維生素B族復(fù)合TRP肽和SOD對(duì)焦慮性抑郁癥C57BL/6小鼠行為學(xué)改善的影響

朱西平 - 李文治 - 陶 倩 何文江 - 崔 春,3 ,3

(1.華南理工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣東 廣州 510640；2.無(wú)限極﹝中國(guó)﹞有限公司，廣東 江門(mén) 529156；3.廣東巍微生物科技有限公司，廣東 廣州 510641)

試驗(yàn)擬研究維生素B族復(fù)合TRP肽和SOD配方(VB3∶VB6∶TRP肽∶SOD=2∶10∶3∶4)潛在的改善和預(yù)防焦慮性抑郁癥的作用，為維生素B族復(fù)合TRP肽和SOD配方在醫(yī)藥、保健品方面應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

C57BL/6小鼠：4周齡，(18±2)g，常州凱文斯動(dòng)物實(shí)驗(yàn)有限公司。小鼠購(gòu)入后先適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，試驗(yàn)期間小鼠均在室溫(24±2)℃、相對(duì)濕度(50±5)%、光/暗周期12 h/12 h的環(huán)境下喂養(yǎng)，并按試驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。

1.1.2 材料與試劑

皮質(zhì)酮(CORT)：北京索萊寶科技有限公司；

VB6、VB3和SOD：食品級(jí)，純度≥95%，深圳中科欣揚(yáng)生物科技有限公司；

TRP肽：食品級(jí)，純度≥95%，無(wú)限極中國(guó)有限公司；

氟西汀分散片(百憂解)：禮來(lái)蘇州制藥有限公司；

生化試劑盒購(gòu)：江萊生物科技有限公司。

1.1.3 主要儀器

小鼠高架十字迷宮視頻分析測(cè)試系統(tǒng)：XR-XG201型，上海軟隆科技發(fā)展有限公司；

小鼠曠場(chǎng)視頻分析測(cè)試系統(tǒng)：XR-XZ301型，上海軟隆科技發(fā)展有限公司；

小鼠強(qiáng)迫游泳視頻測(cè)試分析系統(tǒng)：SA2091型，上海軟隆科技發(fā)展有限公司；

多功能酶標(biāo)儀：FilterMax F3/F5型，美國(guó)Molecular Devices公司；

電子天平：FA2204B型，上海精密科學(xué)儀器有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 焦慮性抑郁癥動(dòng)物模型建立 84只雄性C57BL/6小鼠在濕度(60±10)%和溫度(25±2)℃條件下飼養(yǎng)(每籠5只；320 mm×215 mm×170 mm)，標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室條件下，晝夜交替12 h，隨意獲取正常食物和水，在華南農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)方案經(jīng)華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心委員會(huì)批準(zhǔn)，并遵循中國(guó)試驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用指南。小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d開(kāi)始造模，造模方法根據(jù)Zhu等[2]報(bào)道的方法進(jìn)行。將小鼠隨機(jī)分配到7個(gè)試驗(yàn)組(n=12)并每周稱(chēng)重。5組受到慢性束縛應(yīng)激(Chronic restraint stress，CRS)(6 h/d，9:00～15:00)，然后皮下注射皮質(zhì)酮(CORT)溶解于含有0.1%二甲基亞砜(DMSO)和0.1% Tween-80的生理鹽水中[劑量30 mg/(kg·d)]。溶媒對(duì)照組(VG)給予CRS(6 h/d，9:00～15:00)，并以0.02 mL/g體重的體積皮下給予生理鹽水。將正常對(duì)照(NC)小鼠禁食(6 h/d，9:00～15:00)，并以0.02 mL/g體重的體積皮下給予生理鹽水。連續(xù)造模21 d后，5組受到慢性束縛應(yīng)激，然后皮下注射皮質(zhì)酮的小鼠均表現(xiàn)出不同程度的焦慮和抑郁樣行為，然后將這5組焦慮和抑郁樣行為的小鼠隨機(jī)分配到不同的治療組。NC為生理鹽水治療的正常對(duì)照組；VG為生理鹽水治療用溶媒對(duì)照組；PC為鹽酸氟西汀治療陽(yáng)性對(duì)照組(98%)，18 mg/(kg·d)；MC為用生理鹽水治療的模型對(duì)照組；VBPSH、VBPSM、VBPSL分別為高、中、低劑量維生素B族復(fù)合TRP肽和SOD配方治療組，260，195，130 mg/(g·d)。將所有治療劑溶解在上述鹽水中，每只小鼠體積為10 mL/(kg·d)。

