二氫丹參酮I在胃癌AGS細(xì)胞中作用機(jī)制的生物信息學(xué)分析

梁春艷

四川省涼山彝族自治州攀鋼西昌醫(yī)院普通外科(四川 615000)

近年來(lái)，關(guān)于二氫丹參酮Ⅰ與惡性腫瘤的研究文獻(xiàn)報(bào)道越來(lái)越多，涉及的惡性腫瘤有胃癌[1]、結(jié)直腸癌[2- 4]、乳腺癌[5]、宮頸癌[6]、骨肉瘤[7]、白血病[8]、等等，也有癌腫瘤細(xì)胞移植瘤體外模型實(shí)驗(yàn)研究[7-10]。從報(bào)道的文獻(xiàn)來(lái)分析，二氫丹參酮Ⅰ抗腫瘤活性存在很多可能的通路以及機(jī)制：活化JNK/P38通路[1]、阻斷tnf-α誘導(dǎo)的nf-kappab信號(hào)通路[11]等、抑制癌細(xì)胞增殖[9]、誘導(dǎo)癌細(xì)胞周期阻滯[12]、抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲[7]、誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡[9，13]等。

前期我們的細(xì)胞試驗(yàn)研究表明，二氫丹參酮Ⅰ通過(guò)活性氧介導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)誘導(dǎo)胃癌AGS 細(xì)胞凋亡[14]。這僅僅是細(xì)胞學(xué)上觀察到的現(xiàn)象。二氫丹參酮Ⅰ抗胃癌潛在機(jī)制尚未完全清晰?；诖四康?，本研究嘗試運(yùn)用GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)，提供包括TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)和GTEx數(shù)據(jù)庫(kù)的功能，探索性地研究二氫丹參酮Ⅰ通過(guò)氧化應(yīng)激作用胃癌可能潛在靶點(diǎn)：潛在靶點(diǎn)與抗氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)性分析、該潛在靶點(diǎn)在胃癌患者差異表達(dá)分析以及其生存分析，包括總生存率(OS)和無(wú)瘤生存率(DFS)。尋找二氫丹參酮Ⅰ通過(guò)氧化應(yīng)激反應(yīng)作用于胃癌候選潛在藥物靶點(diǎn)，為診斷和識(shí)別胃癌、治療胃癌提供生物標(biāo)志物鋪下基礎(chǔ)理論。

1 資料與方法

1.1 在數(shù)據(jù)庫(kù)檢索二氫丹參酮Ⅰ作用胃癌AGS細(xì)胞潛在靶點(diǎn)研究的文獻(xiàn)

在PubMed、中國(guó)知網(wǎng)(CNKI)等數(shù)據(jù)庫(kù)(2019年3月12日前)中進(jìn)行檢索，以查詢所有公開(kāi)已發(fā)表的研究二氫丹參酮Ⅰ作用于胃癌靶點(diǎn)的文獻(xiàn)。使用檢索詞“gastric cancer”、“gastric neoplasms”、“malignant tumors of stomach”、“dihydrotanshinone”、“dihydrotanshinoneⅠ”、“DHTS”、“DHT”、“dht”、“dhts”、“DI”，中文使用“胃癌”、“胃腫瘤”、“胃惡性腫瘤”、“胃腫瘤惡變”，以及“丹參酮”、“二氫丹參酮”、“二氫丹參酮Ⅰ”“丹參”，進(jìn)行檢索。

從檢索結(jié)果的文獻(xiàn)題目中初步篩選符合二氫丹參酮作用胃癌潛在靶點(diǎn)的文獻(xiàn)，然后閱讀文獻(xiàn)摘要以及全文，決定選取的文獻(xiàn)。根據(jù)文獻(xiàn)內(nèi)容，仔細(xì)深入判讀二氫丹參酮作用胃癌靶點(diǎn)是上游的靶點(diǎn)還是下游的靶點(diǎn)。如果不能正確做出抉擇時(shí)，翻閱專(zhuān)業(yè)文獻(xiàn)研究結(jié)果以及請(qǐng)生物化學(xué)等相關(guān)專(zhuān)業(yè)教授學(xué)者協(xié)助做出取舍。

