檳榔堿對大鼠離體胸主動脈環(huán)張力的影響研究

陳一峰　曾婷　向振武　李好　胡磊　鮑美華

【摘要】目的?通過大鼠離體主動脈血管環(huán)來評價檳榔堿對大鼠血管環(huán)張力的影響，為檳榔產(chǎn)品的開發(fā)及其使用提供判斷依據(jù)。?方法?取大鼠胸主動脈血管環(huán)（內(nèi)皮完整）分為4組，對照組，低劑量組（0.25mg/mL），中劑量組（0.5mg/mL），高劑量組（1mg/mL），對照組加入等體積的生理鹽水，分別觀察4組在靜息狀態(tài)，KCl以及NE刺激下預(yù)收縮血管環(huán)后血管環(huán)張力的變化。?結(jié)果?靜息狀態(tài)下，血管環(huán)張力無明顯變化;加入KCl和NE預(yù)收縮血管環(huán)后，低，中，高劑量組血管環(huán)較對照組明顯舒張（P<0.05），且檳榔堿能夠濃度依賴性地降低血管環(huán)張力。?結(jié)論?檳榔堿可濃度依賴性抑制KCl和NE引起地血管收縮。

【關(guān)鍵詞】檳榔堿?血管環(huán)張力?血管舒張

一、引言

檳榔是檳榔樹的果實，原產(chǎn)于印度、中國臺灣地區(qū)和南太平洋的眾多島國。全世界擁有數(shù)億人以各種形式消費(fèi)檳榔，亞太地區(qū)尤為普通。近年來，對檳榔的研究已不僅局限于對于口腔疾病及相關(guān)腫瘤的了解，而是進(jìn)一步轉(zhuǎn)向了解其對于人體內(nèi)其他各主要系統(tǒng)及器官的危害，包括神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)。檳榔常作為中藥成分，被用于利尿消積、防治寄生蟲、治療消化不良等方面。且咀嚼檳榔具有抗抑郁、抗疲勞、抗氧化、抗菌以及抗高血壓等藥理作用。而檳榔堿是檳榔中主要的生物堿類活性成分，也是主要的毒性成分。大量的臨床研究表明：檳榔堿具有抗血栓形成，抗動脈粥樣硬化，口腔和神經(jīng)系統(tǒng)等功效，但檳榔堿對血管環(huán)張力影響方面的報道則較少。本實驗通過檢測血管環(huán)張力改變，評價檳榔堿對高鉀和去甲腎上腺素預(yù)收縮后大鼠離體胸主動脈的作用，探討其可能的作用機(jī)制，為檳榔堿和檳榔等相關(guān)產(chǎn)品方面提供新的線索。

二、材料

（一）動物及分組

本實驗采用8-10周齡的SPF級wistar大鼠，平均體重質(zhì)量為（200±20）g。每次實驗取1只健康wistar大鼠的胸主動脈制備成血管環(huán)，分為對照組，低劑量組，中劑量組和高劑量組，每組4個血管環(huán)。實驗動物由購自長沙市天勤生物技術(shù)有限公司，實驗動物使用許可證號：SCXK（湘）2014-0011。

（二）試劑及配制

檳榔堿購于成都曼思特生物科技有限公司，用生理鹽水配置成50mg/ml的溶液，現(xiàn)配使用;重酒石酸去甲腎上腺素-水合物（NE），氯化鉀（KCl），乙酰膽堿（Ach）均由長沙醫(yī)學(xué)院機(jī)能實驗室提供;Krebs緩沖液由超純水溶解配制，其成分為：118mM?NaCl;4.7?mM?KCl;1.2mM?MgCl2;10mM?HEPES;11.1mM?葡萄糖和2mM?CaCl2。Krebs緩沖液配制完成后用3mol/L?NaOH調(diào)pH值至7.4，后續(xù)實驗所需試劑均由正常Krebs緩沖液稀釋至所需濃度。實驗過程中所述濃度均為浴槽內(nèi)試劑的終濃度。

（三）儀器

5g張力換能器、RM6240生物機(jī)能實驗系統(tǒng)，HV1403離體組織器官恒溫灌流系統(tǒng)和超級恒溫水浴均由長沙醫(yī)學(xué)院機(jī)能實驗室提供。