1.2.2 強(qiáng)迫游泳試驗(yàn) 在建模后(第4周)和治療4周后(第8周)，在白天對(duì)所有小鼠進(jìn)行動(dòng)物強(qiáng)迫游泳行為試驗(yàn)。在整個(gè)測(cè)試過(guò)程中，為了獲得準(zhǔn)確的結(jié)果必須確保小鼠行為學(xué)試驗(yàn)在一個(gè)安靜和平穩(wěn)的環(huán)境下進(jìn)行，且整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中保持溫度為(25±1)℃。根據(jù)Poleszak等[18]報(bào)道的方法，該測(cè)試在2 d內(nèi)進(jìn)行兩次。第一階段測(cè)試：將每只小鼠單獨(dú)輕輕放入裝有水(水位高度15 cm)的玻璃圓筒(Φ10 cm×25 cm)，使每只試驗(yàn)小鼠適應(yīng)游泳6 min。第二階段測(cè)試：適應(yīng)游泳結(jié)束24 h后，開(kāi)始第二階段的試驗(yàn)，總共6 min。其中將動(dòng)物放入圓筒中并使其適應(yīng)游泳1 min；然后開(kāi)始一個(gè)5 min的測(cè)試，測(cè)試過(guò)程中使用數(shù)碼攝像系統(tǒng)跟蹤和記錄動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)和行為，測(cè)量不動(dòng)的總持續(xù)時(shí)間(s)。游泳不動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng)試驗(yàn)小鼠浮動(dòng)時(shí)，僅用一只腳輕輕劃動(dòng)或稍微移動(dòng)，以保持其頭部高于水，而不掙扎。試驗(yàn)結(jié)束后，立即將小鼠從水中取出并放回飼養(yǎng)籠。

1.2.3 曠場(chǎng)試驗(yàn) 試驗(yàn)設(shè)備為方形盒(40 cm長(zhǎng)×40 cm寬×40 cm高)，材料為白色聚氯乙烯。試驗(yàn)根據(jù)朱明好等[19]的方法進(jìn)行并有所改進(jìn)，每次試驗(yàn)之前或者兩次測(cè)試之間用70%乙醇水溶液徹底清洗實(shí)驗(yàn)設(shè)備并使其干燥，以消除前一次測(cè)試留下的尿液和糞便氣味的影響。在整個(gè)測(cè)試過(guò)程中，為了獲得準(zhǔn)確的結(jié)果必須確保小鼠行為學(xué)試驗(yàn)在一個(gè)安靜和平穩(wěn)的環(huán)境下進(jìn)行。該測(cè)試還包括兩個(gè)階段：預(yù)測(cè)試，其中將動(dòng)物輕輕放置在盒子的最右上角并允許適應(yīng)15 min；在預(yù)測(cè)試結(jié)束24 h后進(jìn)行10 min 的測(cè)試，其中每只小鼠再次單獨(dú)放置在盒子的最右上角并允許自由移動(dòng)，其運(yùn)動(dòng)和行為也使用數(shù)字?jǐn)z像系統(tǒng)記錄。在試驗(yàn)結(jié)束后，立即將小鼠從盒子中取出并放回飼養(yǎng)籠。對(duì)視頻進(jìn)行分析，將箱底板分成16個(gè)相等尺寸(10 cm×10 cm)的小方塊，記錄每只小鼠在每個(gè)小方塊中花費(fèi)的時(shí)間。按式(1)計(jì)算中央停留時(shí)間百分比。

(1)