1.2 GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)工具分析二氫丹參酮Ⅰ作用胃癌AGS細(xì)胞潛在機(jī)制

Gene Expression Profiling Interactive Analysis數(shù)據(jù)庫(kù)(簡(jiǎn)稱(chēng)GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù))，中文一般稱(chēng)該數(shù)據(jù)庫(kù)為癌癥和正常基因表達(dá)分析和交互分析網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)，包含9 736腫瘤和8 587例正常樣本的TCGA和GTEX的數(shù)據(jù)，用以分析RNA序列表達(dá)。

1.2.1 潛在靶點(diǎn)基因和表達(dá)抗氧化應(yīng)激關(guān)鍵蛋白的基因的相關(guān)性分析

根據(jù)檢索文獻(xiàn)報(bào)道二氫丹參酮Ⅰ作用胃癌所有靶點(diǎn)，并在PubMed數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed)檢索這些靶點(diǎn)蛋白對(duì)應(yīng)的人基因。文獻(xiàn)檢索抗氧化應(yīng)激關(guān)鍵基因。在文獻(xiàn)檢索抑制氧化應(yīng)激的重要調(diào)節(jié)蛋白，然后將此蛋白在PubMed數(shù)據(jù)庫(kù)檢索該蛋白對(duì)應(yīng)的基因。在GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)中輸入基因，查找該基因的簡(jiǎn)要描述，再次確定該基因是調(diào)節(jié)抗氧化應(yīng)激關(guān)鍵基因。

將檢索的這些靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)的人基因在GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行分析這些潛在靶點(diǎn)基因和表達(dá)抗氧化應(yīng)激關(guān)鍵蛋白(超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、轉(zhuǎn)錄因子Nrf- 2)的基因的相關(guān)性分析。

在基因相關(guān)性分析功能中，以二氫丹參酮Ⅰ作用胃癌潛在靶點(diǎn)基因?yàn)闄M坐標(biāo)，抗氧化應(yīng)激關(guān)鍵基因?yàn)榭v坐標(biāo)，分別輸入待檢測(cè)基因相關(guān)性的兩個(gè)基因。相關(guān)系數(shù)選擇Pearson，選擇TCGA Tumor數(shù)據(jù)庫(kù)中的STAD Tumor。然后點(diǎn)擊得出其相關(guān)性關(guān)系的結(jié)果。采用Pearson方法確定相關(guān)系數(shù)。相關(guān)強(qiáng)度為使用以下絕對(duì)值指南確定：0.00～0.19“非常弱”，0.20～0.39“弱”，0.40～0.59“中等”0.60～0.79“強(qiáng)”，0.80～1.0“非常強(qiáng)”，P值<0.05，被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2.2 二氫丹參酮Ⅰ作用胃癌潛在靶點(diǎn)基因在胃癌患者的表達(dá)水平分析

通過(guò)Pearson相關(guān)性和統(tǒng)計(jì)顯著性評(píng)估二氫丹參酮Ⅰ作用胃癌潛在靶點(diǎn)在胃癌患者的基因表達(dá)分析。 在GEPIA數(shù)據(jù)Express DIY中選擇Boxplot(當(dāng)然也可以選擇Profile或者Stage plot等)，在基因框內(nèi)輸入潛在靶點(diǎn)基因，|Log2 FC|Cutoff選擇“1”，P值選擇“0.01”，選擇紅色為潛在靶點(diǎn)基因在腫瘤中表達(dá)，藍(lán)色為潛在靶點(diǎn)基因在正常組織中表達(dá)。數(shù)據(jù)庫(kù)設(shè)置選擇“STAD”， Log Scale選擇“Yes”， Jitter Size選擇“0.4”，選擇匹配TCGA和GTEx數(shù)據(jù)庫(kù)，最后點(diǎn)擊，得出分析結(jié)果。

