人TERT基因啟動子區(qū)生物信息學(xué)分析*

夏得淳，雷子賢，趙娟，李婷婷，趙娟，康曉靜

832000 新疆 石河子，石河子大學(xué) 醫(yī)學(xué)院(夏得淳)；830001 烏魯木齊，新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院 皮膚性病科(雷子賢、趙娟、李婷婷、趙娟、康曉靜)

端粒酶是一種由催化亞基、端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)和RNA組分(telomerase RNA component,TERC)組成的核糖核蛋白復(fù)合物，通過維持端粒穩(wěn)態(tài)和染色體完整性而發(fā)揮作用。TERT基因編碼端粒酶的限速催化亞單位，可維持基因組的完整性。除了生殖干細(xì)胞和造血干細(xì)胞外，人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因在人體正常細(xì)胞中不表達(dá)，但在腫瘤組織中高表達(dá)[1]。有研究表明，hTERT基因參與多種腫瘤的進(jìn)展，在80%～90%的惡性腫瘤中均可檢測上調(diào)的hTERT基因，其啟動子區(qū)突變與腫瘤的增殖和侵襲也有密切的聯(lián)系[2]。除調(diào)控端粒酶轉(zhuǎn)錄活性之外，TERT基因也可通過與P65、β-catenin等轉(zhuǎn)錄因子相互作用等方式調(diào)控除端粒酶之外的其他相關(guān)基因的表達(dá)，并可調(diào)控核轉(zhuǎn)錄因子 (nuclear transcription factor-κB, NF-κB)信號通路和canonical Wnt/β-catenin pathway通路中的某些基因轉(zhuǎn)錄程序[3]。然而目前對于hTERT基因自身的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制尚未完全清楚，進(jìn)一步研究其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制可為hTERT基因在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用提供思路。本研究利用生物信息學(xué)分析的方法，使用不同的生物信息學(xué)軟件對hTERT基因序列及其啟動子區(qū)進(jìn)行分析，預(yù)測hTERT基因啟動子區(qū)CpG島的位置以及轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點，旨在為hTERT基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制及其生物學(xué)功能的探索提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 hTERT基因組及其啟動子區(qū)序列

hTERT基因Gene ID為7015，定位于5號染色體短臂(5p15.33),基因全長41 881 bp。hTERT基因啟動子區(qū)genbank編碼：AF098956.1，長度為2 043 bp。

1.2 數(shù)據(jù)庫和程序

美國國立生物信息中心數(shù)據(jù)庫(National Center for Biotechnology Information,NCBI)：(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/)。CpG島預(yù)測軟件：EMBOSS 6.6.0(https://www.ebi.ac.uk/Tools/emboss/)，CpG finder 1.0(http://linux1.softberry.com/berry.phtml?topic=cpgfinder&group=programs& subgroup=promoter)，MethPrimer 1.0(http://www.urogene.org/methprimer/)。轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點預(yù)測軟件：Patch 1.0(http://gene-regulation.com/cgi-bin/pub/programs/patch/bin/patch.cgi)，PROMO 3.0.2(http://alggen.lsi.upc.es/)。

1.3 方法

1.3.1hTERT基因序列及其啟動子序列的獲取 在NCBI數(shù)據(jù)庫中檢索hTERT基因，得到其基因ID為7015，采用FASTA格式對基因序列信息進(jìn)行儲存。在https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/?term數(shù)據(jù)庫中檢索hTERT基因及其啟動子序列，得到hTERT基因mRNA序列的登錄號為NM_198253.2，啟動子區(qū)序列g(shù)enbank號為：AF098956.1，長度共2 043bp，采用FASTA格式對啟動子區(qū)序列信息進(jìn)行儲存。

1.3.2hTERT基因啟動子區(qū)cpG島分析 將獲得的hTERT基因啟動子區(qū)序列分別上傳至EMBOSS 6.6.0，CpG finder 1.0，MethPrimer 1.0三個在線預(yù)測軟件中，按照默認(rèn)條件(CpG島最短長度200 bp，GC含量最低為50%，最小觀測值為0.6等)進(jìn)行預(yù)測分析。

