì)胞2～3次,然后加入1 mL供試菌株懸浮液。培養(yǎng)2 h后,PBS沖洗2～3次,用300 μL的胰蛋白酶消化3 min,加入700 μL含有10%胎牛血清的1640培養(yǎng)液終止反應(yīng)。并將所得溶液收集至無(wú)菌EP管中,并將收集的溶液進(jìn)行10倍梯度稀釋,涂板計(jì)數(shù)。同時(shí)對(duì)空白組的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。供試菌株的粘附能力的計(jì)算公式為:粘附能力(CFU/cells)=每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)粘附的細(xì)菌總數(shù)/每個(gè)培養(yǎng)皿的總細(xì)胞數(shù)。

1.2.4 抑菌試驗(yàn) 采用牛津杯法[16]檢測(cè)供試菌株對(duì)四種致病菌(大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和陰溝腸桿菌)的抑制活性。分別取0.1 mL四種致病菌懸液(108CFU/mL)于凝固的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板涂布,平衡30 min。用無(wú)菌的鑷子把無(wú)菌的牛津杯放在涂有病原菌平板上,然后吸取0.25 mL供試菌株發(fā)酵液109CFU/mL于牛津杯中。平放37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h,檢測(cè)抑菌圈直徑大小。

1.2.5 藥敏試驗(yàn) 參考文獻(xiàn)[17]進(jìn)行試驗(yàn),對(duì)供試菌株進(jìn)行13種抗生素敏感性試驗(yàn)。依據(jù)實(shí)驗(yàn)室原有說(shuō)明書(shū)配制各類(lèi)抗生素母液,取50 μL添加于96孔板中?；罨?調(diào)整菌液濃度到1×109CFU/mL,取50 μL菌液置于各樣孔,培養(yǎng)48 h,OD625分光光度計(jì)掃描檢測(cè)。以干酪乳桿菌ATCC334為質(zhì)控,陰性對(duì)照組添加50 μL去離子水和50 μL MRS培養(yǎng)液,陽(yáng)性對(duì)照組添加50 μL去離子水和50 μL待測(cè)菌株的MRS菌液。當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照組孔內(nèi)細(xì)菌明顯生長(zhǎng)時(shí),試驗(yàn)才有意義。樣品孔的檢測(cè)值(OD625)低于陰性對(duì)照組的2倍即可視為停止生長(zhǎng),并讀取該孔抗生素濃度即為抗生素對(duì)實(shí)驗(yàn)菌株的最小抑菌濃度(MIC)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)中涉及的試驗(yàn)數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean士SD)。采用SPSS 17.0軟件對(duì)試驗(yàn)中涉及的數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 改善模型細(xì)胞炎癥反應(yīng)益生菌的篩選

脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革蘭氏陰性細(xì)菌外膜的主要成分,作為一種天然免疫刺激劑,能刺激THP-1巨噬細(xì)胞合成并釋放多種細(xì)胞因子,如腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)及白細(xì)胞介素6(interleukin 6,IL-6)和白細(xì)胞介素1β(interleukin1β,IL-1β)等[18-19],因此以炎癥巨噬細(xì)胞為模型評(píng)價(jià)供試菌株的抗炎作用。由圖1可知,與空白組相比經(jīng)LPS誘導(dǎo)的模型組的TNF-α、IL-1β、IL-6水平均顯著升高(P<0.05),說(shuō)明炎癥模型建立成功。供試菌株對(duì)炎癥細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)發(fā)現(xiàn),10株菌對(duì)不同的炎癥性細(xì)胞因子的表達(dá)顯示了不同的作用。由圖1A可知,與模型組相比,各組均未顯著降低TNF-α的水平。而SS-9、JQI-7、SD-H9和LLY-606均顯著降低了炎癥模型細(xì)胞的IL-1β的表達(dá)(P<0.05),并且與空白對(duì)照組無(wú)顯著差異(圖1B)。同時(shí),菌株WX-94和SS-9顯著降低了炎癥模型細(xì)胞的IL-6的表達(dá)(P<0.05),并且與空白對(duì)照組無(wú)顯著差異(圖1C)。菌株SD-L8雖未顯著降低炎癥模型細(xì)胞IL-1β和IL-6的分泌,但可以發(fā)現(xiàn)其干預(yù)結(jié)果從數(shù)值上是降低了炎癥模型細(xì)胞IL-1β和IL-6的分泌,并與SS-9干預(yù)的結(jié)果無(wú)顯著差異(圖1B、圖1C)。因此推測(cè)菌株SD-L8具有降低炎性細(xì)胞因子分泌的潛能。目前研究證明,許多菌株可以在體外具有降低炎性細(xì)胞因子分泌的能力,但其作用的炎性細(xì)胞因子的類(lèi)型存在差異。王侃[20]在研究中驗(yàn)證了乳酸桿菌(LactobacilluscaseiCICC6002)能顯著降低炎癥模型細(xì)胞TNF-a的分泌(P<0.05)。Yoon等[21]研究表明,鼠李糖乳桿菌BFE5264和植物乳桿菌NR74能抑制由LPS刺激、PMA誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α。池海波等[22]研究發(fā)現(xiàn)羅伊氏乳桿菌ATCC53608能夠明顯抑制脂多糖(LPS)刺激的小鼠巨噬細(xì)胞系RAW 264.7R分泌炎性細(xì)胞因子IL-6。本試驗(yàn)中的供試菌株除不能顯著降低炎癥模型細(xì)胞TNF-a的分泌外,SS-9、SD-H9、WX-94和SD-L8對(duì)模型細(xì)胞炎癥反應(yīng)的干預(yù)情況與以上研究結(jié)果相近。

