阿爾巴斯型白絨山羊胚胎移植效果與分析

陶薩茹拉，烏力吉，李春生，王 莉，杜建儒，莫 仁，何云梅，烏仁圖娜勒，吉日嘎拉

（1.內(nèi)蒙古鄂爾多斯市家畜改良工作站，康巴什 017010；2.內(nèi)蒙古鄂托克旗家畜改良工作站，鄂托克 016100）

阿爾巴斯型白絨山羊胚胎移植效果與分析

陶薩茹拉1，烏力吉1，李春生1，王 莉1，杜建儒1，莫 仁1，何云梅2，烏仁圖娜勒2，吉日嘎拉2

（1.內(nèi)蒙古鄂爾多斯市家畜改良工作站，康巴什 017010；2.內(nèi)蒙古鄂托克旗家畜改良工作站，鄂托克 016100）

選取37只優(yōu)質(zhì)阿爾巴斯型白絨山羊母羊作為供體，300只普通山羊?yàn)槭荏w，采用遞減法注射FSH進(jìn)行超排。經(jīng)同期發(fā)情、超數(shù)排卵、人工授精等過程后，采用手術(shù)法子宮角回收胚胎，經(jīng)鑒定后移植。結(jié)果表明：37只供體共獲得345枚胚胎，可用胚胎308枚，只均獲得胚胎9.32枚、可用胚胎8.32枚，胚胎合格率高達(dá)89.28%。285只受體羊發(fā)情，發(fā)情率95%。將308枚胚胎移入273只受體，妊娠183只，受胎率67.03%，產(chǎn)羔197只，產(chǎn)羔率107.65%，繁殖率71.06%。

阿爾巴斯白絨山羊；超數(shù)排卵；胚胎移植

阿爾巴斯白絨山羊是經(jīng)過長期自然選擇和人工選育而形成的地方良種，是世界一流的絨肉兼用型品種，以絨細(xì)、產(chǎn)絨量高、紡織性能好、遺傳性能穩(wěn)定和改良其他絨山羊效果顯著等著稱，被列入首批發(fā)布的動(dòng)物遺傳資源保護(hù)名錄一級(jí)保護(hù)品種之中。其所產(chǎn)的羊絨曾獲意大利“柴格納”獎(jiǎng)，被譽(yù)為“軟黃金”、“纖維寶石”，是眾多畜產(chǎn)品中唯一以克為單位計(jì)價(jià)的紡織原料。阿爾巴斯白絨山羊是內(nèi)蒙古白絨山羊三大品系中的優(yōu)秀類群，它具有絨細(xì)、纖維長、白度高、光澤好、個(gè)體大，為絨山羊育種提供了好的素材。因此，內(nèi)蒙古鄂爾多斯市從2008年開始邀請(qǐng)區(qū)內(nèi)專家實(shí)施優(yōu)質(zhì)阿爾巴斯白絨山羊胚胎移植項(xiàng)目，并于2010年開始自主實(shí)施，取得了可喜的成績。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 供體羊選自阿爾巴斯白絨山羊原種場(chǎng)優(yōu)質(zhì)阿爾巴斯基礎(chǔ)母羊37只。受體選自鄂托克旗新召蘇木兩戶牧民的300只能繁母羊。

1.1.2 試驗(yàn)藥品和器械 PG：上海市計(jì)劃生育研究所生產(chǎn)，0.2 mg/mL瓶；FSH：寧波激素制品廠，100 IU/瓶；LH：寧波激素制品廠，200 IU/瓶；CIDR栓：澳大利亞生產(chǎn)；PBS：新西蘭生產(chǎn)；Holding液：美國AB Tecnology；生理鹽水，酒精，碘酒，青霉素；黃安粉，新潔爾滅，石蠟油，凡士林。手術(shù)器械2套（手術(shù)刀，剪刀，組織鉗，止血鉗，縫合針，持針鉗，手術(shù)推車，保定架），體視顯微鏡，水浴鍋，恒溫箱，滅菌鍋，創(chuàng)布，假陰道，開膣器，輸精器，鑷子，等等。

