卵泡液內(nèi)微量元素與體外受精-胚胎移植結(jié)局關(guān)系的研究

畢慧玲 苗聰秀 苗卉 李娜 李敏

[摘要] 目的 探究IVF-ET不同妊娠結(jié)局者卵泡液內(nèi)微量元素水平變化，以及其與妊娠結(jié)局者的關(guān)系。方法 2017年2—4月方便選取該院進(jìn)行IVF-ET治療的97例女性不育患者進(jìn)行研究，根據(jù)妊娠結(jié)局分為妊娠組（59例）、非妊娠組（38例），采用GnRH-a-Gn-hCG方案控制排卵，卵泡穿刺后收集上清卵泡液，電感耦合等離子體質(zhì)譜法檢測卵泡液銅、鋅、鐵、硒、鉛水平。結(jié)果 妊娠組卵泡液中微量元素鋅、硒[（0.52±0.13）ppm、（54.93±3.44）ppb]水平均高于非妊娠組[（0.30±0.18）ppm、（40.51±4.21）ppb]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.514、17.649，P<0.05）。妊娠組與非妊娠組卵泡液中微量元素銅、鐵水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。高齡組較非高齡組妊娠率低（42.86%、68.12%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.333，P<0.05），高齡組與非高齡組比較微量素鋅、銅、鐵、硒及鉛均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 卵泡液中微量元素鋅、硒與IVF-ET妊娠結(jié)局有相關(guān)性，微量元素銅、鐵、鉛與IVF-ET妊娠結(jié)局無相關(guān)行。卵泡液中微量元素銅、鐵、鋅、硒、鉛與IVF患者年齡無相關(guān)性。

[關(guān)鍵詞] 體外受精-胚胎移植;卵泡液;微量元素;臨床妊娠

[中圖分類號(hào)] R714? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-0742（2020）01（b）-0007-04

Study on the Relationship between Trace Elements in Follicular Fluid and in Vitro Fertilization-embryo Transfer Outcome

BI Hui-ling， MIAO Cong-xiu， MIAO Hui， LI Na， LI Min

Department of Reproductive Genetics， Affiliated Peace Hospital， Changzhi Medical College， Institute of Reproductive Genetics， Changzhi Medical College， Changzhi， Shanxi Province， 046000 China

[Abstract] Objective To investigate the changes of trace element levels in follicular fluid of IVF-ET patients with different pregnancy outcomes and their relationship with pregnancy outcomes. Methods A total of 97 female infertility patients from Feb 2017 to Apr 2017 who underwent IVF-ET treatment in this year were enrolled. According to the pregnancy outcome， they were divided into pregnancy group （59 cases） and non-pregnant group （38 cases）. GnRH-a-Gn-hCG program was used to control ovulation. After follicular puncture， the supernatant follicular fluid was collected， and the levels of copper， zinc， iron， selenium and lead in follicular fluid were detected by inductively coupled plasma mass spectrometry. Results The levels of trace elements zinc and selenium [（0.52±0.13）ppm、（54.93±3.44）ppb]in the follicular fluid of the pregnant group were higher than those in the non-pregnant group[（0.30±0.18）ppm、（40.51±4.21）ppb]. The difference was statistically significant （t=6.514， 17.649， P<0.05）. There was no significant difference in the levels of trace elements copper and iron in the follicular fluid between the pregnant and non-pregnant groups （P>0.05）. The pregnancy rate was lower in the elderly group than in the non-age group （42.86%， 68.12%）， the difference was statistically significant （χ2=5.333， P<0.05）. The older group and the non-age group were compared with trace zinc， copper， iron， selenium and lead. There was no statistically significant difference（P>0.05）. Conclusion There is a correlation between trace element zinc and selenium in follicular fluid and IVF-ET pregnancy outcome. There is no correlation between trace elements copper， iron， lead and IVF-ET pregnancy outcome. There were no correlations between the trace elements of copper， iron， zinc， selenium and lead in follicular fluid and IVF patients.

[Key words] In vitro fertilization-embryo transfer; Follicular fluid; Trace elements; Clinical pregnancy

體外受精-胚胎移植（ in vitro fertilization andembryotransfer，IVF-ET）是臨床治療不孕癥的主要技術(shù)，由于治療過程妊娠成功率受較多因素的影響，雖IVF-ET妊娠率已有較大提高，但仍有一部分患者不能成功，因此進(jìn)一步尋找影響IVF-ET的因素，對(duì)于提高IVF-ET成功率，改善妊娠結(jié)局具有一定的積極意義[1]。微量元素是機(jī)體生長、發(fā)育、以及維持正常生理功能不可缺少的元素，研究顯示微量元素可促進(jìn)內(nèi)分泌腺分泌雌性激素進(jìn)而發(fā)揮其相應(yīng)生理作用[2]。微量元素的缺乏則會(huì)影響內(nèi)分泌器官結(jié)構(gòu)異常，進(jìn)而影響機(jī)體內(nèi)分泌水平，降低受孕率[3]。與生殖過程密切相關(guān)的微量元素是否也會(huì)影響IVF-ET臨床妊娠結(jié)局，目前尚不清楚。該研究以2017年2—4月在該院進(jìn)行IVF-ET的97例患者為例，通過分析卵泡液中的微量元素鋅、銅、鐵、硒及鉛，探究微量元素對(duì)IVF-ET臨床妊娠結(jié)的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

