興凱湖大白魚(yú)人工繁殖及胚胎發(fā)育研究

楊立軍，李霞，潘發(fā)林，楊翼羽，劉永波，綦天華

（長(zhǎng)春市水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心，吉林 長(zhǎng)春 130033）

興凱湖大白魚(yú)（Erythroculter ilishaeformis），又名興凱湖翹嘴鲌，屬鯉形目，鯉科，鲌亞科，鲌屬，是翹嘴鲌中的一個(gè)地理種群。興凱湖大白魚(yú)體色銀白、肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美，有“賽蟹肉”之稱，是中國(guó)四大名淡水魚(yú)之一，與烏蘇里江的大麻哈魚(yú)、綏芬河的三文魚(yú)并稱“邊塞三珍。在密山地區(qū)興凱湖大白魚(yú)依據(jù)重量分為一白（0.5～1.0 kg）、二白（1.0～1.5 kg）、三白（≥1.5 kg），市場(chǎng)售價(jià)可以達(dá)到 200～600 元/kg，經(jīng)濟(jì)價(jià)值非常高。為了調(diào)整吉林省漁業(yè)養(yǎng)殖結(jié)構(gòu)，提高養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)效益，作者于2018年6月10日引進(jìn)興凱湖大白魚(yú)進(jìn)行繁殖研究，探索興凱湖大白魚(yú)在吉林省養(yǎng)殖的可行性。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚(yú)

試驗(yàn)用親魚(yú)是2018年6月從黑龍江農(nóng)墾震達(dá)興凱湖大白魚(yú)研究所引進(jìn)的4 000尾三齡后備親魚(yú)，平均體質(zhì)量為0.25 kg，平均體長(zhǎng)為（25.50±2.08）cm，選擇體質(zhì)健壯、無(wú)病無(wú)傷的個(gè)體。

1.2 親魚(yú)運(yùn)輸

因?yàn)榕d凱湖大白魚(yú)鱗片易脫落，出水后容易死亡，故采用帶水過(guò)稱，減少對(duì)魚(yú)的傷害。運(yùn)輸采用箱式封閉運(yùn)輸車，備有液氧瓶持續(xù)增氧，運(yùn)輸前每立方米投放潑灑姜一袋，以減少魚(yú)種的應(yīng)激反應(yīng)。運(yùn)輸?shù)貧鉁?6℃，水溫12.9℃，運(yùn)輸密度為260 kg/m3，運(yùn)輸距離815km，運(yùn)輸時(shí)間9.5 h；運(yùn)輸成活率85%以上。

1.3 親魚(yú)培育

親魚(yú)池為面積4 000 m2的土池，池長(zhǎng)80 m，寬50 m，池深 3.0 m，培育池進(jìn)、排水方便，水源為井水，水質(zhì)優(yōu)良，符合國(guó)家漁業(yè)用水標(biāo)準(zhǔn)。

親魚(yú)入池前10 d，親魚(yú)池用生石灰進(jìn)行清塘消毒；親魚(yú)的放養(yǎng)密度為400尾/667 m2，同時(shí)套養(yǎng)100 g左右的鰱、鳙魚(yú)各300尾，鯽魚(yú)200尾。在整個(gè)培育過(guò)程中要求親魚(yú)池水深1.3 m以上，溶氧量大于5.0 mg/L，pH值7.5～8.5，透明度大于0.3 m。

親魚(yú)池定期檢測(cè)水質(zhì)情況，親魚(yú)池水質(zhì)檢測(cè)指標(biāo)：氨氮、亞硝酸鹽、pH值、溶解氧、總磷、總氮。

大白魚(yú)親魚(yú)的飼養(yǎng)采用全自動(dòng)投餌機(jī)投喂，每天3次，投喂量約占魚(yú)體體質(zhì)量的3%～5%。飼料為專用浮性配合飼料，蛋白質(zhì)含量36%。根據(jù)季節(jié)與水溫適當(dāng)增減投喂量，一般以飼料在1 h內(nèi)吃完為宜。興凱湖大白魚(yú)的魚(yú)病以防為主，防治結(jié)合?？赏ㄟ^(guò)微生物調(diào)節(jié)EM菌液1 L/667 m2，每15 d 1次；藥物預(yù)防，二氧化氯全池潑灑0.2 mg/L，每15 d 1次；底質(zhì)調(diào)節(jié)，底改250 g/667 m2，每15 d 1次。