1.3.3hTERT基因啟動子區(qū)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點預(yù)測 登錄gene-regulation網(wǎng)站后，將hTERT啟動子序列上傳至Patch 1.0預(yù)測軟件，設(shè)置參數(shù)為set of site選擇vertebrates，Lower score boundary設(shè)置為90，其余按默認(rèn)設(shè)置進(jìn)行檢索。PROMO 3.0.2在線軟件參數(shù)設(shè)置：“Selectspecies”中均選擇為“Only human factors”，“SearchSites”中“Maximum matrix dissimilarity rate”設(shè)為5%，將TERT啟動子序列上傳并進(jìn)行預(yù)測。

2 結(jié) 果

2.1 hTERT基因及其啟動子特征

hTERT基因在genbank中的登錄號為NC_000005.10，基因組序列全長為41 881 bp(chromosome 5: 1253167.. 1295047)，由15個內(nèi)含子和16個外顯子組成。其轉(zhuǎn)錄的mRNA全長4 018 bp，編碼1 132個氨基酸組成。hTERT基因啟動子區(qū)GC含量較高，無TATA盒和CAAT盒，啟動子區(qū)序列全長2 043 bp(chromosome 5: 1294667.. 1296709)，其核心啟動子區(qū)位于翻譯起始位點上游330 bp至第二外顯子37 bp內(nèi)。

2.2 hTERT基因CpG島預(yù)測

2.2.1 EMBOSS預(yù)測結(jié)果 使用EMBOSS 6.6.0在線預(yù)測軟件對啟動子區(qū)序列進(jìn)行預(yù)測，預(yù)測條件設(shè)定為觀察值/預(yù)期值>0.60，(G+C)%>50.00%，長度>200 bp。結(jié)果共發(fā)現(xiàn)兩個CpG島，第一個位于974～1 223 bp之間，長度為250 bp；第二個位于1 242～1 987 bp之間，長度為746 bp(圖1)。

2.2.2 CpG finder預(yù)測結(jié)果 按照上述預(yù)測標(biāo)準(zhǔn)使用CpG finder 1.0在線預(yù)測軟件對TERT基因啟動子序列進(jìn)行預(yù)測，共發(fā)現(xiàn)一個CpG島，位于1 353～1 965bp之間，CpG島的(G+C)=79.3%，觀察值/預(yù)期值=0.854，長度為613 bp(圖2)。

圖1 EMBOSS 6.6.0軟件預(yù)測的甲基化CpG島圖譜

Figure 1. Methylated-CpG Islands Predicted by EMBOSS 6.6.0

圖2 CpG finder 1.0軟件預(yù)測的甲基化CpG島圖譜

Figure 2. Methylated-CpG Islands Predicted by CpG Finder 1.0

2.2.3 MethPrimer預(yù)測結(jié)果 使用MethPrimer 1.0在線預(yù)測軟件在默認(rèn)條件下進(jìn)行檢索，結(jié)果共發(fā)現(xiàn)3個CpG島，第一個位于807～959 bp之間，長度為153 bp，第二個位于974～1 223 bp之間，長度為250 bp；第三個位于1 242～1 987 bp之間，長度為746 bp(圖3)。因CpG島的片段長度一般大于200 bp，故結(jié)果中長度為153 bp的CpG島不被納入。

綜合以上三種預(yù)測軟件分析，在相同的預(yù)測標(biāo)準(zhǔn)下，EMBOSS與MethPrimer的結(jié)果較為相似，預(yù)測出的部分CpG島位置相同，而CpG finder雖然只預(yù)測出了一個CpG島，但此CpG島所在的位置與其他兩種軟件所預(yù)測的基本一致。

2.3 hTERT基因轉(zhuǎn)錄因子及結(jié)合位點預(yù)測

2.3.1 Patch程序預(yù)測結(jié)果 利用Patch 1.0程序搜索TRANSFAC數(shù)據(jù)庫，共獲得1 769個轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(包括小鼠和人類)，經(jīng)篩選后共得到911個人類的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點，手工匯總?cè)ブ睾蠊驳玫?5個轉(zhuǎn)錄因子，主要包括AP-1、AP-2、CTCF、FOR1、GATA-1、P58、PXR-1、RAR-alpha1、Sp1、TCF-1A、TCF-4等(表1)。