方便選取在該院進(jìn)行IVF-ET治療的97例女性不育患者進(jìn)行研究，根據(jù)妊娠結(jié)局分為妊娠組（59例）、非妊娠組（38例）。妊娠組：患者年齡24～39歲，平均（30.39±3.17）歲;不孕年限1～10年，平均（3.15±0.79）年。非妊娠組：患者年齡24～37歲，平均（31.53±2.65）歲;不孕年限1～9年，平均（3.37±0.63）年。兩組上述資料對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

病例選取標(biāo)準(zhǔn)：①性生活正常未采取避孕措施;②經(jīng)期正常;③半年內(nèi)未服用激素藥物治療;④患者對(duì)該次研究知情，并同意參與研究，簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①先天性生殖器官發(fā)育異常;②男方因素導(dǎo)致不孕;③遺傳性疾病、生殖系統(tǒng)感染;④合并腫瘤、心腦血管嚴(yán)重疾病;⑤接觸重金屬職業(yè)史及吸煙史。

1.2? 試劑與儀器

電感耦合等離子體質(zhì)譜法儀器為Agilent 7900x ICP-MS;促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑（GnRH-a）（批號(hào)：H20120298），規(guī)格3.75 mg;促性腺激素（Gn）（批號(hào) S20110005），規(guī)格33 μg;重組人絨毛膜促性腺激素250 μg（批號(hào)：BA045761）。

1.3? GnRH-a-Gn-hCG方案控制排卵

所有不孕患者均采用GnRH-a-Gn-hCG方案（短效長方案）控制排卵，于月經(jīng)周期黃體中期垂體降調(diào)節(jié)，14～17 d后啟動(dòng)促排，采用陰道B超檢測卵泡大小，結(jié)合性激素結(jié)果對(duì)Gn用量進(jìn)行調(diào)節(jié)，當(dāng)兩個(gè)以上卵泡直徑超過18 mm時(shí)（或3個(gè)卵泡平均直徑超過16 mm）注射重組人絨毛膜促性腺激素250 μg，36～37 h內(nèi)經(jīng)陰道B超引導(dǎo)進(jìn)行取卵，行常規(guī)胚胎體外受精培養(yǎng)，同時(shí)觀察記錄獲卵數(shù)、受精率、優(yōu)胚率等。取卵后3 d行胚胎移植手術(shù)，移植4周后經(jīng)B超檢測宮內(nèi)出現(xiàn)妊娠囊、胎心搏動(dòng)等判斷為臨床妊娠。

1.4? 卵泡液中微量元素銅、鋅、鐵水平檢測

選擇每例患者首個(gè)直徑≥16 mm卵泡進(jìn)行穿刺，體視顯微鏡下?lián)炻押髮⒙雅菀何刖垡蚁┰嚬苤忻荛]，離心，取上清，-20℃保存待測。常溫解凍卵泡液，采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定卵泡液內(nèi)鋅（Zn）、銅（Cu）、硒（Se）及鉛（Pb）的含量。

1.5? 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 不同妊娠結(jié)局患者臨床參數(shù)比較

兩組患者在年齡、不孕年限、Gn用量、獲卵數(shù)量、移植胚胎數(shù)量、卵裂率、受精率、血清基礎(chǔ)FSH、LH、E2水平及基礎(chǔ)AFC方面比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。妊娠組優(yōu)胚率高于非妊娠組，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.249，P=0.006<0.05）。見表1。

2.2? 不同妊娠結(jié)局患者卵泡液中微量元素銅、鋅、鐵水平比較

妊娠組卵泡液中微量元素銅、鋅、硒水平均高于非妊娠組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.514、17.649，P=0.012、0.009<0.05）妊娠組與非妊娠組卵泡液中微量元素銅、鐵水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

2.3? 高齡組（>35歲）與非高齡組（≦35歲）間微量元素的比較

高齡組較非高齡組妊娠率低（42.86% vs 68.12%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.333，P<0.05），高齡組與非高齡組比較微量素鋅、銅、鐵、硒及鉛均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

