艾納香油中有效成分的定性檢測及含量測定

陳前袆，曹春月，陳偉，王魯，何珺

(1.貴州大學(xué) 藥學(xué)院，貴州 貴陽 550025；2.貴州省生化工程中心，貴州 貴陽 550025)

艾納香(Blumeabalsamifera(L.) DC)為菊科艾納香屬多年生木質(zhì)草本植物，在廣西多個(gè)少數(shù)民族地區(qū)有著十分悠久的用藥歷史[1]。艾納香油是通過對艾納香葉的粗升華物進(jìn)行壓榨分離得到，是我國貴州少數(shù)民族用藥[2]，具有擴(kuò)張血管、降低血壓[3]、殺菌消炎、鎮(zhèn)咳祛痰、強(qiáng)心等作用[4]。艾納香油有獨(dú)特的芳香氣味，被廣泛應(yīng)用于香料和化妝品行業(yè)。Saewan等[5]通過硅膠分離艾納香得到5個(gè)黃酮類化合物；Fazilatun等[6]從艾納香中提取出11個(gè)黃酮類成分。雷婷等[7]對艾納香進(jìn)行綠原酸的提??；王治平等[8]建立HPLC測定艾納香中原兒茶酸含量。姜建平等[9]考察艾納香水提液中有機(jī)酸、乙醇提取液中多糖、黃酮類、恩醌類、皂苷、生物堿類等成分。黃酮類化合物除了有抑制心血管疾病作用[10]還有美白、抗氧化以及延緩衰老的作用[11]；中藥中的有機(jī)酸類成分具有抑制血小板作用，且某些有機(jī)酸如水楊酸等具有可改善膚質(zhì)、抗皺美白等作用[12]；蒽醌類化合物具有抗腫瘤、腦損傷保護(hù)作用[13]，在化妝品行業(yè)中具有保濕抑菌的作用。

為探討艾納香油中含有哪些種類的有效成分，本實(shí)驗(yàn)采用化學(xué)方法初步定性檢測艾納香油中的有效成分，采用UV比色法測定艾納香油中有效成分的含量，為艾納香油的質(zhì)量綜合控制與評價(jià)提供參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

艾納香油，2017年11月3日分別購自貴州省羅甸縣紅水河鎮(zhèn)平亭村(S1)、貴州省羅甸艾利康藥業(yè)(S2)、貴州省羅甸全興藥業(yè)(S3)、貴州省羅甸艾原生態(tài)藥業(yè)(S4)；大黃素(批號090102)對照品，購自上海融禾醫(yī)藥科技有限公司；綠原酸(批號09081633)對照品，購自上海同田生物技術(shù)股份有限公司；蘆丁(批號100080-200306)，購自中國食品藥品檢定研究院，均供UV含量測定用；碘化鉍鉀、氫氧化鉀、香草醛、蒽酮、甲醇、無水三氯化鋁、醋酸鎂、濃硫酸等均為分析純。

UV757CRT紫外可見分光光度計(jì)；KQ3200DE超聲波清洗器；BT25S電子分析天平。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 艾納香油的定性實(shí)驗(yàn) 利用pH試紙、KOH溶液、AlCl3溶液、蒽酮-濃硫酸溶液、碘化鉍鉀溶液對4批艾納香油進(jìn)行顯色實(shí)驗(yàn)，定性檢測出4批艾納香油中是否含有總有機(jī)酸、總蒽醌、總黃酮、總多糖、總生物堿成分。

1.2.2 艾納香油的泡沫實(shí)驗(yàn) 取5 mL艾納香油于150 mL錐形瓶中，加入50 mL蒸餾水，充分振蕩。以蒸餾水為空白對照。定性檢測4批艾納香油中是否含有總皂苷成分。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

1.3.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取蘆丁對照品0.35 mg、綠原酸對照品3.92 mg、大黃素對照品0.74 mg，均加甲醇溶解，定容至10 mL。蘆丁、綠原酸和大黃素對照品溶液濃度分別為0.035，0.392，0.074 mg/mL。

1.3.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密吸取蘆丁對照品溶液0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mL于10 mL試管中，以1%氯化鋁-甲醇溶液定容至10 mL，搖勻。靜置10 min 后，于420 nm[14]處測定其吸光度A。