1.2.3 二氫丹參酮Ⅰ作用胃癌潛在靶點(diǎn)基因在胃癌患者的預(yù)后分析

用Prognoscan和Kaplanmeier圖生成生存曲線。在GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)Surnival中選“Surnival Plot”，在基因框內(nèi)輸入二氫丹參酮Ⅰ作用胃癌潛在靶點(diǎn)基因，方法選擇“Overall Survival”，選擇最佳Cutoff-High(%)，Hazards Ratio(HR)選擇“Yes”， 95% Confidence Interval選擇“Yes”， Axis Units選擇“Months”。 二氫丹參酮Ⅰ作用胃癌潛在靶點(diǎn)基因在胃癌患者高表達(dá)選擇紅色，低表達(dá)選擇藍(lán)色。數(shù)據(jù)庫(kù)設(shè)置選擇“STAD”，最后得出生存曲線圖。運(yùn)用同樣的方法得出無(wú)瘤生存曲線圖。

2 結(jié) 果

2.1 在數(shù)據(jù)庫(kù)檢索二氫丹參酮作用胃癌AGS細(xì)胞靶點(diǎn)研究的文獻(xiàn)

從PubMed、CNKI等數(shù)據(jù)庫(kù)檢索二氫丹參酮Ⅰ作用腫瘤靶點(diǎn)基因的文獻(xiàn)，一共76篇。經(jīng)過(guò)閱讀題目、摘要以及全文后篩選符合檢索條件的文獻(xiàn)。結(jié)果如下。見(jiàn)表1。

表1二氫丹參酮Ⅰ作用腫瘤靶點(diǎn)基因的文獻(xiàn)表

從表1可以得知，關(guān)于二氫丹參酮Ⅰ作用胃癌靶點(diǎn)，報(bào)道二氫丹參酮與胃癌相關(guān)研究的文獻(xiàn)有2篇。在這些腫瘤的文獻(xiàn)中，二氫丹參酮作用于腫瘤的主要作用的靶向基因(蛋白)為缺氧誘導(dǎo)因子-1(hif-1)和瓜氨酸組蛋白H3(CITH3)，分別對(duì)應(yīng)的基因是HIF1A和NOS2。

2.2 二氫丹參酮Ⅰ的作用靶點(diǎn)與抗氧化應(yīng)激關(guān)鍵基因的關(guān)系

表達(dá)抗氧化應(yīng)激關(guān)鍵蛋白酶(超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、轉(zhuǎn)錄因子Nrf- 2)的基因分別是：SOD1、CAT、GPX1、NFE2L2。

在GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)中分別檢索HIF1 A和NOS2基因和表達(dá)抗氧化應(yīng)激關(guān)鍵基因SOD1、CAT、GPX1、NFE2L2之間相關(guān)關(guān)系。

2.2.1 HIF1A和SOD1、CAT、GPX1、NFE2L2相關(guān)關(guān)系

GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)顯示HIF1A和SOD1相關(guān)性P=0.28，R=0.054，由于P=0.28，大于0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即是HIF1A和SOD1無(wú)明顯相關(guān)性，見(jiàn)圖1A；HIF1A和CAT相關(guān)性P<0.001，R=0.18，由于P<0.001，小于0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即是HIF1A和CAT有正相關(guān)關(guān)系，見(jiàn)圖1B；HIF1A和GPX1相關(guān)性P=0.033，R=0.11，由于P=0.033，小于0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即是HIF1A和GPX1有正相關(guān)關(guān)系，見(jiàn)圖1C；HIF1A和NFE2L2相關(guān)性P<0.001，R=0.41，由于P<0.001，小于0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即是HIF1A和NFE2L2有正相關(guān)關(guān)系，見(jiàn)圖1D。

2.2.2 NOS2和SOD1、CAT、GPX1、NFE2L2相關(guān)關(guān)系

GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)顯示NOS2和SOD1相關(guān)性P<0.001，R=0.18，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即是NOS2和SOD1具有正相關(guān)性，見(jiàn)圖2A；NOS2和CAT相關(guān)性P=0.99，R=- 0.67，由于P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即是NOS2和CAT無(wú)相關(guān)關(guān)系，見(jiàn)圖2B；NOS2和GPX1相關(guān)性P=0.17，R=- 0.068，由于P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即是NOS2和GPX1無(wú)正相關(guān)關(guān)系，見(jiàn)圖2C；NOS2和NFE2L2相關(guān)性P=0.37，R=- 0.045，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即是NOS2和NFE2L2無(wú)相關(guān)關(guān)系，見(jiàn)圖2D。