式中：

c——中央停留時(shí)間百分比，%；

m1——曠場(chǎng)試驗(yàn)中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間，s；

m2——曠場(chǎng)試驗(yàn)總測(cè)試時(shí)間，s。

1.2.4 高架十字迷宮試驗(yàn) 根據(jù)Walf等[20]的方法略有修改，在曠場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)束2 d后進(jìn)行高架十字迷宮試驗(yàn)。迷宮由一個(gè)十字形平臺(tái)組成，有兩個(gè)開(kāi)放式臂(長(zhǎng)30 cm×寬5 cm)和兩個(gè)閉合臂(30 cm長(zhǎng)×5 cm寬×15 cm深)，兩個(gè)臂有一個(gè)共同的中心區(qū)(5 cm長(zhǎng)× 5 cm寬)，測(cè)試時(shí)整個(gè)迷宮被抬高到距離地面80 cm的高度。同樣，在整個(gè)測(cè)試過(guò)程中，為了獲得準(zhǔn)確的結(jié)果必須確保小鼠行為學(xué)試驗(yàn)在一個(gè)安靜和平穩(wěn)的環(huán)境下進(jìn)行。將每只小鼠單獨(dú)放置在面向其中一個(gè)開(kāi)臂的迷宮中心上，適應(yīng)1 min后并用數(shù)碼攝像系統(tǒng)記錄其5 min運(yùn)動(dòng)和行為。對(duì)于視頻分析，記錄了開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)和開(kāi)臂停留時(shí)間百分比。每次試驗(yàn)之前或者兩次測(cè)試之間用70%乙醇水溶液徹底清洗試驗(yàn)設(shè)備并使其干燥，以消除前一次測(cè)試留下的尿液和糞便氣味的影響

1.2.5 小鼠體重和生化指標(biāo)測(cè)定 小鼠體重從適應(yīng)性喂養(yǎng)1周開(kāi)始，以后每周測(cè)定一次小鼠體重并記錄數(shù)據(jù)，建模與灌胃期間共7周，收集3次體重?cái)?shù)據(jù)進(jìn)行分析，分別是初始體重、建模后體重和治療后體重。初始體重為適應(yīng)性喂養(yǎng)第1周體重；建模后體重為第4周體重；治療后體重為第8周體重。計(jì)算小鼠不同處理時(shí)期體重變化指數(shù)。行為學(xué)試驗(yàn)測(cè)試24 h后，所有試驗(yàn)小鼠用4%水合氯醛(腹腔注射0.1 mL/10 g)深度麻醉，并通過(guò)眼球摘除取血和脊柱脫位處死。首先，將摘除眼球的小鼠的血液立即收集到含有EDTA的2.0 mL離心管中，在(25±1)℃ 下保持30 min，并在3 000×g和4 ℃下離心15 min 以收集上清液(血清)。根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和比色法測(cè)定血清TNF-α，IL-6，IL-1β和IFN-γ水平。眼球取血后，在冰上快速取下海馬和下丘腦，用冰冷的生理鹽水溶液沖洗，用吸水紙吸水后，再加入9倍體積的PBS(pH 7.4)后，用均質(zhì)儀將樣品勻漿，然后在4 ℃(3 000×g，20 min)下離心取上清。根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和比色法測(cè)定上清液中TRP、KYN、NAD+、KYNA和MDA的含量，以及SOD、CAT、NOS的活性。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 采用 SPSS 17.0(SPSS Inc.，Chicago，IL，USA)統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA)，所有試驗(yàn)均重復(fù)3次。采用Duncan’s post-hoc檢測(cè)對(duì)各數(shù)據(jù)間的平均值進(jìn)行差異顯著性分析，并對(duì)各組數(shù)據(jù)平均值顯著性差異進(jìn)行評(píng)價(jià)(P<0.05)。數(shù)據(jù)表述采用(平均值±方差)的形式。

2 結(jié)果與討論

2.1 VBPS配方對(duì)小鼠日?；顒?dòng)和體重的影響

在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，NC小鼠在行為方面表現(xiàn)正常，包括進(jìn)食、飲水、運(yùn)動(dòng)、排便和排尿均表現(xiàn)正常狀態(tài)，而MC小鼠則表現(xiàn)出無(wú)精打采，體重增加緩慢，運(yùn)動(dòng)緩慢，進(jìn)食和飲水減少等癥狀。在造模期間(0～3周)，受CRS和CORT誘導(dǎo)應(yīng)激的小鼠均表現(xiàn)出無(wú)精打采，體重增加緩慢，運(yùn)動(dòng)緩慢，飲食和飲水減少。在給藥期(4～7周)后，觀察到治療小鼠的焦慮性抑郁行為得到改善，包括體重增加，進(jìn)食和飲水增加。在建模過(guò)程中，NC(5.64 g)和VG(3.46 g)小鼠的體重增加指數(shù)顯著高于造模小鼠(MC、PC、VBPSH、VBPSM和VBPSL)，且造模組之間的體重增加指數(shù)[(1.59±0.13)g]沒(méi)有顯著性(P>0.05)的差異(圖1)。灌胃處理4周后，與正常組比較，MC組(焦慮性抑郁癥未治療組)體重增加指數(shù)顯著減少(P<0.05)；與模型組相比，各處理組小鼠體重增加指數(shù)均明顯高于(P<0.05)MC處理組小鼠。陽(yáng)性對(duì)照組(PC)和VBPSH處理組體重增加指數(shù)最為明顯，其次為VBPSM和VBPSL處理組。綜上所述，VBPS處理可改善焦慮性抑郁癥小鼠體重增加緩慢的癥狀。