1.3.3 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密吸取綠原酸對照品溶液0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mL于10 mL試管中，以甲醇溶液定容至10 mL，搖勻。靜置10 min后，于327 nm[15]處測定其吸光度A。

1.3.4 大黃素標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密吸取大黃素對照品溶液0，0.05，0.1，0.15，0.2，0.25 mL于10 mL試管中，以5%醋酸鎂-甲醇溶液定容至10 mL，搖勻。靜置10 min后，于222 nm[16]處測定其吸光度A。

1.4 有效成分的含量測定

取S1～S4艾納香油適量，加入甲醇，溶解，定容即得供試品。分別吸取供試品溶液各3份，分別按1.3節(jié)操作顯色。搖勻，靜置后，分別在420，222，327 nm處測定其吸光度值。并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算出4批艾納香油中的總黃酮、總蒽醌、總有機(jī)酸成分的含量。計(jì)算公式如下：

2 結(jié)果與討論

2.1 定性與泡沫實(shí)驗(yàn)

由表1可知，S1～S4艾納香油中均含有總蒽醌、總黃酮、總有機(jī)酸成分，無總皂苷、總多糖、生物堿類成分，結(jié)果見表1。

表1 艾納香油成分定性檢測結(jié)果

2.2 線性關(guān)系考察

以標(biāo)品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表2和圖1～圖3。R2>0.99，有良好的線性相關(guān)性。

表2 對照品的線性關(guān)系

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖3 大黃素標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 精密度

精密吸取同一供試品溶液3份，測定6次，記錄其吸光度值并計(jì)算RSD值。結(jié)果蘆丁、大黃素及綠原酸的RSD值分別為0.31%，0.84%，0.70%，表明各測定方法精密度良好。

2.4 重復(fù)性

精密吸取同一艾納香油3份，測定6次，記錄其吸光度值并計(jì)算RSD值。結(jié)果蘆丁、綠原酸及大黃素的RSD值分別為1.17%，0.75%，0.79%，表明各測定方法重復(fù)性良好。

2.5 穩(wěn)定性

精密吸取同一艾納香油供試品溶液3份，分別于5，10，15，20，25，30，35，40，45，50，55，60 min下測定吸光度值，并計(jì)算RSD值。結(jié)果蘆丁、綠原酸及大黃素的RSD值分別為1.46%，0.79%，0.95%，各樣品溶液和對照品溶液檢測吸光度值在 1 h內(nèi)均表現(xiàn)為基本穩(wěn)定，表明在1 h內(nèi)樣品穩(wěn)定性良好。

2.6 加樣回收率

精密吸取一定體積的同一批已知含量的艾納香油供試品溶液，分別加入各對照品溶液適量，進(jìn)行吸光度測定，并計(jì)算其RSD值，結(jié)果見表3。

由表3可知，供試品中總黃酮、總有機(jī)酸、總蒽醌的平均回收率分別為99.80%(RSD=1.33%)，99.37%(RSD=0.56%)，99.81%(RSD=0.58%)。

表3 艾納香油中各類成分的加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)

2.7 樣品測定

取艾納香油供試品重復(fù)測定3次吸光度值，結(jié)果見表4。

表4 艾納香油含量測定結(jié)果

由表4可知，各批次艾納香油中總黃酮、總有機(jī)酸和總蒽醌的含量范圍分別為0.165～0.761，9.928～28.060，12.697～15.154 mg/g。四組供試品中各類成分的含量存在差異，可能是由于艾納香油的來源不同，制備工藝不同。

3 結(jié)論

(1)化學(xué)鑒別方法和泡沫實(shí)驗(yàn)表明，艾納香油中含有黃酮、有機(jī)酸和蒽醌類成分，但無生物堿、皂苷及多糖類成分。

(2)以蘆丁、綠原酸及大黃素為對照品，采用UV比色法對艾納香油中總黃酮、總有機(jī)酸和總蒽醌類成分進(jìn)行加樣回收率與含量測定，結(jié)果表明，三種成分的加樣回收率分別為99.80%，99.37%，99.81%。

(3)四組不同產(chǎn)地的供試品中總黃酮、總有機(jī)酸以及總蒽醌的含量存在差異，總黃酮的含量較少，總有機(jī)酸和總蒽醌的含量相對較高。