添喂絞股藍對廣西三黃雞胸腺增齡性的影響

張潤祥　吳亞輝　黃詩琦　王勇杰　白熙　唐小川　王曉麗

摘要：從組織學(xué)角度探討添喂絞股藍對廣西三黃雞胸腺增齡性的作用，在飼料中添加0.5%絞股藍粉，考察1、14、28、56、90、120、150日齡胸腺重、胸腺指數(shù)、皮髓面積比、胸腺小體數(shù)量及面積。結(jié)果表明，隨日齡增加，胸腺重升高，胸腺指數(shù)先升后降，添喂絞股藍在一定程度上提高胸腺重及胸腺指數(shù);隨日齡增加，胸腺皮髓比降低，120日齡時添喂組皮髓比顯著大于不添喂組（P<0.05）;不添喂組和添喂組的胸腺小體數(shù)量分別在56日齡和90日齡前增多，之后呈波浪式下降，在28、90、120日齡時，添喂組胸腺小體數(shù)量顯著多于不添喂組（P<0.05）;不添喂組和添喂組的胸腺小體面積在120日齡前增大，之后減小，不添喂組和添喂組各日齡差異不顯著。表明在飼料中添加0.5%絞股藍粉能夠延長廣西三黃雞胸腺成熟時間、推遲胸腺退化，提高胸腺功能。

關(guān)鍵詞：絞股藍;廣西三黃雞;胸腺;增齡性

中圖分類號：S831;R285.5? ? ? ? ?文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2020）03-0111-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.03.023

Effect of feeding Gynostemma Pentaphyllum on the thymus aging of

Guangxi Sanhuang chickens

ZHANG Run-xiang，WU Ya-hui，HUANG Shi-qi，WANG Yong-jie，BAI Xi，TANG Xiao-chuan，WANG Xiao-li

（College of Animal Science and Technology，Guangxi University，Nanning 530005，China）

Abstract： From the histological point of view， the effect of adding Gynostemma pentaphyllum on the thymus aging of Guangxi Sanhuang chickens was studied. 0.5% G. pentaphyllum powder was added to the feed， and the thymus weight， thymus index， cortex-medium area ratio， number and area of thymus bodies were examined at 1， 14， 28， 56， 90， 120， and 150 d. The results showed that with increasing age， the thymus weight increased， and the thymus index rose first and then decreased. The addition of G. pentaphyllum increased the thymus weight and thymus index to a certain extent. With the increase of the age， the thymic cortex-medullar ratio decreased， and at 120 d， the cortex-medullar ratio of the fed group was significantly greater than that of the non-added group（P<0.05）. The number of thymus bodies in the non-feeding group and the feeding group increased before 56 and 90 d， respectively， and then decreased in a wave pattern. At 28， 90， and 120 d， the number of thymus bodies in the fed group was significantly more than that in the non-fed group（P<0.05）. The thymus body area of the non-feeding group and the feeding group increased before 120 d， and then decreased. The day-to-day differences of the non-feeding group and the feeding group were not significant. Adding G. pentaphyllum powder in the feed can prolong the thymus maturation time， delay the thymus degradation， and improve the thymus function.

Key words： Gynostemma pentaphyllum; Guangxi Sanhuang chicken; thymus; ageing

絞股藍具有免疫增強等多種藥理作用[1，2]，在中國南方資源豐富、價格低廉。國內(nèi)外有較多關(guān)于絞股藍和對機體免疫功能影響的研究，多集中于絞股藍成分分析或者絞股藍提取物功能上[3，4]，鮮見添喂絞股藍對胸腺組織學(xué)增齡性影響的研究報道。胸腺作為與機體免疫功能密切相關(guān)的中樞免疫器官，研究絞股藍對其作用是一個重要的探索方向。本研究以廣西三黃雞為對象，在飼料中添加0.5%絞股藍粉，從組織學(xué)方面研究對胸腺增齡性的影響，以期為絞股藍在增強機體免疫力方面的進一步研究提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 胸腺獲得

取健康1日齡廣西三黃雞60只，隨機分為對照組和試驗組，每組30只，對照組飼喂全價飼料，試驗組飼喂全價飼料加飼料質(zhì)量0.5%的絞股藍粉。試驗動物房內(nèi)籠養(yǎng)，飼養(yǎng)條件一致，正常免疫，自由采食、飲水。分別于1、14、28、56、90、120、150日齡稱重，取3只頸動脈放血處理致死，取出胸腺，稱重，放入Bouin氏固定液中，固定24 h，石蠟切片，HE染色。