1.2 方法

1.2.1 供受體羊的選擇

1.2.1.1 供體羊選擇標(biāo)準(zhǔn) 完全符合本品種的體型外貌特點(diǎn)；具有穩(wěn)定的遺傳能力，沒有遺傳疾病；繁殖機(jī)能旺盛；體質(zhì)健壯沒有任何傳染疾??；發(fā)情周期正常，發(fā)情癥狀明顯；年齡2～5周歲。

（1）母羊:絨細(xì)度15.0 μm以下，產(chǎn)絨量850 g以上；

（2）公羊:絨細(xì)度15.50μm以下，產(chǎn)絨量1 250 g以上。

1.2.1.2 受體羊選擇標(biāo)準(zhǔn) 受體羊要選擇體型較大，繁殖率較高，哺乳力較強(qiáng)，母性強(qiáng)，對(duì)地方適應(yīng)性強(qiáng)的優(yōu)良羊只。受體羊的健康狀況良好，已進(jìn)入發(fā)情季節(jié)（也就是說，和供受體的發(fā)情時(shí)間較近或一致）、產(chǎn)羔后斷奶至少1個(gè)月以上的空懷母羊。從產(chǎn)羔情況看，2～4胎產(chǎn)羔史的青壯羊?yàn)樽罾硐氲氖荏w，一般不用育成羊作為受體羊。1.2.2供受體羊的飼養(yǎng)管理與訓(xùn)練 供受體羊的飼養(yǎng)管理與正常繁殖生產(chǎn)母羊的要求基本一致。供受體羊手術(shù)前兩個(gè)月進(jìn)行場(chǎng)地適應(yīng)及強(qiáng)化飼養(yǎng)。手術(shù)前要求羊只身體健康，達(dá)到中上等膘情，防止過肥或過瘦導(dǎo)致乏情或不排卵。術(shù)前不要突然變換飼養(yǎng)管理環(huán)境，改變飼養(yǎng)方式及飼料。防止出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，購進(jìn)受體母羊越早，適應(yīng)環(huán)境的時(shí)間越早越好；保持飼養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定，飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生、干燥，棚舍溫度適宜。

1.2.3 同期發(fā)情與超數(shù)排卵 2012年10月14日開始將供體羊分3組放入CIDR（定為0天），10月14日放栓的定為第1組，15日放栓的定為第2組，16日放栓的定為第3組，按照分組順序，從10月23日開始撤栓并開始注射FSH，按照分組順序10月25日下午注射PG。10月31日第1組開始手術(shù)，11月1日第2組手術(shù)，11月2日第3組手術(shù)。

1.2.4 人工授精 早晚各試情一次，確定母羊發(fā)情后進(jìn)行人工授精。以鮮精授精為主。精液活力0.7以上，每次輸精有效精子數(shù)不少于3 000萬個(gè)，輸精次數(shù)2～3次，最關(guān)鍵的輸精是第2次。稀釋后精液溫度保持在25～30℃。嚴(yán)格要求配種每個(gè)環(huán)節(jié)的衛(wèi)生和消毒。選擇合適的輸精槍，子宮頸輸精。確認(rèn)發(fā)情時(shí)立即進(jìn)行第1次輸精，之后間隔12 h輸精1次。詳細(xì)做供體羊的配種記錄。

1.2.5 受體羊同期發(fā)情處理 根據(jù)供體羊分組及同期發(fā)情處理情況，同步處理受體羊。撤栓注射PG后12 h開始試情，對(duì)發(fā)情受體羊做好發(fā)情時(shí)間記錄，并做好標(biāo)記。

1.2.6 胚胎的采集、檢查和鑒定

1.2.6.1 胚胎采集 供體羊在開始配種6.5～7 d后沖胚，在沖胚手術(shù)前24 h停食，并做好手術(shù)前的準(zhǔn)備。采集胚胎過程如下：供體母羊麻醉→上手術(shù)臺(tái)→術(shù)部剃毛→消毒→打開術(shù)口→對(duì)卵巢黃體檢查→鏡檢查合格沖胚（子宮角法）→撿胚（選出有效胚胎）→供體母羊術(shù)部的縫合、消毒→下手術(shù)臺(tái)。術(shù)后觀察創(chuàng)口恢復(fù)情況，肌注青霉素1～3 d。

