輸血性瘧病例的實(shí)驗(yàn)室檢測及調(diào)查研究

馬薇

【關(guān)鍵詞】 瘧疾;實(shí)驗(yàn)室檢測;調(diào)查研究

從2000年開始在，在全球范圍內(nèi)各個(gè)醫(yī)院的配合下找到了控制瘧疾發(fā)病的方法，挽救了無數(shù)瘧疾疾病患者的生命。瘧疾傳播源一般包含蚊蟲叮咬和輸液兩種形式。輸血性瘧疾主要是指在人體內(nèi)部輸送了含有瘧原蟲的全血或者成分血，在此之后感染了瘧原蟲。在改革開放深入進(jìn)行和旅游業(yè)的持續(xù)發(fā)展下，輸血性瘧疾成為世界范圍內(nèi)比較嚴(yán)峻的用血安全問題。伴隨到非洲、東南亞地區(qū)工作人數(shù)的增多，輸血性瘧疾疾病的發(fā)病人數(shù)不斷增多。國家衛(wèi)生組織由此開始進(jìn)一步加強(qiáng)對 輸血性瘧病例的研究和分析。文章選擇我市一例輸血性瘧疾疾病患者作為基本研究對象，通過對該病例資料和病理學(xué)知識的調(diào)查，最終確定這個(gè)病例的傳染源。

1資料和方法

1.1病例基本資料

全面收集整理這例瘧疾疾病患者的發(fā)病、診斷和治療資料信息。

1.2流行病學(xué)調(diào)查分析

對這例患者開展必要的流行病學(xué)調(diào)查研究，調(diào)查研究涉及到的內(nèi)容包含患者的居住環(huán)境、外出歷史、血液輸送歷史等。同時(shí)還需要對瘧疾可能性的傳播方式和傳染源進(jìn)行尋根究底的調(diào)查研究。

1.3實(shí)驗(yàn)試劑和基本儀器

在開展實(shí)驗(yàn)操作中所需要應(yīng)用的儀器設(shè)備如下所示：來自QIAGEM公司的患者血液DNA提取儀器;來自美國一公司的PCR反應(yīng)混合物;來自上海生工生物公司的TBE緩沖液、瓊脂糖;來自美國Biotium公司的核酸燃料。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

第一，血涂片的鏡檢。在實(shí)驗(yàn)操作的時(shí)候全面收集患者的骨髓、外周抗凝血、疑似瘧疾傳染源的供血者外周凝血涂制厚薄血片。第二，RDT檢測分析。按照有關(guān)說明書和血壓提供者的血液情況來開展相關(guān)檢測。在檢測的過程中稱取5μl 全血，將提取的血液垂直加入到檢測卡“加樣孔A”的內(nèi)部，之后在“樣品孔B”的上方垂直滴注4滴裂解液，靜靜等待十五分鐘之后觀察患者的檢測結(jié)果。第三，分子生物學(xué)檢測。應(yīng)用專業(yè)的全血DNA抽血試劑盒來提取患者的血樣，合成瘧原蟲特異屬性物質(zhì)和特異性引物，同時(shí)開始瘧原蟲巢式的PCR檢測。

2結(jié)果

2.1流行病理學(xué)檢查

患者年齡為62歲，福建人2018年6月3日的時(shí)候在地區(qū)某醫(yī)院開展了髖關(guān)節(jié)置換手術(shù)，手術(shù)中輸送了800ml 的全血。在6月26日的時(shí)候患者出現(xiàn)了發(fā)熱的癥狀，之后到醫(yī)院就診，經(jīng)過血涂片鏡檢查患者體內(nèi)含有瘧原蟲。在經(jīng)過細(xì)致檢查分析確診為三日瘧原蟲感染，伴隨膿毒血癥，且深入排查之后確定是在大量輸血之后感染的疾病。患者所輸?shù)?00ml血液來自于三名獻(xiàn)血者，兩名居民，一名留學(xué)生。這三名獻(xiàn)血者沒有家族性的瘧疾歷史。

2.2血涂片鏡檢查

在患者血涂片中鏡檢查發(fā)現(xiàn)典型的三日瘧原蟲菊花狀裂殖體，厚血膜中含有的瘧原蟲密度基本確定為4085/μl。

2.3RDT檢測

對患者的血樣開展BinaxNOW檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果顯示患者患有的是非惡性瘧原蟲。

2.4巢式PCR檢測

經(jīng)過這項(xiàng)檢測發(fā)現(xiàn)患者血樣擴(kuò)增出和三日虐原蟲的陽性指標(biāo)對照一致。

2.5巢式-多重PCR檢測和擴(kuò)增對比

應(yīng)用這種方式檢測患者體內(nèi)血樣，只有NEST-MULTI擴(kuò)增體系中的M某擴(kuò)增出和瘧原蟲對照一致的弱陽性基本條帶，在這個(gè)體系中三日瘧原蟲擴(kuò)增條帶預(yù)期數(shù)值達(dá)到了450bp左右。

將患者的擴(kuò)增出目的基因產(chǎn)物條帶T1和供血者M(jìn)擴(kuò)增陽性產(chǎn)物條帶T4分別進(jìn)行TA復(fù)制，將復(fù)制結(jié)果送往某生物股份公司進(jìn)行測序處理，經(jīng)過測序處理之后發(fā)現(xiàn)T1和T4的序列順序基本一致，同源性達(dá)到了100%的符合。之后對基因序列進(jìn)行在線比對分析，最終確定這例瘧疾疾病的根源在于留學(xué)生供血者的輸血性三日瘧。

3討論

血液輸送是瘧疾傳播發(fā)展的一個(gè)重要來源，由輸血導(dǎo)致的瘧疾疾病會表現(xiàn)為周期性的發(fā)冷、發(fā)熱、出汗等癥狀，嚴(yán)重的情況下還會引發(fā)貧血的問題。輸血性瘧疾的傳染源是沒有癥狀、具備免疫力的瘧原蟲攜帶者。

傳統(tǒng)的血涂片鏡方法是檢驗(yàn)瘧疾的常用方式，但是這種檢驗(yàn)操作的完成對實(shí)踐者個(gè)人能力有著較高的要求，在無形中增加了瘧疾診斷難度。在現(xiàn)代醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展下有關(guān)醫(yī)學(xué)人員研究出了多種瘧原蟲分子生物學(xué)檢測方式，這種方式在以往PCR技術(shù)基礎(chǔ)上打造了巢式PCR、多層重PCR，使得檢測結(jié)果的敏感性和精準(zhǔn)度程度提升。

從本文實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果來看，在應(yīng)用巢式PCR檢測方法之后所有樣本檢測呈現(xiàn)為陰性，沒有明顯差異，無法準(zhǔn)確判斷患者輸血感染瘧疾的根源。而應(yīng)用改進(jìn)之后的、多層重PCR技術(shù)之后檢測出留學(xué)生血液含有弱陽性條帶。由此可見，多層重PCR技術(shù)對較低密度瘧原蟲和帶蟲者擁有良好的檢測效果，值得在臨床上廣泛推廣。

【參考文獻(xiàn)】

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