1.2? 數(shù)據(jù)測定

1.2.1? 胸腺指數(shù)? 測量取樣廣西三黃雞的體重（g）和胸腺重（mg），計算胸腺指數(shù)。胸腺指數(shù)=胸腺重/體重。

1.2.2? 皮髓比? 試驗組和對照組各取3個標本，每個標本取2張切片，在顯微鏡下觀察，取50個10×4視野，拍照。使用JD801形態(tài)學(xué)圖像分析系統(tǒng)軟件（江蘇省捷達軟件工程有限公司）進行分析，記錄皮質(zhì)面積和髓質(zhì)面積，計算皮髓比。

1.2.3? 胸腺小體個數(shù)及面積? 試驗組和對照組各取3個標本，每個標本取2張切片，在顯微鏡下觀察，取50個10×40視野計數(shù)每個視野內(nèi)的胸腺小體數(shù)量;取50個10×40的胸腺小體視野拍照，使用JD801形態(tài)學(xué)圖像分析系統(tǒng)軟件進行分析測量胸腺小體面積。

1.3? 統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件SPSS 21.0進行統(tǒng)計分析，t檢驗。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 添喂絞股藍對廣西三黃雞胸腺重和指數(shù)的影響

從廣西三黃雞試驗組和對照組的胸腺重（表1）和胸腺指數(shù)（表2）情況看，試驗組和對照組胸腺重、胸腺指數(shù)變化趨勢大致相同。隨日齡增加，胸腺重逐漸增加，試驗組胸腺重除56日齡外，其他日齡均高于對照組，但差異不顯著;胸腺指數(shù)隨日齡增加先升高，28～56日齡達到最大值后降低。試驗組胸腺指數(shù)除56、90日齡略低于對照組外，其余日齡均略高于對照組，但兩者間差異均不顯著。

2.2? 添喂絞股藍對廣西三黃雞胸腺皮髓比的影響

顯微鏡下觀察，低日齡時期胸腺小葉多獨立存在，面積小，數(shù)量少，皮質(zhì)與髓質(zhì)界限清晰（圖1A）;隨日齡增加，胸腺小葉逐漸增多，面積增大，髓質(zhì)范圍快速擴大，皮髓比顯著降低，相鄰胸腺小葉的髓質(zhì)部相互連接，120～150日齡皮質(zhì)部變薄，多個胸腺小葉髓質(zhì)連成一片，皮髓界限模糊（圖1B）。分析（表3）表明，隨日齡的增加，試驗組和對照組的皮髓比趨勢一致，都逐漸降低，120日齡時試驗組皮髓比顯著大于對照組（P<0.05），其余日齡差異不顯著。

2.3? 添喂絞股藍對廣西三黃雞胸腺小體的影響

顯微鏡下觀察，廣西三黃雞胸腺有3種類型的胸腺小體，分別為單個的網(wǎng)狀細胞膨脹成的單細胞型胸腺小體（圖2A）、典型的網(wǎng)狀細胞環(huán)抱而成的同心圓狀胸腺小體（圖2B）以及多個網(wǎng)狀細胞聚在一起的團塊狀胸腺小體（圖2C）。團塊狀的胸腺小體大小不一，形態(tài)各異，有些胸腺小體中央封閉有血管，血管外周再圍繞網(wǎng)狀細胞（圖2D）。單細胞型胸腺小體在低日齡胸腺有較多分布，隨著日齡增加，典型的同心圓狀胸腺小體以及不規(guī)則團塊狀胸腺小體迅速增多，尤其在高日齡胸腺中，胸腺小體以團塊狀分布為主。

對胸腺小體數(shù)量統(tǒng)計分析（表4），隨日齡增加，胸腺小體數(shù)量先增多，達到最大值后呈波浪式下降。對照組胸腺小體數(shù)量在56日齡時達到最多，顯著多于試驗組（P<0.05）;試驗組胸腺小體數(shù)量在90日齡時達到最多，顯著多于對照組（P<0.05）。試驗組在90～150日齡胸腺小體數(shù)量雖呈下降趨勢，但均顯著多于對照組。表明添喂絞股藍可以減緩胸腺小體數(shù)量的增加和降低，使其達到最大數(shù)量日齡延后。

分析胸腺小體面積（表5），1～120日齡，隨著日齡增加，試驗組和對照組胸腺小體面積均增大，都在120日齡時達到最大值，后下降。試驗組與對照組胸腺小體面積各日齡差異均不顯著。