1.2.6.2 胚胎檢查和鑒定 把盛有沖卵回收液的表面皿放在立體顯微鏡下仔細(xì)檢查，不可遺漏。完全收集好以后進(jìn)行胚胎等級(jí)鑒定。1級(jí)：優(yōu)秀胚。發(fā)育正常，胚齡與發(fā)育相吻合，卵裂球輪廓清楚，透明度適中，細(xì)胞密度大，卵裂均勻，無孿性的細(xì)胞。2級(jí)：良好胚。發(fā)育基本符合預(yù)定胚齡，輪廓清楚，明暗適中或稍暗稍淡，細(xì)胞密度較小或小型卵裂過多，細(xì)胞變性率10%～20%。3級(jí)：一般胚，輪廓不清楚，色澤過暗或過淡，細(xì)胞密度小，細(xì)胞孿性率30%～40%。4級(jí)：不可用胚。未受精卵和變性胚。

將檢出的胚胎放入盛有保存液的培養(yǎng)皿中。超排供體羊在發(fā)情后第5.5～6天用子宮沖胚法采集胚胎。此時(shí)胚胎處于以下發(fā)育期：早期桑葚胚（EM），緊縮桑葚胚（M），早期囊胚（EB），擴(kuò)張囊胚EXB。

1.2.7 胚胎移植 胚胎移植時(shí)對(duì)受體的手術(shù)采用內(nèi)窺鏡手術(shù)法。胚胎的移植部位與供體母羊沖胚部位一致。仔細(xì)觀察登記受體羊黃體發(fā)育情況，沒有黃體的受體羊淘汰。抽好胚胎以后，將受體羊黃體發(fā)育良好一側(cè)的子宮角取出，用尖端磨鈍的10#針頭（或用曲別針尖）在子宮壁上扎一孔，把裝有胚胎的移植器從此孔插入子宮腔內(nèi)，伸至子宮角端后將胚胎輕輕退出即可。注意不要在子宮角內(nèi)扎進(jìn)，必須避開子宮角的血管，防止出血。移植進(jìn)去以后，將子宮輕輕塞進(jìn)腹腔，并縫合創(chuàng)口、消毒，受體羊下手術(shù)臺(tái)。

2 結(jié)果

2.1 供體羊超排效果

結(jié)果見表1。

表1 第一批供體羊超數(shù)排卵及胚胎采集情況

2.2 受體羊同期發(fā)情情況

同期發(fā)情共處理300只絨山羊，同期發(fā)情率達(dá)95%。

2.3 移植效果

由表2可知，第1組共移植85只受體，其中移植1枚胚胎受體80只，妊娠52只，妊娠率65.00%，共產(chǎn)羔51只，產(chǎn)羔率98.08%，繁殖率67.06%；移植2枚胚胎受體5只，妊娠4只，妊娠率80.00%，共產(chǎn)羔7只，產(chǎn)羔率175%，繁殖率140%。

第2組共移植124只受體，其中移植1枚胚胎受體103只，妊娠60只，妊娠率58.25%，共產(chǎn)羔56只，產(chǎn)羔率93.33%，繁殖率54.37%；移植2枚胚胎受體21只，妊娠16只，妊娠率76.19%，共產(chǎn)羔24只，其中死亡1只，產(chǎn)羔率150%，繁殖率114%。

第3組共移植64只受體，其中移植1枚胚胎受體55只，妊娠42只，妊娠率76.36%，共產(chǎn)羔42只，其中死亡1只，產(chǎn)羔率100%，繁殖率62.63%；移植2枚胚胎受體9只，妊娠9只，妊娠率100%，共產(chǎn)羔17只，其中死亡1只，產(chǎn)羔率189%，繁殖率188.89%。

3組共移植273只，其中移植1枚胚胎受體238只，妊娠154只，妊娠率64.71%，共產(chǎn)羔149只，其中死亡2只，產(chǎn)羔率96.75%，繁殖率62.61%；移植2枚胚胎受體35只，妊娠29只，妊娠率82.86%，共產(chǎn)羔48只，其中死亡1只，產(chǎn)羔率165.52%，繁殖率137.14%。