圖1 菌株對(duì)巨噬細(xì)胞THP-1炎癥性細(xì)胞因子分泌的調(diào)節(jié)作用Fig.1 Regulatory of strains on macrophagesTHP-1 inflammatory cytokine secretion注:*代表與空白組相比較,差異顯著,P<0.05;#代表與模型組相比較,差異顯著,P<0.05;Δ代表與SS-9組相比較,差異不顯著,P>0.05。

綜合考慮試驗(yàn)菌株對(duì)模型細(xì)胞炎癥反應(yīng)的干預(yù)情況,認(rèn)為SS-9、SD-H9、WX-94和SD-L8具有改善炎癥反應(yīng)的潛力,因此選取以上四株菌對(duì)胃腸道耐受能力、粘附能力、抑菌能力和抗生素敏感性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

2.2 菌株胃腸道耐受能力評(píng)價(jià)

益生菌相關(guān)產(chǎn)品通常以口服方式,經(jīng)過(guò)胃到達(dá)腸道發(fā)揮其益生作用。攝入食物不同時(shí)胃的pH也不盡相同,其范圍為1.5～5,并且正常人體內(nèi),十二指腸中膽汁鹽的濃度可達(dá)到0.3～3 g/kg[18-19]。因此,對(duì)胃液低pH和腸液中的膽鹽在一定時(shí)間內(nèi)有良好的耐受性是選擇益生菌的重要標(biāo)準(zhǔn)之一[20]。從表2可以看出所有菌株在pH3.0的人工胃液3 h后均能保持較高的存活率(81.02%～98.55%),表現(xiàn)出對(duì)pH3.0的人工胃液有良好的耐受性;而經(jīng)過(guò)pH2.0的人工胃液處理后,所有菌株的存活率較pH3.0的人工胃液低,SD-L8的存活率最高可達(dá)到46.82%;SS-9的存活率次之,可達(dá)到12.30%;其余兩株菌的存活率均未達(dá)到1%,推測(cè)以上4株菌在pH2.0的人工胃液下耐受性較差。

表2 菌株在模擬胃腸道環(huán)境下的存活率Table 2 Survival rate of bacteria insimulated gastrointestinal environment

所有菌株在pH3.0的人工胃液3 h后進(jìn)入人工腸液,處理3 h后,表現(xiàn)出對(duì)人工胃腸液具有不同程度的耐受能力,SS-9的存活率最高可達(dá)到58.40%;SD-L8、WX-94和SD-H9存活率分別為32.53%、39.41%和34.00%。

本試驗(yàn)中供試菌株對(duì)人工胃液耐受結(jié)果與劉蕓等[23]研究結(jié)果相近:植物乳桿菌FJAT-7926和干酪乳桿菌FJAT-7928對(duì)pH3.0人工胃液有良好的耐受性,處理2 h后,存活率分別為82.98%和77.42%。而pH2.0的人工胃液對(duì)植物乳桿菌FJAT-7926和干酪乳桿菌FJAT-7928的存活影響較大,處理2 h后,存活率分別為0.02%和0.07%。供試菌株對(duì)人工腸液耐受性?xún)?yōu)于高彩霞等[24]研究結(jié)果中干酪乳桿菌 BD0054、干酪乳桿菌LC2W和腸膜明串珠菌腸膜亞種BD1710對(duì)人工腸液的耐受性。

2.3 菌株粘附能力評(píng)價(jià)

