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    乾華肉用美利奴羊血紅蛋白多態(tài)性的研究

    2016-11-24 06:03:34阮洪玲項露頡孫麗敏姜懷志
    中國草食動物科學(xué) 2016年3期
    關(guān)鍵詞:利奴羊細(xì)毛羊肉用

    阮洪玲,項露頡,白 曼,孫麗敏,馬 龍,姜懷志

    (1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,長春130118;2.吉林乾安志華種羊繁育有限公司,乾安131404)

    乾華肉用美利奴羊血紅蛋白多態(tài)性的研究

    阮洪玲1,項露頡1,白 曼1,孫麗敏1,馬 龍2,姜懷志1

    (1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,長春130118;2.吉林乾安志華種羊繁育有限公司,乾安131404)

    利用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)(PAGE)分析乾華肉用美利奴羊的血紅蛋白(Hb)多態(tài)性。結(jié)果表明:乾華肉用美利奴羊血紅蛋白多態(tài)性存在HbA和HbB兩種變異體,構(gòu)成了HbAA、HbAB和HbBB三種基因型。其中HbAA、HbAB和HbBB基因型頻率分別為0.17、0.20和0.63,基因雜合度為0.39;HbA基因頻率為0.27,HbB基因頻率為0.73,以HbB為優(yōu)勢基因。該研究旨在對乾華肉用美利奴羊的保種選育以及生產(chǎn)提供理論指導(dǎo)。

    乾華肉用美利奴羊(暫定名);血紅蛋白;多態(tài)性

    血紅蛋白(hemoglobin,簡稱Hb)是脊椎動物的一種含鐵的復(fù)合變構(gòu)蛋白,也是動物體內(nèi)含量最多的蛋白質(zhì)之一。血紅蛋白不僅能運載氧氣和二氧化碳,還具有氧化酶活性和抗菌等功能。1955年,Harris等首先在阿爾及利亞通過濾紙電泳法鑒定出了綿羊存在兩種Hb遺傳變異體,即HbA和HbB,并認(rèn)為這種現(xiàn)象是由一對等位基因HbA和HbB所控制,組成了HbAA、HbAB和HbBB三種基因型,且具有多態(tài)性[1]。他們的新發(fā)現(xiàn)開拓了Hb領(lǐng)域的研究工作。血紅蛋白不僅是機(jī)體重要的生化遺傳標(biāo)記,也是目前研究最多的動物機(jī)體血液蛋白質(zhì)之一[2]。張才駿等[3-5]也曾對青海半細(xì)毛羊、青海細(xì)毛羊、茨蓋羊、藏羊等青海高原綿羊的Hb多態(tài)性做過大量的研究。大多數(shù)研究結(jié)果都表明,綿羊血紅蛋白多態(tài)性的類型與生產(chǎn)性能、繁殖能力、海拔高度以及機(jī)體抗病力之間具有一定的聯(lián)系。

    乾華肉用美利奴羊(暫定名),是吉林省自2003年起以純種南非肉用美利奴羊為父本,級進(jìn)雜交東北細(xì)毛羊至F3后,選擇理想型個體進(jìn)行橫交固定,所培育出的具有肉毛兼用特征的細(xì)毛羊新品種,目前已進(jìn)入選育提高階段。乾華肉用美利奴羊具有體質(zhì)結(jié)實、結(jié)構(gòu)勻稱、肌肉豐滿、適應(yīng)性強(qiáng)、耐粗飼等優(yōu)良特性。因此,本研究以乾華肉用美利奴羊為研究對象,檢測其血液血紅蛋白的多態(tài)性,旨在更深入地了解乾華肉用美利奴羊生化遺傳特性,更為該品種選育提供理論參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    在乾安志華種羊繁育有限公司的育種核心群中,選擇體質(zhì)結(jié)實,健康的羔羊、育成羊、成年羊各10只,均公母各半,共計30只。