圖1 HIF1A和SOD1、CAT、GPX1、NFE2L1的相關(guān)關(guān)系

圖2 NOS2和SOD1、CAT、GPX1、NFE2L2相關(guān)關(guān)系

2.3 二氫丹參酮Ⅰ的作用潛在靶點(diǎn)在胃癌患者的表達(dá)水平

HIF1A和NOS2在胃癌患者高表達(dá)(白色)。

圖3 HIF1A和NOS2在胃癌患者中的表達(dá)

這個(gè)是HIF1A和NOS2在胃癌的表達(dá)水平，HIF1A和NOS2在胃癌中表達(dá)顯著增高(白色)，灰色表示HIF1A和NOS2在胃癌癌旁組織中低表達(dá)。見(jiàn)圖3。

2.4 二氫丹參酮Ⅰ潛在靶點(diǎn)對(duì)胃癌患者預(yù)后的影響

HIF1 A和NOS2在胃癌患者預(yù)后的影響。HIF1A高表達(dá)，胃癌患者的總體生存率(Overall Survival)下降，相反，HIF1A低表達(dá)，胃癌患者的總體生存率(overall survival)提升，P=0.017，P<0.05，HR(high)=0.5；HIF1A低表達(dá)，胃癌患者的無(wú)瘤生存率(Disease Free Survival)視乎高于HIF1A高表達(dá)的胃癌患者，但是由于P=0.057，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)圖4A、B。同理，NOS2高表達(dá)或者低表達(dá)，其在胃癌患者的總體生存率和無(wú)瘤生存率都是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P值分別為0.21、0.18(見(jiàn)圖4C和D)。

3 討 論

氧化代謝已經(jīng)是機(jī)體細(xì)胞物質(zhì)代謝和能量代謝重要途徑之一。氧化應(yīng)激伴隨著自由基的產(chǎn)生。在機(jī)體細(xì)胞中產(chǎn)生活性氧(ROS)，包括超氧化物和過(guò)氧化氫等，用于信號(hào)傳遞，作為免疫反應(yīng)的效應(yīng)器，以及作為細(xì)胞代謝的副產(chǎn)物[17]。目前相當(dāng)一部分的網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)被用作科學(xué)研究是有價(jià)值的。Gene Expression Profiling Interactive Analysis數(shù)據(jù)庫(kù)(簡(jiǎn)稱(chēng)GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù))(http://gepia.cancer-pku.cn/index.html)，包括癌癥基因組圖譜(TCGA數(shù)據(jù)庫(kù))和基因型組織表達(dá)(GTEx數(shù)據(jù)庫(kù))產(chǎn)生數(shù)以萬(wàn)計(jì)份癌癥和非癌癥樣本RNA測(cè)序數(shù)據(jù)，為包括癌癥生物學(xué)在內(nèi)的許多相關(guān)研究領(lǐng)域提供了前所未有的機(jī)遇。到目前為止，除了726個(gè)癌旁組織數(shù)據(jù)之外，TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)已經(jīng)產(chǎn)生33種癌癥類(lèi)型9 736個(gè)腫瘤樣本數(shù)據(jù)。

圖4 HIF1和NOS2在胃癌患者預(yù)后的影響

細(xì)胞凋亡被學(xué)者們定義為是程序性細(xì)胞死亡(PCD)的過(guò)程。細(xì)胞凋亡是一種基因調(diào)控現(xiàn)象。在高倍顯微鏡和電鏡下發(fā)現(xiàn)它引起細(xì)胞形態(tài)學(xué)方面的改變、出血、核碎裂、細(xì)胞收縮、染色質(zhì)凝聚、染色體DNA碎裂和整體mRNA衰變[18- 20]。