圖1 VBPS處理對(duì)小鼠體重增加指數(shù)的影響

2.2 VBPS配方對(duì)焦慮性抑郁癥小鼠抑郁樣行為的影響

在造模21 d后，CRS和CORT注射處理組小鼠強(qiáng)迫游泳行為學(xué)試驗(yàn)的游泳不動(dòng)時(shí)間和總游泳距離與NC(179.42 s；12.36 m)或VG(211.21 s；11.03 m)相比，分別顯著增加和減少(P<0.05)(表1)。與NC組相比，VG小鼠的不動(dòng)時(shí)間顯著增加(P<0.05)和游泳總距離顯著減少(P<0.05)。結(jié)果表明，21 d連續(xù)CRS可誘導(dǎo)游泳不動(dòng)時(shí)間增加和游泳總距離減少，可造成小鼠明顯的抑郁樣行為。此外，連續(xù)CRS聯(lián)合CORT背部皮下注射可引起小鼠明顯出現(xiàn)抑郁樣行為。給藥處理4周后，PC組游泳不動(dòng)時(shí)間(155.11 s)顯著下降，游泳總距離顯著增加(12.25 m)。而MC組小鼠游泳不動(dòng)時(shí)間最長(zhǎng)(260.08 s)和游泳總距離最短(4.06 m)。VG(193.56 s)和VBPSH(186.06 s)組小鼠游泳不動(dòng)時(shí)間與NC(186.17 s)組小鼠相比沒(méi)有(P>0.05)顯著差異。PC和VBPS(H、M和L)組小鼠游泳不動(dòng)時(shí)間顯著低于(P<0.05)和游泳總距離顯著高于(P<0.05)MC組小鼠。PC(157.29 s)組小鼠游泳不動(dòng)時(shí)間顯著(P<0.05)低于和游泳總距離顯著高于(P<0.05)VBPS各處理組小鼠。綜上所述，鹽酸氟西汀和VBPS均可顯著改善了焦慮性抑郁癥小鼠的抑郁樣行為，鹽酸氟西汀的效果優(yōu)于VBPS。

表1 VBPS對(duì)強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中小鼠行為的影響?

? 同列字母不同表示差異顯著(P<0.05)。

2.3 VBPS配方對(duì)焦慮性抑郁癥小鼠焦慮樣行為的影響

在給藥4周后，不同處理組小鼠在開(kāi)臂停留時(shí)間百分比和開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)百分比之間存在顯著差異(P<0.05)，結(jié)果如圖2所示。NC和VG組小鼠在高架十字迷宮試驗(yàn)中的開(kāi)臂停留時(shí)間百分比均顯著高于各供試品治療組，MC組小鼠開(kāi)臂停留時(shí)間百分比顯著低于(P<0.05)其他組小鼠；PC和VBPSH處理組小鼠的開(kāi)臂停留時(shí)間百分比顯著(P<0.05)高于VBPSM和VBPSL處理組小鼠。NC和VG組小鼠再曠場(chǎng)試驗(yàn)中的中央停留時(shí)間百分比仍然明顯高于(P<0.05)其他處理組小鼠。MC組小鼠試驗(yàn)結(jié)果表明，中央停留時(shí)間百分比明顯低于(P<0.05)其他處理組小鼠。然而，在PC處理組小鼠和VBPS(H、M、L)處理組小鼠中央停留時(shí)間百分比與MC組小鼠相比顯著增加(P<0.05)。