圖3 MethPrimer 1.0軟件預(yù)測的甲基化CpG島圖譜

Figure 3. Methylated CpG Islands Predicted by MethPrimer 1.0

表1 Patch 1.0預(yù)測的95個轉(zhuǎn)錄因子

Table 1. 95 Transcription Factors Predicted by Patch 1.0

95 transcription factors predicted by Patch 1.0AML1, AML1a, AML1c, AP-1, mAP-2, AP-2alphaA, AP-4, ARP-1CAR, c-Ets-1, c-Ets-2, c-Fos, c-Jun, c-Myb, c-Myc, CNBP, CP1, CREB, Crx, CTCFE12, E2F, E2F+p107, E2F-1, ER-alpha, EZF-2FOR1, FOR2, FXRgammaCAC1, GATA-1, GR, GR-alphaH4TF-1, H4TF-2, HIF-1, HiNF-A, HiNF-C, HNF-1, HNF-1A, HNF-1B, HNF-3alpha, HNF-3B, hnRNP K, Hp55, Hp65ISGF-3, LEF-1, LF-A1, LUN-1, LXR-alphaMax, MAZ, Meis-2a,. Meis-2b, MTF-1, MZF-1NF-1/L, NFAT-1, NF-ATp, NF-E, NF-E3, NIPP58, Pax-2, Pax-5, Pax-8, Pbx-1a, Pbx-1b, PEA3, POU1F1a, PPUR, PXR-1RAR-alpha1, RXR-alphaSMAD-3, SMAD-4, Sp1, Sp2, Sp3, Sp4, SRYT3R, TBP, TCF-1A, TCF-4, TCF-4E, TFIID, TR2-11USF1, USF2VDRWT1YY1ZFX

2.3.2 PROMO預(yù)測結(jié)果 PROMO 3.0.2在線軟件使用TRANSFAC數(shù)據(jù)庫8.3版構(gòu)建特定的結(jié)合位點權(quán)重矩陣，共預(yù)測出302個轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點，手工篩選后共得到48個轉(zhuǎn)錄因子(表2)。與Patch 1.0程序預(yù)測結(jié)果匯總并去重后，共得到118個轉(zhuǎn)錄因子，結(jié)果如表3所示。

表2 PROMO 3.0.2軟件預(yù)測的48個轉(zhuǎn)錄因子

Table 2. 48 Transcription Factors Predicted by PROMO 3.0.2

NameMatrixWidthNameMatrixWidthRXR-alpha[T01345]7TCF-4E[T02878]7YY1[T00915]4GR[T05076]7GATA-1[T00306]6c-Jun[T00133]7C/EBPbeta[T00581]4E2F-1[T01542]8GR-beta[T01920]5EBF[T05427]11XBP-1[T00902]6GCF[T00320]9AP-2alphaA[T00035]6c-Myc[T00140]6STAT4[T01577]6USF1[T00874]10c-Ets-1[T00112]7ENKTF-1[T00255]8TFIID[T00820]7T3R-beta1[T00851]9HNF-3alpha[T02512]8Ik-1[T02702]13C/EBPalpha[T00105]7MAZ[T00490]13FOXP3[T04280]6Elk-1[T00250]9HNF-1A[T00368]8HIF-1[T01609]9NF-1[T00539]8PPAR-alpha:RXR-alpha[T05221]11NF-AT2[T01945]10NF-kappaB1[T00593]11NF-AT1[T01948]10c-Ets-2[T00113]9Sp1[T00759]10RAR-beta[T00721]10p53[T00671]7PRB[T00696]7Pax-5[T00070]7PRA[T01661]7GR-alpha[T00337]5c-Myb[T00137]8TFII-I[T00824]6HNF-1C[T01951]9NF-AT1[T00550]9HNF-1B[T01950]9ER-alpha[T00261]5TCF-4[T02918]10