菌株粘附于腸壁細(xì)胞的能力是其發(fā)揮作用的首要因素[25]。本研究以HT-29結(jié)腸細(xì)胞為模型評(píng)價(jià)菌株的粘附潛力。由圖2可以看出各菌株粘附能力存在顯著差異(P<0.05),SD-L8的粘附能力最強(qiáng),可達(dá)到(14.5±1.3) CFU/cells,WX-94的粘附能力最弱,也可達(dá)到(5.2±1.0) CFU/cells,SD-H9與SS-9的粘附能力,分別為(9.5±0.8)、(7.5±0.8) CFU/cells。以上結(jié)果表明,四株菌均可定植于腸道上皮細(xì)胞,并且與李海紅等[26]研究結(jié)果相似:鼠李糖乳桿菌具有較強(qiáng)的定植能力。乳酸菌對(duì)細(xì)胞粘附具有菌株差異性,即使是同源菌株對(duì)腸上皮細(xì)胞也具有不同的粘附特性[27]。目前普遍認(rèn)為乳酸菌的粘附性是決定其免疫調(diào)節(jié)活性的重要因素之一,粘附能力強(qiáng)的乳酸菌能更好地增強(qiáng)機(jī)體的免疫應(yīng)答[28]。菌株對(duì)細(xì)胞粘附能力的特異性與環(huán)境之間相互作用中涉及的結(jié)構(gòu)分子直接相關(guān),例如胞外多糖、菌毛、脂磷壁酸、表面蛋白等[27]。推測(cè)以上物質(zhì)可能在菌株調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答中發(fā)揮一定作用。

圖2 菌株對(duì)HT-29 細(xì)胞的粘附能力Fig.2 Adhesion of bacteria to HT-29 cells注:字母不同表示差異顯著,P<0.05。

2.4 菌株抑菌能力評(píng)價(jià)

目前普遍認(rèn)為益生菌可以通過(guò)產(chǎn)生有機(jī)酸、過(guò)氧化氫和類(lèi)似細(xì)菌素的蛋白或肽類(lèi)等物質(zhì),抑制或殺死病原菌,以維持腸道微生態(tài)平衡,保護(hù)人體免疫系統(tǒng)[29]。本試驗(yàn)采用牛津杯法分別探究以上四株乳酸菌對(duì)四株指示菌的抑制能力,結(jié)果如表3所示。四株乳酸菌對(duì)四株指示菌均有不同程度的抑制作用。SD-H9較其他三株菌相比對(duì)大腸桿菌的抑制能力較強(qiáng),差異顯著(P<0.05);WX-94對(duì)金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的抑制能力較強(qiáng),差異顯著(P<0.05);菌株SD-H9和WX-94對(duì)陰溝腸桿菌的抑制作用與菌株SD-L8和SS-9相比較弱,差異顯著(P<0.05)。

表3 菌株對(duì)指示菌的抑菌圈直徑Table 3 Bacteriostatic zone of the bacterial strain against the indicator bacteria

2.5 菌株抗生素敏感性評(píng)價(jià)

在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中,抗生素是防御細(xì)菌感染的主要方法,但細(xì)菌可以通過(guò)各種機(jī)制來(lái)對(duì)抗抗生素[30]?？股啬退幮哉谝泽@人的速度發(fā)展,并已成為一個(gè)日益增長(zhǎng)的全球公共衛(wèi)生問(wèn)題[31]。一些乳酸菌對(duì)一種或多種抗生素具有抗性[32]。本試驗(yàn)中抗生素敏感性測(cè)定參考?xì)W洲食品安全局(EFSA)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)[33]和WHO提供的NCCLS標(biāo)準(zhǔn)[34]。分析以上四株乳酸菌對(duì)13種抗生素的敏感性,與其相應(yīng)的MIC安全臨界值進(jìn)行比較,并選用干酪乳桿菌ATCC334為質(zhì)控菌株。結(jié)果如表4所示,質(zhì)控菌株干酪乳桿菌ATCC334對(duì)抗生素的敏感性與報(bào)道[17]中的相符,試驗(yàn)結(jié)果可信。SD-L8對(duì)新霉素的MIC值超過(guò)了其MIC安全臨界值;WX-94對(duì)慶大霉素的MIC值超過(guò)了其MIC安全臨界值;SS-9對(duì)紅霉素和克林霉素的MIC值超過(guò)了其MIC安全臨界值;SD-H9對(duì)13種抗生素的MIC值均符合MIC安全范圍。因鼠李糖乳桿菌、羅伊氏乳桿菌和植物乳桿菌在中國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《可用于保健食品的益生菌菌種名單》中,因此這三株菌可以在食品生產(chǎn)加工使用(嬰幼兒食品除外)。

表4 菌株對(duì)13種抗生素的MIC(μg/mL)Table 4 MIC values of bacteria to 13 kinds of antibiotics(μg/mL)

3 結(jié)論

本研究通過(guò)評(píng)價(jià)菌株對(duì)巨噬細(xì)胞炎癥模型的干預(yù)作用,篩選出四株(SD-H9、WX-94、SD-L8和SS-9)具有抑制模型細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子的潛在益生菌,并且通過(guò)檢測(cè)菌株的胃腸道耐受能力、粘附能力、抑菌能力和抗生素耐受性發(fā)現(xiàn),SS-9的整體胃腸道耐受能力最好,SD-L8的粘附能力最強(qiáng),SD-H9對(duì)13種抗生素的敏感性均在安全范圍內(nèi),并且四株菌對(duì)指示菌都有抑制作用。因此以上四株菌可作為具有抗炎能力的潛在后選菌株,后續(xù)還需要進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證菌株在體內(nèi)的功效。