缺氧誘導(dǎo)因子-1(hif-1)，它的基因名為HIF1A。缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1)是一種二聚體轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，是細(xì)胞對(duì)低氧(缺氧)反應(yīng)適應(yīng)過(guò)程中的一個(gè)重要調(diào)節(jié)因子，主要因其在維持氧和能量均一性中的作用而被認(rèn)識(shí)[21]。由于細(xì)胞增殖率高，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，以及新血管生成機(jī)制，腫瘤中常發(fā)生缺氧供血不足，缺氧是腫瘤環(huán)境中常見(jiàn)的一種情況[22]。低氧微環(huán)境有利于腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，對(duì)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展起作用。本項(xiàng)目以及本部分文獻(xiàn)綜述表明，二氫丹參酮Ⅰ作用胃癌細(xì)胞，產(chǎn)生活性氧介導(dǎo)氧化應(yīng)激，抑制HIF-1的表達(dá)，而文獻(xiàn)報(bào)道低氧環(huán)境促進(jìn)HIF-1的高表達(dá)出現(xiàn)腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移[23- 26]。因此，我們認(rèn)為，二氫丹參酮作用胃癌細(xì)胞，產(chǎn)生活性氧介導(dǎo)氧化應(yīng)激，抑制HIF-1的表達(dá)，從而抑制胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡。

抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)主要包括超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPX)[27]以及轉(zhuǎn)錄因子Nrf- 2[28- 29]。

超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD，基因名SOD1)自1968年發(fā)現(xiàn)SOD以來(lái)，已被證明具有重要的生物學(xué)意義，超氧化物歧化酶(SODS)是保護(hù)細(xì)胞免受活性氧(ROS)侵害的必要的抗氧化酶。超氧化物歧化酶在體內(nèi)可以直接清除氧化反應(yīng)產(chǎn)生過(guò)多的自由基，保護(hù)細(xì)胞膜免受活性氧的過(guò)氧化作用導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化，從而維護(hù)細(xì)胞膜的生理功能。在本部分GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)研究里，HIF1A和SOD1相關(guān)關(guān)系圖，P=0.28，R=0.054，HIF1A和SOD1無(wú)相關(guān)性。即是說(shuō)，丹參酮干預(yù)后胃癌后可導(dǎo)致HIF1A低表達(dá)，可能不是通過(guò)潛在降低SOD1的活性減少胃癌的抗氧化應(yīng)激，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，可能存在其他潛在靶點(diǎn)機(jī)制。

過(guò)氧化氫酶(Catalase，CAT，基因名cat) 包含四個(gè)相同的62 kda亞單位，每個(gè)亞單位包含四個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域和一個(gè)假體血紅素基團(tuán)。過(guò)氧化氫酶的主要生理作用是抗氧化物，催化過(guò)氧化氫轉(zhuǎn)化為水和氧這一系列生化反應(yīng)，屬于抗氧化劑。在酶促反應(yīng)導(dǎo)致H2O2共價(jià)鍵斷裂的過(guò)程中，過(guò)氧化氫酶首先被氧化成一種高價(jià)鐵中間物的化合物I(CPD I)，然后被第二個(gè)H2O2分子還原回靜止?fàn)顟B(tài)。過(guò)氧化氫酶不直接清除氧自由基，主要清除體內(nèi)細(xì)胞氧化反應(yīng)產(chǎn)生的過(guò)氧化氫，緩解或者避免細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化作用，從而維持細(xì)胞膜正常的生理功能，使得機(jī)體細(xì)胞達(dá)到氧化還原反應(yīng)的動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)得以保持。由于過(guò)氧化氫酶該酶雖不直接清除自由基,但可降低自由基，因此其可能介導(dǎo)了胃癌的抗氧化應(yīng)激效果。HIF1A與它表達(dá)呈正相關(guān)。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，丹參酮干預(yù)后胃癌后可導(dǎo)致HIF1A低表達(dá)，因此，也潛在地減少了CAT的表達(dá)水平，減少了胃癌的氧化應(yīng)激耐受，促進(jìn)了胃癌的氧化應(yīng)激凋亡。

谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathione peroxidases，GPxs，基因名GPX1)其生物化學(xué)和生理功能發(fā)揮是以還原型谷胱甘肽為底物清除氧化反應(yīng)生成過(guò)多的過(guò)氧化物，例如減少自由基生成、清除過(guò)多的自由基、過(guò)氧化氫以及羥自由基等。還原型谷胱甘肽是機(jī)體內(nèi)細(xì)胞主要的活性形式存在。其抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)主要表現(xiàn)在兩方面的調(diào)控：一是調(diào)控谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的含量，二是調(diào)控谷胱甘肽還原酶的含量。較早以前研究發(fā)現(xiàn)[30]，細(xì)胞谷胱甘肽(GSH)早期下降，隨后活性氧(ROS)生成增加，在沒(méi)有任何外部凋亡刺激的情況下，誘導(dǎo)多種凋亡信號(hào)(在不同時(shí)間點(diǎn)例如24 h、48 h、72 h均可檢測(cè)到)，當(dāng)線粒體谷胱甘肽耗盡時(shí)，ROS產(chǎn)生增加內(nèi)發(fā)生不可逆的凋亡，這表明降低谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的含量可以潛在地誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。二氫丹參酮Ⅰ作用胃癌細(xì)胞，以活性氧為介導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)抑制HIF1A，致HIF1A低表達(dá)，且HIF1A與GPX1表達(dá)呈正相關(guān)。因此，也潛在地減少了谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的表達(dá)水平，減少了胃癌的抗氧化應(yīng)激作用，促進(jìn)了胃癌的氧化應(yīng)激凋亡，即促進(jìn)了誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡。

轉(zhuǎn)錄因子Nrf- 2，它的基因名是NFE2L2。1996年Venugopal R第一次提出轉(zhuǎn)錄因子Nrf- 2的抗氧化作用[31]。轉(zhuǎn)錄因子Nrf- 2的抗氧化機(jī)制大概如下[32]：轉(zhuǎn)錄因子Nrf- 2在胞漿內(nèi)與Keap1(Kelch樣ech相關(guān)蛋白1)結(jié)合成二聯(lián)體，此二聯(lián)體在活性氧親電子劑的作用下解離成轉(zhuǎn)錄因子Nrf- 2和Keap1(Kelch樣ech相關(guān)蛋白1)，然后轉(zhuǎn)錄因子Nrf- 2轉(zhuǎn)入細(xì)胞核，在核內(nèi)與Maf(亮氨酸的一種拉鏈蛋白)結(jié)合，作用在核酸5′-TGACnnnGCA- 3′，啟動(dòng)相關(guān)抗氧化應(yīng)激基因表達(dá)，相關(guān)抗氧化應(yīng)激酶高活性或者高表達(dá)，從而清除活性氧等氧自由基等，達(dá)到抗氧化應(yīng)激目的。從本研究結(jié)果來(lái)看，二氫丹參酮Ⅰ作用胃癌細(xì)胞，以活性氧為介導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)抑制HIF1A，致HIF1A低表達(dá)，根據(jù)GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)結(jié)果得知，HIF1A與轉(zhuǎn)錄因子Nrf- 2表達(dá)呈正相關(guān)，即是低表達(dá)的HIF1A也可能潛在地抑制轉(zhuǎn)錄因子Nrf- 2對(duì)胃癌的抗氧化應(yīng)激作用，促進(jìn)了胃癌的氧化應(yīng)激凋亡。

HIF1A的表達(dá)結(jié)果表明它在胃癌中表達(dá)增高(白色)，而在胃癌癌旁組織中HIF1A呈現(xiàn)低表達(dá)(灰色)。預(yù)后分析HIF1A高表達(dá)，胃癌患者的總生存率降低，P=0.017，表明HIFA1確實(shí)在胃癌中高表達(dá)，而高表達(dá)后胃癌患者的總體生存率(Overall Survival)下降。因此，對(duì)胃癌中采用二氫丹參酮Ⅰ干預(yù)的潛在機(jī)制：二氫丹參酮Ⅰ干預(yù)可能下降HIFA的表達(dá)水平，具有潛在性通過(guò)調(diào)控了CAT、GPX1、NFE2L2的表達(dá)水平；二氫丹參酮Ⅰ干預(yù)可能下降NOS2的表達(dá)水平，具有潛在性通過(guò)調(diào)控了SOD1的表達(dá)水平；從而減少胃癌細(xì)胞的抗氧化應(yīng)激潛力，促進(jìn)腫瘤氧化應(yīng)激凋亡，且HIFA的高表達(dá)顯著影響了胃癌患者的預(yù)后。因此，采用二氫丹參酮Ⅰ可能有望改善患者的預(yù)后，在胃癌的進(jìn)一步應(yīng)用中具有良好的臨床前景。