1.4 魚(yú)病防治

水霉?。喊l(fā)現(xiàn)時(shí)間6月5日，發(fā)現(xiàn)部分魚(yú)浮在水面，體表有絲絮狀霉菌。主要是運(yùn)輸過(guò)程魚(yú)體擦傷，水溫較低引起。治療：聚維酮碘（10%）500 g/667 m2，霉凈300 g/667 m2，全池潑灑，每天1次，連續(xù)用藥兩次。治療效果良好，沒(méi)有出現(xiàn)死魚(yú)，沒(méi)有復(fù)發(fā)。

錨頭鳋：發(fā)現(xiàn)時(shí)間7月10日，打樣發(fā)現(xiàn)魚(yú)體有紅色出血點(diǎn)，鏡檢確診為錨頭鳋。治療：錨鳋克星全池潑灑，用量100 g/667 m2，連續(xù)2 d，每天1次。二氧化氯片全池潑灑，用量100 g/667 m2，連續(xù)2 d，每天1次。治療后再未發(fā)現(xiàn)錨頭鳋，也沒(méi)發(fā)現(xiàn)繼發(fā)性感染。

細(xì)菌性出血?。喊l(fā)現(xiàn)時(shí)間8月7日，興凱湖大白魚(yú)、白鰱有少量死亡，觀察發(fā)現(xiàn)鰓絲、鰭條充血，內(nèi)臟未發(fā)現(xiàn)充血。治療：出敗康全池潑灑，用量500 g/667 m2。每天1次，連續(xù)3次。治療后未再出現(xiàn)該病癥。

1.5 越冬管理

親魚(yú)采用原池越冬，越冬前使用敵百蟲(chóng)殺蟲(chóng)，聚維酮碘消毒，5 d后注水，使水深達(dá)到2.5 m。越冬期間及時(shí)掃雪，定期測(cè)溶氧。

1.6 人工繁殖

2019年4月10日挑選體格健壯的親魚(yú)210尾進(jìn)行強(qiáng)化培育，培育池1 300 m2，每天投喂小雜魚(yú)、煮熟的豆類1次，配合飼料3次。投喂量視攝食情況適當(dāng)調(diào)整。培育期間定期適量水流刺激。經(jīng)過(guò)兩個(gè)月的培育后解剖雌魚(yú)，成熟良好，計(jì)算相對(duì)懷卵量為 70～80 粒/g。

6月20日（水溫25℃左右），挑選親魚(yú)進(jìn)行催產(chǎn)，雌魚(yú)挑選腹部膨大而柔軟，卵巢輪廓明顯，生殖孔微紅的；雄魚(yú)手摸身體有明顯的粗糙感，輕壓腹部有白色精液流出，遇水即散。

催產(chǎn)藥物由寧波第二激素廠生產(chǎn)，分2次注射，2針間隔6 h。第一針為絨毛膜促性腺激素（HCG）500 I.U./kg于上午10：30注射完畢，第二針為絨毛膜促性腺激素（HCG）1100 I.U./kg+促黃體素釋放激素類似物（LRH-A3）200 ug/kg于下午 16：30注射完畢。雄魚(yú)的注射計(jì)量減半。注射部位為胸鰭基部。親魚(yú)注射完第二針催產(chǎn)劑后，按雌雄1.0∶1.1比例放入水泥產(chǎn)卵池（8 m×4 m×1.5 m）中，并進(jìn)行微流水刺激自然受精。親魚(yú)于23：30左右開(kāi)始產(chǎn)卵，約2個(gè)小時(shí)結(jié)束（水溫24.5～26.8℃）。