3? 小結(jié)與討論

關(guān)于中草藥對免疫器官的影響研究報道較多，中草藥成分對正常免疫狀態(tài)下動物免疫器官的作用不同學(xué)者有不同結(jié)論。以銀杏葉為飼料添加劑能顯著提高雞平均日增重，在一定程度上提高胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)[5]。八味方能顯著提高免疫低下小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，對正常健康小鼠作用不顯著[6]。給健康小鼠灌胃200 mg/kg絞股藍總皂苷能夠顯著提高小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)[7]。本研究添加0.5%絞股藍粉的廣西三黃雞胸腺重和胸腺指數(shù)和不添加多數(shù)日齡的多數(shù)檢測項目差異不顯著，但在120日齡和150日齡添加組的胸腺重和胸腺指數(shù)要高于不添加組，這可能提示添喂絞股藍能夠在一定程度上促進胸腺發(fā)育成熟，并增強高日齡雞的免疫功能。

1～120日齡雞隨日齡增加，胸腺皮質(zhì)部變薄，皮髓比下降，髓質(zhì)部相連且皮髓界限不清晰[8]。鴕鳥胸腺1～30日齡發(fā)育緩慢，30～60日齡迅速發(fā)育，60～90日齡發(fā)育基本穩(wěn)定，之后隨日齡增加，胸腺逐漸萎縮[9]。對不同日齡小鼠胸腺觀察，4周齡皮質(zhì)厚，髓質(zhì)呈斑點狀，20周齡胸腺皮質(zhì)變薄，少數(shù)髓質(zhì)連在一起，到了10月齡，皮質(zhì)部已經(jīng)很薄，多個胸腺小葉的髓質(zhì)連成一片[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著日齡增加，胸腺小葉皮質(zhì)部變薄，髓質(zhì)部范圍變大，由斑點狀逐漸連成一片，皮髓比顯著降低，這與其他胸腺皮髓比增齡性的研究一致。

在雞的基礎(chǔ)日糧中添加1.0 g/kg的半胱胺能夠促進雞胸腺和法氏囊的發(fā)育，使胸腺皮質(zhì)部變厚，淋巴細胞增多，增強雞的免疫功能[11]。研究D-半乳糖構(gòu)建的衰老大鼠模型，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg1能顯著提高衰老大鼠的胸腺指數(shù)和皮髓比，提高胸腺細胞的增殖能力，降低胸腺細胞的凋亡率[12]。本研究添加0.5%絞股藍能夠促進胸腺的發(fā)育，在28、90、150日齡試驗組的皮髓比均高于對照組，120日齡試驗組的皮髓比顯著高于對照組，說明添喂絞股藍可以使胸腺皮質(zhì)變厚，延緩高日齡動物胸腺萎縮，增強機體免疫功能。

胸腺小體是胸腺髓質(zhì)部的特有結(jié)構(gòu)，幼稚的胸腺小體細胞能夠分泌細胞因子及生長因子，在促進胸腺細胞發(fā)育成熟方面表現(xiàn)出重要的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，在廣西三黃雞胸腺中能觀察到3種類型胸腺小體，與對雛鴨胸腺[13]和對非洲鴕鳥的研究[9]結(jié)果一致。在牦牛胸腺中觀察到3種類型的胸腺小體[14]，而在人類胎兒胸腺中可見單個存在及呈融合狀的2種胸腺小體[15]，也有研究者曾在鳥的胸腺中觀察到1種單細胞型胸腺小體[16]，這可能提示不同物種胸腺小體的種類存在差異。

胸腺小體數(shù)量及面積的增加是免疫功能增強的體現(xiàn)，在胸腺細胞發(fā)育成熟活躍期，需要較多胸腺小體來完成選擇培育T細胞功能，胸腺小體數(shù)量及直徑出現(xiàn)代償性升高。對蛋雞和肉雞胸腺小體進行研究，肉雞胸腺小體直徑在5日齡達到最大，之后開始不同程度降低，蛋雞在12日齡達到高峰，之后下降，胸腺小體數(shù)量變化趨勢與直徑大致相同[17]。用青刺果種粕粉添加喂雞，隨著日齡增加，胸腺小體增多，飼喂組比對照組胸腺小體數(shù)量多[18]。將松針粉—麥飯石作復(fù)合添加劑加入雞飼料，隨日齡增加，胸腺小葉面積增加，胸腺小體數(shù)量增多[19]。本研究發(fā)現(xiàn)，添加絞股藍可使胸腺小體數(shù)量達到最大的日齡延后，其后胸腺小體數(shù)量雖呈下降趨勢，但均高于對照組;試驗組與對照組胸腺小體面積各日齡差異均不顯著。這表明添喂絞股藍可減緩胸腺小體數(shù)量增加和降低，提示添喂絞股藍可能延長胸腺成熟時間并推遲胸腺退化。

綜合分析表明，在廣西三黃雞飼料中添加0.5%絞股藍粉能夠一定程度延長胸腺成熟時間并推遲胸腺退化，提高胸腺的功能。

參考文獻：

[1] 張? 彤，劉為鵬，李? 華，等.中國絞股藍種質(zhì)資源的生態(tài)分布及利用[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，61（4）： 55-59.