表3 Patch 1.0和PROMO 3.0.2軟件預(yù)測結(jié)果匯總

Table 3. Results Predicted by Patch 1.0 and PROMO 3.0.2

118 transcription factorsAML1, AML1a, AML1c, AP-1, AP-2, AP-2alphaA, AP-4, ARP-1C/EBPalpha, C/EBPbeta, CAR, c-Ets-1, c-Ets-2, c-Fos, c-Jun, c-Myb, c-Myc, CNBP, CP1, CREB, Crx, CTCFE12, E2F, E2F+p107, E2F-1, EBF, Elk-1, ENKTF-1, ER-alpha, EZF-2FOR1, FOR2, FOXP3, FXRgammaCAC1, GATA-1, GCF, GR, GR-alpha, GR-betaH4TF-1, H4TF-2, HIF-1, HiNF-A, HiNF-C, HNF-1, HNF-1A, HNF-1B, HNF-1C, HNF-3alpha, HNF-3B, hnRNP K, Hp55, Hp65IK-1, ISGF-3LEF-1, LF-A1, LUN-1, LXR-alphaMax, MAZ, Meis-2a, Meis-2b, MTF-1, MZF-1NF-1, NF-1/L, NFAT-1, NF-AT1, NF-AT2, NF-ATp, NF-E, NF-E3, NF-kappaB1, NIP

(Table 3 continues on next page)

(Continued from previous page)

118 transcription factorsP53, p58, Pax-2, Pax-5, Pax-8, Pbx-1a, Pbx-1b, PEA3, POU1F1a, PPAR-alpha:RXR-alpha, PPUR, PRA, PRB, PXR-1RAR-alpha1, RXR-alpha, RAR-betaSMAD-3, SMAD-4, Sp1, Sp2, Sp3, Sp4, SRY, STAT4T3R, T3R-beta1, TBP, TCF-1A, TCF-4, TCF-4E, TFIID, TFII-I, TR2-11USF1, USF2VDRWT1XBP-1YY1ZFX

3 討 論

hTERT基因定位于5號染色體短臂(5p15.33)，在約90%以上的腫瘤中均可檢測到hTERT基因的表達(dá)，其表達(dá)增加可恢復(fù)端粒酶的活性，并可通過基因組重排、啟動子突變以及其他表觀遺傳學(xué)機(jī)制維持端粒長度，從而調(diào)控細(xì)胞的衰老和腫瘤的發(fā)生[4-5]。已有研究證實，hTERT基因的表達(dá)可參與乳腺癌[6]、肺癌[7]、甲狀腺癌[8]以及黑素瘤[9]等腫瘤的發(fā)生，并且hTERT基因啟動子的突變均與這些腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。

啟動子一般位于轉(zhuǎn)錄起始位點上游，能夠指導(dǎo)RNA聚合酶Ⅱ募集和轉(zhuǎn)錄起始，是調(diào)控基因表達(dá)的重要組成部分，對基因啟動子的鑒定及相關(guān)研究，對基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控具有重要意義。有研究者在黑素瘤中發(fā)現(xiàn)了非編碼TERT基因啟動子突變，這些突變是TERT基因核心啟動子chr5:1295228(C228T)和chr5:1295250(C250T)處反復(fù)發(fā)生的C>T突變，從而導(dǎo)致新的ETS轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的發(fā)生，這些突變同時導(dǎo)致TERT基因表達(dá)成倍增加[10]。C228T和C250T處反復(fù)出現(xiàn)的突變表明，hTERT基因啟動子突變可能是黑素瘤和其他類型腫瘤發(fā)生的早期遺傳事件。對hTERT基因啟動子區(qū)域進(jìn)行初步預(yù)測，可更好的為基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制提供理論依據(jù)。近年來，隨著生物信息學(xué)的迅猛發(fā)展，多種應(yīng)用于生物信息分析的軟件和方法日漸成熟，通過生物信息學(xué)預(yù)測啟動子相關(guān)信息和分析啟動子序列及其調(diào)控元件，可以為啟動子深入研究奠定基礎(chǔ),也可為后續(xù)的實驗提供理論依據(jù)。

DNA甲基化是胞嘧啶的一種表觀遺傳修飾，哺乳動物DNA甲基化主要出現(xiàn)在CpG二核苷酸的胞嘧啶殘基上。正常細(xì)胞中DNA甲基化可維持染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，并且在基因的表達(dá)、胚胎發(fā)育、細(xì)胞的增殖及衰老等生物學(xué)進(jìn)程的調(diào)控中起到重要作用。而在腫瘤細(xì)胞中，DNA甲基化的異常變化則可導(dǎo)致基因表達(dá)譜的改變，往往表現(xiàn)為抑癌基因CpG島區(qū)域高甲基化、微小RNA(miRNA)、腫瘤抗原以及內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒等表達(dá)缺失，使抑癌基因的表達(dá)減少，最終可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生[11-12]。