3? 討論

微量元素為金屬離子，屬于人體必不可少的營養(yǎng)元素，為機(jī)體維生素、激素、酶重要組成成分，微量元素缺乏則會(huì)導(dǎo)致生理功能紊亂[4]。近期研究顯示，微量元素參與酶、載體的構(gòu)成及電子傳遞系統(tǒng)、維生素、激素合成，在維持身體營養(yǎng)、生理功能方面發(fā)揮重要作用[5]。臨床研究表明微量元素可影響內(nèi)分泌腺體、組織及激素分泌，微量元素異常則影響下丘腦-垂體性腺激素水平，且必需微量元素過量或貧乏，均引發(fā)內(nèi)分泌腺功能異常，影響生殖[6-7]。因此微量元素代謝紊亂、水平的異?？赡苁菍?dǎo)致不明原因不孕的重要因素。

鋅為人體不可缺少的微量元素，身體內(nèi)和鋅有關(guān)的醇高達(dá)200種，主要分布在卵母細(xì)胞或卵細(xì)胞胞漿內(nèi)，在卵母細(xì)胞的發(fā)育發(fā)揮重要作用。動(dòng)物研究顯示，卵母細(xì)胞中缺乏鋅元素，則會(huì)影響細(xì)胞的成熟，使異常形態(tài)卵母細(xì)胞數(shù)量升高[8]。此外還有研究顯示缺鋅可使下丘腦LHRH水平降低，進(jìn)而導(dǎo)致垂體分泌 FSH/LH水平降低，影響卵泡的成熟、生長[9]。動(dòng)物研究顯示，恒河猴體內(nèi)缺鋅后，B超監(jiān)測顯示卵巢異常發(fā)育[10]。尹耀學(xué)等[11]研究顯示用不同劑量的鋅刺激優(yōu)勢卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞，結(jié)果顯示隨著鋅處理劑量的升高，細(xì)胞中FSH水平則降低，影響卵泡的發(fā)育。該研究顯示妊娠組卵泡液中鋅元素的水平明顯升高，達(dá)到（0.52±0.13）ppm，顯著高于未妊娠組的（0.30±0.18）ppm。該次研究中關(guān)于鋅的相關(guān)研究結(jié)果與孫艷等人[12]研究一致，妊娠組鋅（1.25±0.41）ppm高于未妊娠組（1.16±0.21）ppm。提示鋅元素水平可能影響胚胎質(zhì)量、妊娠情況。

[11]? 尹耀學(xué)， 蘇友強(qiáng). LH/EGF誘導(dǎo)ICR小鼠竇狀卵泡卵母細(xì)胞體外成熟與排卵的研究[J]. 南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版， 2017，37（9）：1163-1167.

[12]? 孫艷，林麗欽，康躍凡，等.微量元素鋅、銅與體外受精-胚胎移植臨床結(jié)局的關(guān)系[J].中國綜合臨床， 2011， 27（10）：1009-1012.

[13]? Bergstra T J， Hogeveen H， Stassen E N. Attitudes of different stakeholders toward pig husbandry： a study to determine conflicting and matching attitudes toward animals， humans and the environment[J]. Agriculture & Human Values， 2017， 34（2）：1-13.

[14]? Pérez J， Martínez A， Descals E， et al. Responses of Aquatic Hyphomycetes to Temperature and Nutrient Availability： a Cross-transplantation Experiment[J].Microbial Ecology， 2018， 76（2）：1-12.

[15]? 李欣，李清虹，李清峰，等. 食品中銅對(duì)早孕婦女健康探討與分析[J]. 山西醫(yī)藥雜志， 2014，43（16）： 1942-1943.

[16]? 龍玲芳， 張雪輝， 陳樹平. 健康體檢妊娠婦女全血微量元素檢測結(jié)果分析[J]. 海南醫(yī)學(xué)， 2017， 28（7）：1107-1110.

[17]? 張喜梅， 馬國芳. 克羅米芬聯(lián)合二甲雙胍對(duì)多囊卵巢綜合征患者外周血T細(xì)胞亞群及氧化應(yīng)激水平的影響[J]. 山東醫(yī)藥， 2017， 57（12）：88-90.

[18]? 劉忠慧. 氧化應(yīng)激對(duì)多囊卵巢綜合征患者體外受精-胚胎移植結(jié)局的影響[D]. 青島：青島大學(xué)， 2015.

[19]? 畢慧玲， 劉錦宏. 微量元素鋅、硒、鉛及生殖激素與生殖健康的關(guān)系[J]. 中國衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理， 2017， 8（18）：29-31.

[20]? Vahidinia A， Samiee F， Faradmal J， et al. Mercury， Lead， Cadmium， and Barium Levels in Human Breast Milk and Factors Affecting Their Concentrations in Hamadan， Iran[J]. Biological Trace Element Research， 2018， 187（1）：1-9.

（收稿日期：2019-10-23）

[課題來源] 卵泡液內(nèi)微量元素與體外受精-胚胎移植結(jié)局相關(guān)性研究（QDZ201626）。

[作者簡介] 畢慧玲（1973-），女，山西晉城高平人，碩士，副主任醫(yī)師，研究方向：婦產(chǎn)科學(xué)，不孕不育及輔助生殖技術(shù)。