微柱凝膠技術(shù)對于新生兒溶血病患兒輸血前的檢驗效果

李 慧，張 田

南陽市骨科醫(yī)院，河南 南陽 473000

新生兒溶血病指的是母嬰之間血型不合，母親體內(nèi)產(chǎn)生與新生兒血型抗原不配的血型抗體，抗體經(jīng)胎盤進入到新生兒體內(nèi)，發(fā)生同族免疫性溶血。溶血患兒的血清膽紅素水平會在短時間內(nèi)上升，伴隨不同程度的黃疸、貧血、水腫癥狀，若是得不到及時的輸血治療，患兒可能會發(fā)生心力衰竭、呼吸窘迫等嚴重病癥［1］。為了防止患兒輸血時因血型排斥加重溶血癥狀，在輸血前進行配血檢測十分重要。微柱凝膠技術(shù)是新發(fā)展起來的血型血清學檢查方法，為了探究其在新生兒溶血病患兒輸血前的價值，南陽市骨科醫(yī)院進行了對比研究，發(fā)生其檢驗價值高于試管法，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取南陽市骨科醫(yī)院2017年3月—2018年9月收治的60例新生兒溶血病患兒為研究對象，均采用輸血治療。其中，男 28 例，女 32 例；日齡 1～29（8.44±2.25）d；體重2.4～4.6（3.26±0.25）kg；患兒血型：A 型 14 例，B 型 13例，O型26例，AB型7例；母親血型：A型13例，B型13例，O型28例，AB型6例。本次研究在醫(yī)院倫理委員會的批準下進行。

納入標準：（1）家屬知情本次研究并同意參與；（2）患兒無藥物過敏史；（3）患兒血液系統(tǒng)無其他疾病。

排除標準：（1）有精神病家族史患兒或者意識障礙患兒；（2）先天性心臟病患兒；（3）心肝肺腎等器官功能不全患兒；（4）傳染性疾病患兒；（5）循環(huán)、免疫系統(tǒng)有嚴重疾病患兒。

1.2 檢驗方法

所有患兒血標本分別使用試管法、微柱凝膠技術(shù)進行血型鑒定；分別通過聚凝胺法、微柱凝膠技術(shù)進行交叉配血。儀器包括長春博訊生物技術(shù)有限責任公司的TD-A 型血清學用離心機（包括試劑）、長春博研科學儀器有限公司的FYQ型免疫微柱孵育器等。

1.2.1 血型鑒定：（1）試管法。參考《全國臨床檢驗操作流程》，對所有患兒的血標本進行離心處理，觀察反定結(jié)果，做陰性對照管排除冷凝集。（2）微柱凝膠技術(shù)。離心處理所有的血標本，取6 支凝膠微管，分別記為A、B、C、D、E、F，在A、B、C、D 管中分別滴入0.5%紅細胞懸液，并在E、F管中分別將血清、已知A型及B型紅細胞0.5%懸液滴入，接著進行離心處理，轉(zhuǎn)速3 000 r/min，時間為5 min，結(jié)束后肉眼判定結(jié)果。

1.2.2 交叉配血：（1）凝聚胺法。離心所有患兒及供血者的血清，取2 支凝膠微管，分別記為主側(cè)、次側(cè)，配置3%～5%紅細胞懸液，將2滴輸血標本、1滴供血標本紅細胞懸液滴加入主側(cè)，將2 滴供血標本、1 滴輸血標本紅細胞懸液滴加入次側(cè)，接著分別滴入0.6 ml 低離子介質(zhì)溶液，混合均勻，靜置1 min，分別滴加2滴凝聚胺溶液，靜置15 s，再以3 000 r/min 進行離心處理，時間為1 min，取管底0.1 ml 凝集液體，向其中滴入2 滴重懸液，肉眼判定結(jié)果。（2）微柱凝膠技術(shù)。離心所有患兒及供血者的血清，取2支凝膠微管，分別記為主側(cè)、次側(cè)，制作0.5%～1%紅細胞懸液，將50 μL供血者標本及50 μL輸血者標本紅細胞懸液加入至主側(cè)，將50 μL供血者標本紅細胞懸液標本及50 μL輸血加入至次側(cè)，在37 ℃下孵育15 min，以3 000 r/min 進行離心處理，時間為5 min，完畢后肉眼判定結(jié)果。

1.3 觀察指標

統(tǒng)計并比較微柱凝膠技術(shù)、試管法的正反定型不符率；微柱凝膠技術(shù)、聚凝胺法交叉配血不合率。微柱凝膠技術(shù)交叉配血不合判定標準：匹配為紅細胞沉積在凝膠管底部，不匹配為凝膠上或凝膠中有紅細胞聚集［2］。聚凝胺法交叉配血不合判定標準：匹配為1 min 內(nèi)散開的屬于凝聚胺引起的非免疫性凝集，不匹配為不散開的屬于異體抗體所引起的免疫性凝集，試驗結(jié)果需要在3 min 進行判讀［3］。