待親魚(yú)完全產(chǎn)卵后，在該產(chǎn)卵池的出水口處人工收集受精卵，移入孵化池微流水（流速為0.2 m/s）孵化。

受精卵的孵化密度約平均 7萬(wàn)～10萬(wàn)粒/m3，孵化時(shí)避免陽(yáng)光直射；孵化用水要求水質(zhì)清新，孵化水溫為 24.5～27℃，溶氧量為 5.5～6.5 mg/L，pH值為7.8～8.2，孵化時(shí)由專人值班，及時(shí)剔除壞卵。受精卵經(jīng)20 h孵化后破膜，剛孵出的稚魚(yú)體長(zhǎng)約（4.75±0.35）mm。

1.7 有效積溫計(jì)算

有效積溫 K=N·T（℃·h），N 為發(fā)育歷期，即胚胎發(fā)育周期所需時(shí)間（h），T為胚胎發(fā)育期間的平均溫度（℃）。

1.8 胚胎發(fā)育取樣與觀察方法

2018年6月28—29日取部分興凱湖翹嘴鲌受精卵置于培養(yǎng)皿中孵化，每隔30 min換1次水。水溫控制在26～27℃之間。另取100粒發(fā)育正常的受精卵分放在5只培養(yǎng)皿中，并分別置于雙筒解剖鏡下觀察，從精卵結(jié)合開(kāi)始計(jì)時(shí)，從25 min受精卵形成到胚胎發(fā)育的20 h內(nèi)共采樣23次（表1），觀察時(shí)記錄各發(fā)育時(shí)期的外部形態(tài)結(jié)構(gòu)，并用奧林帕斯顯微鏡對(duì)樣本進(jìn)行觀察拍攝各發(fā)育階段胚胎的外部形態(tài)，記錄水溫、pH值等因子。

2 結(jié)果與分析

2.1 受精卵特點(diǎn)

興凱湖大白魚(yú)的成熟卵呈圓球形，淡黃綠色或青灰色，受精卵為半浮性非黏性卵。而太湖大白魚(yú)的成熟卵則為黃色、墨綠色或青灰色，受精卵為黏性沉性卵。興凱湖大白魚(yú)和太湖大白魚(yú)屬于不同地理種群、但同屬于鯉科不同亞科魚(yú)類。以上差異產(chǎn)生可能是與物種自身遺傳演化產(chǎn)生差異有關(guān)，也可能是地域分布引起的。還有可能是人工養(yǎng)殖環(huán)境下，餌料來(lái)源、成分不同，水體的理化因子不同引起的。

2.2 胚胎發(fā)育時(shí)序

興凱湖翹嘴鲌的卵為端黃卵，其卵裂方式為盤(pán)狀卵裂（均等分裂型），受精后原生質(zhì)集中在動(dòng)物極，卵黃集中于植物極。根據(jù)其受精卵發(fā)育過(guò)程的形態(tài)變化和特點(diǎn)，可將其胚胎發(fā)育劃分為以下13個(gè)時(shí)期共計(jì)23個(gè)階段，詳見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，在水溫為24.5～26.8℃之間時(shí)，受精25 min開(kāi)始第一次卵裂，較其他學(xué)者研究的興凱湖大白魚(yú)卵裂時(shí)間延后5 min，比太湖大白魚(yú)提前了5 min，相差不是很大。在出膜期方面，則有很大不同，同是興凱湖大白魚(yú)，該試驗(yàn)中胚胎出膜期為20 h，其他學(xué)者發(fā)現(xiàn)出膜期為22 h 30 min，太湖大白魚(yú)則為25 h 40 min，而在有效積溫方面則差距更大。該研究中，興凱湖大白魚(yú)的有效積溫為486.98℃·h，較前兩者的603.00℃·h和619.82℃·h相比降幅很大。通過(guò)對(duì)比可知，胚胎發(fā)育時(shí)間及有效積溫除了與大白魚(yú)所屬種群有關(guān)外，還受自身所處地理位置、胚胎發(fā)育溫度影響較大。