在高架十字迷宮測(cè)試中，運(yùn)動(dòng)軌跡和進(jìn)入開(kāi)臂的最大深度表明NC小鼠沒(méi)有表現(xiàn)出類(lèi)似焦慮的行為(圖3)。在MC小鼠中，觀察到在閉臂中的運(yùn)動(dòng)較少且在開(kāi)臂中基本沒(méi)有運(yùn)動(dòng)，并且觀察到停留在閉臂的角落里，表現(xiàn)出明顯的焦慮樣行為。結(jié)果表明，PC和VBPS可在4周治療后緩解焦慮性抑郁癥小鼠的焦慮樣行為。圖4顯示了在曠場(chǎng)試驗(yàn)中給藥4周后每組的總運(yùn)動(dòng)軌跡(10 min 內(nèi))。MC小鼠大多遠(yuǎn)離中心(在邊緣和角落周?chē)?，然而，PC和VBPS(H、M和L)運(yùn)動(dòng)軌跡顯著(P<0.05)增加。因此，結(jié)果表明VBPS在減輕小鼠焦慮樣行為方面更有效。

圖2 VBPS對(duì)焦慮性抑郁癥小鼠焦慮樣行為的影響

Figure 2 The effects of VBPS on anxious-like behaviors in the anxious depression mice

圖3 VBPS對(duì)焦慮性抑郁癥小鼠高架十字迷宮試驗(yàn)運(yùn)動(dòng)軌跡的影響

2.4 VBPS配方對(duì)焦慮性抑郁癥小鼠血清炎癥因子水平的影響

VBPS對(duì)焦慮性抑郁癥小鼠炎癥因子的影響如表2所示。與其他組相比，MC小鼠血清炎癥因子(TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-γ)水平顯著(P<0.05)高于其他各組。各組小鼠TNF-α水平按照依次降低的順序?yàn)镸C>VBPSM>VBPSL>VBPSH>PC>NC>VG。檢測(cè)到各組小鼠IL-6的水平按照依次降低的順序?yàn)镸C>VBPSL>VBPSM>VBPSH>PC>VG>NC。各組小鼠IL-1β的水平依次遞減順序?yàn)镸C>VBPSM>VBPSL>VBPSH>PC>VG>NC。各組小鼠IFN-γ水平水平按照依次降低的順序?yàn)镸C>VBPSL>VBPSM>VBPSL>VG>PC>NC。血清IL-6和TNF-α升高被認(rèn)為是焦慮性抑郁癥的標(biāo)志物，IL-6的增加也被提出可以作為焦慮、抑郁癥加強(qiáng)的預(yù)測(cè)，IL-6水平正?；徽J(rèn)為是焦慮和抑郁的緩解癥狀[21-23]。PC和VBPS(H、M和L)組小鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-γ水平均顯著高于(P<0.05)NC組小鼠，PC和VBPS(H、M和L)組小鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-γ的水平顯著低于(P<0.05)MC組小鼠。血清TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-γ水平越高說(shuō)明炎癥反應(yīng)越強(qiáng)。以上結(jié)果表明，MC組小鼠血清炎癥水平較高，通過(guò)VBPS灌胃4周后，焦慮性抑郁癥小鼠血清炎癥水平與模型組相比均有顯著下降(P<0.05)，證明其體內(nèi)炎癥反應(yīng)減輕，焦慮性抑郁癥得到改善。因此，VBPS可能是焦慮性抑郁癥小鼠的有效抗焦慮、抑郁膳食補(bǔ)充劑，并且其作用機(jī)理可能部分通過(guò)抗炎作用介導(dǎo)。