    1.2 血液樣品的采集和處理

    早晨空腹,頸靜脈采血5 mL,注入添加抗凝劑的真空采血管。帶回實驗室,取1 mL抗凝血,加入1~2倍體積的生理鹽水,混合均勻,3 500 r/min離心3 min。洗滌之后,小心吸取上清液,只留下濃縮的壓積紅細(xì)胞。按1∶30比例加入雙蒸水,充分混勻,在4℃下靜置4 h,進(jìn)行低滲破溶處理。經(jīng)過低滲處理后,4℃下3 500 r/min離心10 min,除去一些還未破碎的紅細(xì)胞及其他雜質(zhì)。最后,4℃下12 000 r/min離心15 min,去除沉淀。取上部清亮的紅色透明液為血紅蛋白溶液,供Hb電泳分析用。

    1.3 Hb電泳和分型

    1.3.1 電泳 配制10%分離膠溶液,緩沖液為Tris-HCl(pH=8.8);配制5%濃縮膠溶液,緩沖液為Tris-HCl(pH值6.8);吸取血紅蛋白樣品30 μL與10 μL溴酚藍(lán)混合后點樣10 μL,電泳開始時電壓為100 V,待樣品進(jìn)入分離膠界線后調(diào)至200 V,穩(wěn)壓電泳1 h。取下凝膠放入考馬斯亮藍(lán)染色液中(至少5倍膠體積),放入水平搖床,染色過夜后再進(jìn)行醋酸脫色,每30分鐘更換1次脫色液,最后將凝膠置于凝膠成像儀中進(jìn)行拍照。

    1.3.2 分型 判型參考佐佐木清綱[6]記載的標(biāo)準(zhǔn)以及張才駿等[7]的判定標(biāo)準(zhǔn)判型。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    將所得試驗數(shù)據(jù)整理后,使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計與分析。按照實測數(shù)值計算Hb基因型頻率,按照其受1對共顯性等位基因HbA和HbB控制的假設(shè)計算基因頻率。

    基因型頻率=該基因型個體數(shù)/被測個體總數(shù)

    基因頻率=2(ii)+(ij1)+(ij2)+A(ijn)/2N

    式中:i表示純合等位基因型個體,jl…jn表示共顯性的第n個基因型個體,N為樣本總數(shù)。

    按照以下公式計算基因雜合度:H=1-∑P2i。式中,Pi為某一位點第i個等位基因頻率。

    Hardy-Weinberg平衡檢測采用χ2分析進(jìn)行適合性檢驗。

    2 結(jié)果與分析

    從圖1、圖2和表1可見,乾華肉用美利奴羊的血紅蛋白溶液經(jīng)PAGE,分離出HbA和HbB兩種變異體,以HbB為優(yōu)勢基因。構(gòu)成了HbAA、HbAB和HbBB三種基因型,基因型頻率分別為0.17、0.20和0.63,基因雜合度為0.39。HbA基因頻率為0.27,HbB基因頻率為0.73。對乾華肉用美利奴羊各組綿羊Hb的基因型頻率經(jīng)χ2檢驗,無顯著性差異(P>0.05)。表明該場乾華肉用美利奴羊Hb的基因型頻率和基因頻率已達(dá)到哈代—溫伯格遺傳平衡狀態(tài)。

    圖1 乾華肉用美利奴羊Hb電泳圖譜

    圖2 乾華肉用美利奴羊Hb電泳模式圖譜

    表1 乾華肉用美利奴羊Hb基因型頻率和基因頻率

    3 討論與小結(jié)

    血紅蛋白在動物體內(nèi)擔(dān)負(fù)著運送氧氣和二氧化碳的重要生理學(xué)功能,研究動物血紅蛋白的結(jié)構(gòu)與功能對揭示動物進(jìn)化具有重要意義。本試驗用聚丙烯酰胺凝膠電泳法研究乾華肉用美利奴羊Hb型的結(jié)果與Harris等[1]的結(jié)果一致,檢出乾華肉用美利奴羊血紅蛋白多態(tài)性存在HbA和HbB兩種變異體,構(gòu)成了HbAA、HbAB和HbBB三種基因型,且HbA基因頻率為0.27,HbB基因頻率為0.73。