[2] XU J Q，SHEN Q，LI J，et al. Dammaranes from Gynostemm apentaphyllum and synthesis of their derivatives? as inhibitors of protein tyrosine phosphatase 1B[J].Bioorg Med Chem，2010， 18（11）：3934-3939.

[3] 伍國怡.藥用植物絞股藍的研究進展[J].中國民族民間醫(yī)藥，2016，25（12）：60-63.

[4] YU Y，WANG D Q，ABULA S，et al. The immunological adjuvant activity of gypenosides liposome against newcastle disease vaccine[J].International journal of biological macromolecules，2013， 60（9）：116-121.

[5] 任小杰.銀杏葉及其提取物對肉雞生產(chǎn)性能、抗氧化指標和免疫性能的影響[D].山東泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2018.

[6] 嚴曉丹，姜? 成.八味方對小鼠免疫功能的影響[J].海峽藥學(xué)，2008，20（9）：34-35.

[7] 張海燕，郭? 強，溫偉業(yè).絞股藍總皂苷對小鼠免疫功能的影響[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志，2006（2）：13-15.

[8] 王? 云.雞胸腺發(fā)育形態(tài)學(xué)研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

[9] 陳? 敏，黃? 立，肖? 柯，等.非洲雛鴕鳥胸腺發(fā)育的增齡性變化[J].中國獸醫(yī)學(xué)報，2014，34（6）：955-958.

[10] 劉仰斌，李啟華.小鼠胸腺形態(tài)結(jié)構(gòu)的增齡性變化[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2010，14（31）：5805-5808.

[11] 金光明，張? 敏，湯蘇麗.半胱胺對雞免疫器官組織結(jié)構(gòu)及發(fā)育的影響[J].畜牧與飼料科學(xué)，2009，30（3）：9-11.

[12] 冉瑞圖，孫嘉政，張? 晶，等.人參皂苷Rg1對衰老大鼠胸腺結(jié)構(gòu)與功能的影響[J].中國老年學(xué)雜志，2015，35（10）：2593-2596.

[13] 方? 靜，崔恒敏，彭? 西，等.雛鴨胸腺生長指標的動態(tài)觀測及組織學(xué)觀察[J].中國獸醫(yī)科學(xué)，2006，36（5）：401-405.

[14] 張? 倩.不同年齡段牦牛胸腺的組織結(jié)構(gòu)特征[D].蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013.

[15] 關(guān)? 莉，黃中新.胸腺小體在胸腺發(fā)育中的形態(tài)發(fā)生及其功能探討[J].廣東解剖學(xué)通報，1997，19（1）：4-6.

[16] ZAPATA A G，COOPER E L. The immune system：Comparative histophysiology[M].Michester：John Wiley & Sona，1991.

[17] 張? 勇.蛋雞和肉雞生長發(fā)育過程中胸腺組織結(jié)構(gòu)、T細胞及其亞群分布的研究[D].呼和浩特：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

[18] 殷中瓊，喻? 印，賈仁勇，等.青刺果種粕粉對雞免疫器官發(fā)育的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報，2007，19（3）：245-252.

[19] 王? 群，王? 玨.松針粉-麥飯石復(fù)合添加劑對肉雞胸腺生長發(fā)育的影響[J].飼料工業(yè)，2005，26（16）：42-44.

收稿日期：2019-04-30

基金項目：國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目（201710593082）;廣西壯族自治區(qū)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目（201428）

作者簡介：張潤祥（1995-），男，河北衡水人，在讀碩士研究生，研究方向為動物組織學(xué)，（電話）18777159571（電子信箱）827575791@qq.com; 共同第一作者，吳亞輝（1989-），女，碩士，主要從事動物組織學(xué)研究;通信作者，王曉麗（1976-），女，教授，博士，主要從事細胞學(xué)、組織學(xué)以及胚胎工程研究工作，（電話）15994384384（電子信箱）xiaoliwang@gxu.edu.cn。