正常情況下，DNA高甲基常常導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄抑制和基因表達(dá)降低，低甲基化時則會導(dǎo)致基因表達(dá)的增加。然而有研究者發(fā)現(xiàn)，在某些腫瘤組織中，如黑素瘤[13]、口腔鱗癌[14]、肝癌[15]和胃癌[16]中，hTERT基因的表達(dá)水平增高，且伴隨著hTERT基因啟動子區(qū)高甲基化水平，且hTERT基因啟動子區(qū)甲基化程度與腫瘤的侵襲程度和更差的預(yù)后有關(guān)。這種CpG島高甲基化對應(yīng)基因高表達(dá)，低甲基化對應(yīng)基因低表達(dá)的現(xiàn)象也是近年來的研究熱點之一。對hTERT基因啟動子區(qū)域CpG島進(jìn)行預(yù)測分析可為后續(xù)的相關(guān)性研究提供一定理論依據(jù)。本研究利用EMBOSS 6.6.0、CpG finder 1.0以及MethPrimer 1.0三種不同預(yù)測軟件對hTERT基因啟動子區(qū)CpG島進(jìn)行分析，EMBOSS 6.6.0軟件和MethPrimer 1.0在線軟件預(yù)測出的結(jié)果較為相似，且兩種軟件的預(yù)測結(jié)果中均包含有CpG finder 1.0軟件所分析出的CpG島位點，故綜合三種預(yù)測軟件的結(jié)果，hTERT基因啟動子區(qū)域共含有兩個CpG島，分別位于974～1 223 bp和1 242～1 987 bp之間。Horikawa等研究者在1999年使用GRAIL預(yù)測軟件得到hTERT基因啟動子CpG島位點位于857～1 995 bp之間，與本次實驗所預(yù)測出的CpG位點基本相符[17]。但由于生物信息學(xué)技術(shù)的不斷更新，以及各種生物數(shù)據(jù)庫資料的不斷完善，CpG島預(yù)測軟件得到的結(jié)果會更加精確。并且，使用Methprimer預(yù)測軟件預(yù)測CpG島的同時還可以針對每一個CpG島設(shè)計用于亞硫酸氫鹽DNA甲基化分析的PCR引物，可為表觀遺傳學(xué)方面的研究提供高效、便捷的技術(shù)手段[18]。