三、方法

（一）大鼠胸主動脈血管環(huán)制備及內(nèi)皮完整性檢測

將大鼠用2%戊巴比妥鈉麻醉后，腹主動脈采血處死，迅速開胸分離胸主動脈，置于4℃?Krebs緩沖液中，用大頭針固定血管環(huán)兩端，剝離干凈血管周圍的脂肪及結(jié)締組織，把動脈剪成長度約3mm的血管環(huán)。血管環(huán)一端用不銹鋼三角鉤垂直懸掛于浴槽中，另一端連接張力換能器，使用RM6240生物機(jī)能實驗系統(tǒng)記錄血管環(huán)的張力。每個浴槽內(nèi)懸掛一條血管環(huán)并向浴槽內(nèi)持續(xù)通入95%O2和5%CO2，緩慢調(diào)節(jié)血管環(huán)張力至2g，37℃下平衡1h，期間每20min換液1次。在浴槽中加入60mMKCl刺激，張力收縮幅度小于1g的血管環(huán)被認(rèn)為活性差，不用于實驗。用1μMNE預(yù)收縮血管環(huán)，待收縮達(dá)到平臺期后加入10μM乙酰膽堿，若舒張幅度大于70%認(rèn)為內(nèi)皮完整。舒張率計算公式：舒張率=[（NE誘發(fā)最大收縮值）-加入藥物后的血管張力值/NE誘發(fā)最大收縮值]×100%。

（二）靜息狀態(tài)下4組血管環(huán)張力的觀察

待血管環(huán)張力穩(wěn)定后，低劑量組，中劑量組和高劑量組加入配制好的檳榔堿溶液，使浴槽內(nèi)藥物終濃度達(dá)到0.25mg/mL，0.5mg/

mL和1mg/mL;對照組加入等體積生理鹽水。觀察4組血管環(huán)張力的變化。

（三）KCl預(yù)收縮后4組血管環(huán)張力的觀察

待血管環(huán)張力穩(wěn)定后，用60?mM?KCl預(yù)收縮血管環(huán)，使其收縮達(dá)到平臺期后，低劑量組，中劑量組和高劑量組加入配制好的檳榔堿溶液，使浴槽內(nèi)藥物終濃度分別達(dá)到0.25mg/mL，0.5mg/mL和1mg/mL;對照組加入等體積生理鹽水。觀察4組血管環(huán)張力的變化。

（四）NE預(yù)收縮后4組血管環(huán)張力的觀察

待血管環(huán)張力穩(wěn)定后，用1μM?NE預(yù)收縮血管環(huán)，使其收縮達(dá)到平臺期后，低劑量組，中劑量組和高劑量組加入配制好的檳榔堿溶液，使浴槽內(nèi)藥物濃度達(dá)到0.25mg/mL，0.5mg/mL和1mg/mL;對照組加入等體積生理鹽水。觀察4組血管環(huán)張力的變化。

每次記錄每組4個血管環(huán)的張力值，最后結(jié)果取其平均值。

（五）統(tǒng)計學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS?22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料屬于正態(tài)分布的以（±s）表示，采用單因素方差分析，非正態(tài)分布的采用和檢驗秩和檢驗。

四、結(jié)果

（1）靜息狀態(tài)下4組血管環(huán)張力無明顯變化。

（2）KCl預(yù)收縮血管后4組血管環(huán)張力的變化見圖1。

圖1顯示檳榔堿對血管環(huán)的最大舒張率達(dá)17.5%

（3）NE預(yù)收縮血管后4組血管環(huán)張力的變化??見圖2。

圖2顯示檳榔堿對血管環(huán)的最大舒張率達(dá)46.3%

五、討論

為探討檳榔堿對血管環(huán)張力影響，本實驗采用大鼠離體胸主動脈血管環(huán)，給予不同組別血管收縮劑誘導(dǎo)血管收縮后，測量血管環(huán)張力，觀察檳榔堿對離體大鼠胸主動脈血管環(huán)張力的影響。

在靜息狀態(tài)下，檳榔堿對血管環(huán)的張力并無明顯改變，可見，檳榔堿對靜息狀態(tài)下的血管環(huán)張力無影響;在KCl刺激血管收縮后，低劑量組，中劑量組和高劑量組均可促進(jìn)血管舒張，可見，舒張因KCl水平升高導(dǎo)致的收縮血管可能是檳榔堿發(fā)揮降壓作用的重要機(jī)制[4-5];在NE刺激血管收縮后，低劑量組，中劑量組和高劑量組均可促進(jìn)血管舒張，可見，舒張因NE水平升高導(dǎo)致的收縮血管可能是檳榔堿發(fā)揮降壓作用的另一重要機(jī)制。

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基金項目：項目編號，長沙醫(yī)學(xué)院大學(xué)生研究性學(xué)習(xí)和創(chuàng)新性實驗計劃項目，長醫(yī)教[2018]77號-233。

作者簡介，陳一峰（1999-），男，湖南株洲人，長沙醫(yī)學(xué)院在校生;通訊作者：鮑美華，女，副教授，研究方向，藥學(xué)與生物信息。