圖4 VBPS對(duì)焦慮性抑郁癥小鼠曠場(chǎng)試驗(yàn)運(yùn)動(dòng)軌跡的影響

2.5 VBPS配方對(duì)焦慮性抑郁癥小鼠海馬和下丘腦抗氧化能力的影響

研究[24]表明，大腦更容易受到氧化應(yīng)激的不利影響。焦慮性抑郁癥與ROS和RNS升高有關(guān)；此外，ROS和RNS的升高導(dǎo)致MDA增加(由氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞膜損傷引起的體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的決定性標(biāo)志)和抗氧化酶活性增加[25-26]。如表3所示，慢性束縛應(yīng)激聯(lián)合皮質(zhì)酮背部皮下注射誘導(dǎo)的焦慮性抑郁癥小鼠的海馬和下丘腦中的MDA水平升高，SOD、CAT、NOS活性增加。NC、VG、PC和VBPS處理組小鼠海馬和下丘腦的MDA濃度顯著降低(P<0.05)于MC組小鼠。NC、VG、PC和VBPS處理組小鼠的SOD、CAT、NOS活性也顯著降低，與MC組相比有顯著差異(P<0.05)。與NC組小鼠相比，PC和VBPS處理組小鼠海馬和下丘腦中的MDA水平和SOD、CAT、NOS活性顯示出顯著增加(P<0.05)。綜上所述，VBPS改善海馬和下丘腦組織MDA水平和SOD、CAT、NOS活性與PC具有相同趨勢(shì)。MDA、SOD、CAT、NOS在參與神經(jīng)變性的腦神經(jīng)元中表達(dá)增加，其活性增加可能反映了焦慮性抑郁癥的癥狀增加，系統(tǒng)上調(diào)以抵抗焦慮性抑郁中ROS和RNS的增加[25]。試驗(yàn)結(jié)果表明VBPS能夠有效地降低焦慮性抑郁癥小鼠海馬和下丘腦組織中MDA水平和SOD、CAT、NOS活性，緩解焦慮性抑郁癥小鼠的氧化應(yīng)激損傷。

表2 VBPS對(duì)焦慮性抑郁癥小鼠炎癥因子水平的影響?

? 同列字母不同表示差異顯著(P<0.05)。

表3 VBPS對(duì)MDA含量和抗氧化酶活性的影響?

? 同列字母不同表示差異顯著(P<0.05)。

2.6 VBPS配方對(duì)焦慮性抑郁癥小鼠海馬組織TRP代謝的影響

如圖5所示，MC組小鼠的5-HT/Trp和NAD+/KYN比值在海馬組織中均顯著(P<0.05)低于其余各組，而KYN/TRP比值顯著高于(P<0.05)其余各組。5-HT/Trp比值分析可知，PC組與NC組小鼠之間沒(méi)有顯著差異，但是VBPS灌胃治療組顯著低于(P<0.05)PC和NC組小鼠。PC、VBPSH和VBPSM組小鼠KYN/TRP比值之間沒(méi)有顯著差異，PC和VBPSH組小鼠之間NAD+/KYN比值沒(méi)有顯著差異。綜上所述，VBPS能夠提高5-HT/Trp和NAD+/KYN值，降低KYN/TRP的比值，且具有劑量依賴(lài)性增加的趨勢(shì)。VBPS可能通過(guò)降低炎癥因子水平或增加氧化應(yīng)激降低犬尿氨酸代謝途徑的關(guān)鍵限速酶IDO和TDO酶活性，上調(diào)5-HT-TRP代謝，下調(diào)TRP-KYN代謝。通過(guò)膳食補(bǔ)充KYN-NAD+途徑輔酶因子維生素B6和NAD+合成的前體物質(zhì)維生素B3，增加NAD+的合成。

圖5 VBPS對(duì)焦慮性抑郁癥小鼠TRP代謝的影響

3 結(jié)論

試驗(yàn)以維生素B族復(fù)合TRP肽和SOD配方(VBPS)作為膳食補(bǔ)充劑，研究VBPS對(duì)焦慮性抑郁癥小鼠改善作用。結(jié)果表明VBPS能夠逆轉(zhuǎn)焦慮性抑郁癥小鼠的焦慮樣和抑郁樣行為、改善其體重增加緩慢的癥狀，具有劑量依賴(lài)性增加的趨勢(shì)。VBPS能夠降低血清NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-γ水平和MDA的含量，增加SOD、CAT和NOS的活性。此外，VBPS可誘導(dǎo)TRP-KYN代謝下調(diào)和5-HT/TRP、KYN-NAD+代謝上調(diào)。其作用的可能機(jī)制為VBPS通過(guò)降低炎癥因子水平和增加抗氧化作用降低KYN代謝途徑的關(guān)鍵限速酶IDO和TDO活性，上調(diào)5-HT-TRP代謝，下調(diào)TRP-KYN代謝。通過(guò)膳食補(bǔ)充KYN-NAD+途徑輔酶因子維生素B6和NAD+合成的前體物質(zhì)維生素B3，增加NAD+的合成。綜上所述，與焦慮性抑郁癥對(duì)照組小鼠相比，VBPS治療的小鼠具有抗炎、抗氧化、逆轉(zhuǎn)焦慮性抑郁癥小鼠行為障礙和體重增加緩慢的作用，從而證明膳食補(bǔ)充VBPS具有顯著的改善焦慮性抑郁癥的作用。