轉(zhuǎn)錄因子(transcription factors, TF)是基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵組成部分，可通過特異性結(jié)合啟動子和其他基因調(diào)控區(qū)以調(diào)控基因表達(dá)。每個轉(zhuǎn)錄因子通常識別一組相似的DNA序列，這些序列可以使用位置權(quán)重矩陣等模型表示為結(jié)合位點模序，了解轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點模序的特征是掌握轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控功能的的重要步驟[19]。轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點長度一般為5～20 bp，隨著生物實驗驗證的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的不斷積累，近幾年出現(xiàn)了多個收集轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的數(shù)據(jù)庫，如JASPAR、HOCOMOCO、TRANSFAC等數(shù)據(jù)庫[19]。TRANSFAC數(shù)據(jù)庫收錄了有關(guān)真核生物的轉(zhuǎn)錄因子，轉(zhuǎn)錄因子序列及其與真核生物DNA的結(jié)合位點等信息。Patch 1.0軟件是在TRANSFAC數(shù)據(jù)庫中基于模式匹配的方式在一段序列中發(fā)現(xiàn)與模體匹配的位置，并為每一個位置進(jìn)行賦分以評估匹配的質(zhì)量[20]。但由于在使用Patch 1.0軟件預(yù)測時雖然將物種的篩選條件設(shè)置為哺乳動物，檢索后再次經(jīng)人工篩選出物種為人類的轉(zhuǎn)錄因子，但其預(yù)測結(jié)果的假陽性仍相對較高。而PROMO 3.0.2軟件可從指定的物種或物種組的DNA序列中識別潛在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點，并且在預(yù)測時可直接將物種選擇人類作為預(yù)測條件，在一定程度上能夠降低結(jié)果的假陽性率[21]。本實驗使用Patch 1.0程序和PROMO 3.0.2程序?qū)TERT基因啟動子區(qū)序列在TRANSFAC數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行比對預(yù)測，經(jīng)匯總?cè)ブ睾蠊驳玫?18個轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點。其中多個轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點已被相關(guān)研究者證實在腫瘤的發(fā)病機(jī)制、治療及預(yù)后中具有重要作用[22]。如Song等[23]發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)錄因子AP-4可以激活canonical Wnt/β-catenin pathway信號通路及其下游信號靶點，從而增加肝癌細(xì)胞的成瘤能力。而轉(zhuǎn)錄因子AP-1則在某些自身免疫性疾病及惡性腫瘤中均有重要調(diào)節(jié)作用[24]。轉(zhuǎn)錄因子c-Myc的表達(dá)與喉鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后腫瘤復(fù)查率呈正相關(guān)[25]。并且本次預(yù)測結(jié)果中的多個轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點已有相關(guān)研究證實可以參與調(diào)控hTERT基因的表達(dá)，如AP-1、c-Myc、CTCF、HIF-1、SP-1、VDR、WT1等(表4)但由于hTERT基因調(diào)控機(jī)制較為復(fù)雜，其中部分轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點只在hTERT基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的一小環(huán)節(jié)中發(fā)揮作用，并且另有一部分參與調(diào)控hTERT基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點目前尚未發(fā)現(xiàn)。由于目前應(yīng)用軟件只能分析數(shù)據(jù)庫中已知的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點，而對于目的基因啟動子區(qū)域新的或尚未發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點無法預(yù)測，故此方法具有一定局限性。生物信息學(xué)軟件所得到的結(jié)果只能為后續(xù)研究提供理論依據(jù)，但結(jié)果的準(zhǔn)確性仍需進(jìn)行實驗加以證實。

表4 預(yù)測結(jié)果中已被報道的轉(zhuǎn)錄因子

Table 4. Transcription Factors Reported in Predicted Results

Transcription factorActivator/repressorReferenceAP-1Both[26]c-MycBoth[27]CTCFRepressor[28]E2FRepressor[29]E2F-1Repressor[29]c-Ets-1/ c-Ets-2Both[30]HIF-1Activator[31]hnRNP KActivator[32]MAZRepressor[33]NFAT-1Activator[34]NF-κBActivator[35]NIPRepressor[36]P53Repressor[37]Pax-5Activator[38]Pax-8Activator[39]SP1Both[40]SP3Repressor[40]USF1/ USF2Both[41]VDRRepressor[42]WT1Repressor[43]YY1Repressor[44]

綜上所述，本研究首先從NCBI Genbank數(shù)據(jù)庫中獲取hTERT基因及其啟動子區(qū)序列，然后使用多個生物信息學(xué)軟件對hTERT基因啟動子區(qū)CpG島的位置，以及轉(zhuǎn)錄因子及其結(jié)合位點進(jìn)行預(yù)測分析，可為進(jìn)一步構(gòu)建hTERT基因啟動子表達(dá)載體和檢測啟動子活性提供理論基礎(chǔ)，并可為hTERT基因在腫瘤等相關(guān)疾病發(fā)病過程中的機(jī)制提供一定思路。

作者聲明：本文全部作者對于研究和撰寫的論文出現(xiàn)的不端行為承擔(dān)相應(yīng)責(zé)任；并承諾論文中涉及的原始圖片、數(shù)據(jù)資料等已按照有關(guān)規(guī)定保存，可接受核查。

學(xué)術(shù)不端：本文在初審、返修及出版前均通過中國知網(wǎng)(CNKI)科技期刊學(xué)術(shù)不端文獻(xiàn)檢測系統(tǒng)的學(xué)術(shù)不端檢測。

同行評議：經(jīng)同行專家雙盲外審，達(dá)到刊發(fā)要求。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

文章版權(quán)：本文出版前已與全體作者簽署了論文授權(quán)書等協(xié)議。