308枚可用胚胎移植于273只受體羊（其中有29只羊移植雙胚），術(shù)后3個(gè)情期內(nèi)共有90只受體羊返情，返情率32.97%；以不返情為標(biāo)準(zhǔn)確認(rèn)為妊娠的受體183只，最后共產(chǎn)羔197只，產(chǎn)羔率71.06%。

表2 受體羊胚胎移植結(jié)果及產(chǎn)羔情況

3 討論與分析

3.1 討論

本次試驗(yàn)共處理供體37只，收集胚胎345枚，可用胚胎308枚，平均可用胚胎8.32枚/只，胚胎合格率達(dá)89.28%。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，目前國內(nèi)絨山羊胚胎移植規(guī)模大部分都在10～20只；平均可用胚胎數(shù)大部分在8～10枚之間，個(gè)別超過10枚；胚胎合格率大部分在60%～80%之間，高達(dá)94.12%［1-3］。本試驗(yàn)單次試驗(yàn)規(guī)模較大，平均可用胚胎數(shù)量在全國平均范圍之內(nèi)，胚胎合格率超出全國平均范圍，可以說效果較好。

以不返情為標(biāo)準(zhǔn)確認(rèn)為妊娠的受體為183只，最后產(chǎn)羔共 197只，受胎率（妊娠率）67.03%，產(chǎn)羔率107.65%，繁殖率達(dá)71.06%，在絨山羊胚胎移植中產(chǎn)羔率較高。

3.2 分析

（1）本次試驗(yàn)超排效果不穩(wěn)定，超排最多排卵達(dá)23枚，最少2枚，差距較大，而且部分母羊超排效果很理想，但是手術(shù)沖胚時(shí)發(fā)現(xiàn)黃體退化，沖不出胚胎。這除與個(gè)體差距及激素比例的調(diào)整有關(guān)外，還與母羊超排前和配種后的飼養(yǎng)管理有密切聯(lián)系。以后要加強(qiáng)供體公母羊的飼養(yǎng)管理，根據(jù)母羊個(gè)體情況，調(diào)整激素劑量。

（2）本試驗(yàn)受體全部采用內(nèi)窺鏡手術(shù)法移植，這對(duì)受體羊的創(chuàng)傷小，傷口恢復(fù)快，但是在受體羊術(shù)后飼養(yǎng)管理方面有些疏忽，導(dǎo)致部分受體羊流產(chǎn)，還有部分受體羊產(chǎn)下死羔，使產(chǎn)羔率和繁殖率下降。

（3）絨山羊胚胎移植全過程是個(gè)連續(xù)的、環(huán)環(huán)相扣的過程，只要一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題就會(huì)影響整個(gè)過程，所以不僅要做好每一個(gè)階段的工作，而且還要做好各個(gè)環(huán)節(jié)間的相互連接。

（4）從3組受體羊產(chǎn)羔結(jié)果來看，移植2枚胚胎的效果要好于移植1枚胚胎的效果，產(chǎn)羔率和繁殖率都有明顯差距。說明在胚胎移植中1個(gè)受體移植2枚胚胎后，充分加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，不但可以減少受體羊數(shù)量，節(jié)省費(fèi)用，還可以保證產(chǎn)羔效果。

［1］ 馬占峰，劉曉春.遼寧絨山羊胚胎移植試驗(yàn)報(bào)告［J］.遼寧畜牧獸醫(yī)，2002（4）:8-9.

［2］ 王貴江，閆振富.絨山羊胚胎移植效果觀察［C］//全國養(yǎng)羊生產(chǎn)與學(xué)術(shù)研討會(huì)議論文集.蘭州：中國草食動(dòng)物編輯部，2010：279-280.

［3］ 高文超.山羊同期發(fā)情與超數(shù)排卵及其影響因素的研究［D］.陜西楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2013：32-35.

S827.3

A

2095-3887（2016）03-0079-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2016.03.021

2016-02-26

內(nèi)蒙古現(xiàn)代農(nóng)牧業(yè)科技服務(wù)體系絨毛用羊示范推廣團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目；鄂爾多斯市絨山羊選育提高項(xiàng)目

陶薩茹拉（1983-），女，中級(jí)畜牧師，碩士研究生。