1.4 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0 軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標準差（）表示，組間比較采用t 檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 試管法、微柱凝膠技術(shù)的血型鑒定情況

微柱凝膠技術(shù)、試管法的正反定型不符率均較低，相差不大，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 試管法、微柱凝膠技術(shù)的血型鑒定情況比較 例（%）

2.2 聚凝胺法、微柱凝膠技術(shù)交叉配血結(jié)果

微柱凝膠技術(shù)、聚凝胺法交叉配血不合率分別為3.33%、13.33%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 聚凝胺法、微柱凝膠技術(shù)交叉配血結(jié)果比較 例（%）

3 討論

據(jù)相關統(tǒng)計，每140 例新生兒中就有1 例存在溶血病，此病的發(fā)病率極高。新生兒溶血病的發(fā)病原因是母親體內(nèi)的IgG抗體從胎盤進入胎兒血液，使胎兒的紅細胞破壞，使胎兒出現(xiàn)高膽紅素血癥、溶血、貧血等病癥［4］。輸血是治療ABO新生兒溶血病的主要方法，能快速幫助患兒補充血容量，糾正休克等癥狀，為患兒的機體維持正常的供養(yǎng)能力。輸血應用廣泛，若存在血型不合、血液制品質(zhì)量差等問題，容易使不良的輸血反應被誘發(fā)，輸血治療的安全性被大大降低，因此，在新生兒溶血患兒接受輸血治療前，要加強檢驗工作。

傳統(tǒng)的試管法因離心作用可以加速凝集反應，反應時間較短，可以有效測定紅細胞上是否有無A 抗原或B 抗原，利用紅細胞凝集試驗，通過正反定型對輸血者及供血者的血型進行鑒定。微柱凝膠技術(shù)即將紅細胞和血清加入充有凝膠的微柱內(nèi)腔中，如果血清中有該紅細胞的特異性抗體，會形成紅細胞免疫復合物，經(jīng)過離心處理后，復合物會懸于凝膠中或者浮于凝膠表面（陽性）；如果血清中沒有該紅細胞的特異性抗體，不會形成紅細胞復合物，離心后分散的紅細胞會沉在微柱內(nèi)腔的尖底部（陰性）［5］。同時，微柱凝膠技術(shù)還可以防止抗體蛋白在蛋白質(zhì)中殘留，或者避免出現(xiàn)抗球蛋白被殘留鹽分稀釋的情況，導致結(jié)果呈現(xiàn)為假陰性，能降低漏診率。在本次研究中，微柱凝膠技術(shù)、試管法的正反定型不符率均較低，分別為1.67%、3.33%，相差不大，差異無統(tǒng)計學意義。與張瑜［6］的研究結(jié)果一致，在其研究報道中，微柱凝膠技術(shù)、試管法的正反定型不符率均分別為1.29%、1.07%。上述結(jié)果表明，在輸血前使用微柱凝膠技術(shù)進行血型鑒定檢驗，能有效鑒定出輸血者和供血者的血型。

在交叉配血中，聚凝胺法中的聚凝胺被溶解后，會產(chǎn)生大量的正電荷，降低紅細胞電位，導致非特異凝集出現(xiàn)可逆性，要中和凝聚胺的凝集，可以在其中加入枸櫞酸鈉，因此臨床可以通過觀察凝集紅細胞的散開情況進行判定。但是，在藥物、肝素、低濃度抗體等的影響下，凝集的紅細胞也會散開，因此，使用聚凝胺法進行交叉配血，配血不合的概率較高。微柱凝膠技術(shù)進行交叉配血的原理是生物凝膠過濾，紅細胞表面有抗體球蛋白，其會與抗球蛋白試劑中的抗體產(chǎn)生特異性反應，當紅細胞凝集后，體積會增大，凝膠通道僅能通過單個紅細胞，已經(jīng)凝集的紅細胞即便分開，也無法通過通道，因此匹配血型的紅細胞會在凝膠的上部或中部凝集，不匹配血型的紅細胞會沉積在凝膠管的底部。因此，在本次研究中，微柱凝膠技術(shù)、聚凝胺法交叉配血不合率分別為3.33%、13.33%。這與劉金榮［7］的研究結(jié)果一致，其研究報道中，微柱凝膠技術(shù)、聚凝胺法交叉配血不合率分別為1.64%、2.93%。上述結(jié)果說明，相比于聚凝胺法，在交叉配血中使用微柱凝膠技術(shù)，能提高交叉配血成功率。

綜上所述，微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中有良好的價值，能準確鑒定患兒及供血者的血型，降低交叉配血不合率，能提高臨床輸血的安全性，值得臨床廣泛推廣。