在胚胎發(fā)育時(shí)序方面，該研究中的興凱湖大白魚(yú)為13個(gè)時(shí)期，太湖大白魚(yú)為19期，其他學(xué)者的興凱湖大白魚(yú)為23期。從整個(gè)發(fā)育順序上看，三者時(shí)期名稱雖有少量出入，但總體差異不大。雖各有不同但也基本上都符合鲌亞科魚(yú)類胚胎發(fā)育的一般規(guī)律。造成差異的主要原因可能是因?yàn)楦鲗W(xué)者劃分發(fā)育時(shí)期所參考的文獻(xiàn)不同或者不同水體中大白魚(yú)的群體有所差異。

表1 興凱湖大白魚(yú)的胚胎發(fā)育時(shí)序（水溫24.5～26.8℃）

序號(hào) 發(fā)育時(shí)期 距受精時(shí)間/（h：min）胚胎發(fā)育過(guò)程中的外部形態(tài)特征平均水溫/℃有效積溫/（℃·h）圖版16 胚孔封閉期 10：15 17 眼基出現(xiàn)期 10：45 18 眼囊期 11：30 19 尾芽期 12：10隨著胚層進(jìn)一步下包，外露的卵黃越來(lái)越小，胚層完全包圍卵黃囊，卵黃變?yōu)椴灰?guī)則圓形，神經(jīng)板中線略下凹，在卵黃栓末端形成圓形有凹陷的胚孔，胚孔逐漸變小但胚孔位置仍留有凹陷，直至封閉。胚體頭部前端抬起，略高于尾部，頭尾更接近，胚體前端隆起，逐步發(fā)育為前腦、中腦和后腦原基。后端薄而寬，為尾部的發(fā)育原基。在頭部中央兩側(cè)，有一對(duì)腎形的突起，即眼的原基。有兩對(duì)肌節(jié)出現(xiàn)。隨著頭尾的延伸，胚體的頭尾更接近，卵黃囊更接近圓形，眼囊清晰，胚體前端兩側(cè)呈長(zhǎng)橢圓形，同時(shí)清楚觀察到肌節(jié)已出現(xiàn)12～14對(duì)。胚體逐漸展長(zhǎng)，胚體后部腹面出現(xiàn)尾芽，尾芽開(kāi)始游離出卵黃囊，尾芽部有一層膜狀結(jié)構(gòu)把胚體與卵黃囊隔開(kāi)，眼囊逐漸變圓。24.5 12.25 圖版Ⅱ-1 24.6 12.30 圖版Ⅱ-2 24.6 18.45 圖版Ⅱ-3 25.2 16.80 圖版Ⅱ-4 20 晶體出現(xiàn)期 14：30 胚體繼續(xù)延長(zhǎng)，胚體尾部的邊緣出現(xiàn)皮褶。尾部離開(kāi)卵黃囊，出現(xiàn)尾鰭，脊索非常清晰，眼囊內(nèi)部為眼杯。 25.2 33.60 圖版Ⅱ-5 21 心臟出現(xiàn)期 17：40 22 出膜前期 19：10 23 出膜期 20：00肌肉開(kāi)始間歇性的微縮，出現(xiàn)肌肉效應(yīng)。在脊索前，卵黃囊前上方，眼下后方腹面形成心臟，腔內(nèi)有串狀的細(xì)胞團(tuán)，為心臟原基，且開(kāi)始跳動(dòng)，胚胎出現(xiàn)血液循環(huán)。胚體延展。彎曲的尾部已與軀干平行，頭部彎曲向腹部。卵黃囊前部為球形，后補(bǔ)延長(zhǎng)呈棒狀。胚胎在卵膜內(nèi)不停地?cái)[動(dòng)伸縮，并在卵膜內(nèi)做旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)，同時(shí)尾部和頭部不停地頂撞卵膜。大部分尾部先出膜，也有部分頭部先出膜，剛剛出膜的仔魚(yú)透明無(wú)色，具有泄殖腔，體長(zhǎng)為（4.8±0.4）mm，卵黃囊在魚(yú)體下方呈現(xiàn)前粗后細(xì)的椎體，形如胡蘿卜狀。此時(shí)仔魚(yú)鰭發(fā)育不完全，只能間歇地垂直游動(dòng)。26.2 82.97 圖版Ⅱ-6 25.7 38.55 圖版Ⅱ-7 25.3 21.08 圖版Ⅱ-8