    張才俊等[3]在藏羊的研究結(jié)果中表明,海拔高度對綿羊Hb基因頻率影響較大。HbA具有較強(qiáng)的與氧氣結(jié)合的能力。生活在海拔2 000 m地區(qū)的藏羊的HbA基因頻率為0.29,到了海拔4 000 m以上則上升至0.93。這種變化是由于綿羊長期處于低氧環(huán)境生存的結(jié)果。魏春紅等[8]對小尾寒羊、同羊和陜北灘羊Hb基因頻率檢測的結(jié)果也證實了這種推測。本研究結(jié)果表明,乾華肉用美利奴羊HbA基因頻率顯著低于海拔較高地區(qū)的HbA基因頻率。這是由于吉林省乾安地區(qū)屬于平原地區(qū),因此試驗中HbB基因在乾華肉用美利奴羊群體中為優(yōu)勢基因,證實了以上觀點。該群體基因雜合度小,說明乾華肉用美利奴羊Hb位點遺傳變異較小,遺傳比較穩(wěn)定。

    Barowicz等[9]研究發(fā)現(xiàn),HbBB基因型母羊的產(chǎn)羔率最高,HbAB型次之,HbAA型最低。楊廣禮等[10]研究認(rèn)為,高繁殖力的小尾寒羊的HbBB基因型頻率、HbB基因頻率遠(yuǎn)高于產(chǎn)單羔的甘肅藏羊,可以作為多羔性的遺傳標(biāo)記。王欣榮等[11]研究報道,小尾寒羊Hb位點,HbBB型母羊第2胎的產(chǎn)羔數(shù)極顯著大于HbAB基因型。本研究結(jié)果表明,HbB基因在乾華肉用美利奴羊群體中為優(yōu)勢基因。由于HbB基因?qū)Ψ敝沉哂辛己玫挠绊懀?2]以及有髓毛含量較低[13]等優(yōu)點,可以將HbBB基因型作為遺傳標(biāo)記進(jìn)行選擇,以提高選擇效率。由此可以推測,乾華肉用美利奴羊群體中的HbBB基因型也與產(chǎn)羔數(shù)相關(guān)。

    [1] Harris H,Warren F L.Occurrence of electrophoretically distinct hemoglobin in ruminants[J].Biochem,1955(60):29.

    [2] 王永科,盧福山,安貝,等.青海半細(xì)毛羊血紅蛋白多態(tài)性及其與血清生化指標(biāo)的相關(guān)性分析[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,42(14):4354-4355.

    [3] 張才駿,張武學(xué),張更利,等.引入青海的新疆細(xì)毛羊和茨蓋羊血紅蛋白多態(tài)性的研究[J].青海畜牧獸醫(yī)雜志,1988(6):1-4.

    [4] 張才駿.青海半細(xì)毛羊血液生化遺傳多態(tài)性的研究[J].青海畜牧獸醫(yī)雜志,2004(1):3-5.

    [5] 張才駿,張武學(xué),張更利,等.青海省綿羊血紅蛋白多態(tài)性的研究[J].青海畜牧獸醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1993(2):8-14.

    [6] 佐佐木清綱.家畜的血液型及其應(yīng)用[M].李世安,譯.上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1982.

    [7] 張才俊,張武學(xué),李軍祥,等.青海細(xì)毛羊血紅蛋白和血細(xì)胞蛋白質(zhì)多態(tài)性的研究[J].青海畜牧獸醫(yī)雜志,1996(1):8-10.

    [8] 魏春紅,邱懷.同羊、陜北灘羊和小尾寒羊血紅蛋白的多態(tài)性[J].畜牧獸醫(yī)雜志,1992(1):1-2.

    [9] Barowicz T.Relationship between productivity and hemoglobin types in Polish Long-wool sheep[J].Animal Breeding Abstracts,1985,53(3):213.

    [10]楊廣禮,羅玉柱.小尾寒羊血液蛋白多態(tài)性與多羔性研究[J].甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2004(4):381-385.

    [11]王欣榮,張利平.小尾寒羊血液蛋白(酶)多態(tài)性與產(chǎn)羔數(shù)的比較研究[J].中國草食動物,2005,25(2):31-33.

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    S826.2

    A

    2095-3887(2016)03-0082-03

    10.3969/j.issn.2095-3887.2016.03.022

    2016-03-22

    吉林省教育廳”十二五”科學(xué)技術(shù)項目(吉教科合字[2015]第186號);吉林省科技發(fā)展計劃項目(20120802);吉林省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項基金(201541)

    阮洪玲(1991-),女,碩士研究生。

    姜懷志(1968-),男,教授,博士,博士生導(dǎo)師,主要從事絨山羊種質(zhì)特性與選育的研究。

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