系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清細(xì)胞因子水平的變化及臨床意義

羅春華，李鵬，李乾元，趙武，汪作新

(宜昌市中心人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 宜昌 443003)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)臨床表現(xiàn)復(fù)雜，累及多器官、多系統(tǒng)，病程遷延反復(fù)，是一種典型的慢性系統(tǒng)性自身免疫性疾病。目前其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，主要包括免疫復(fù)合物形成引起多器官損傷、自身抗體的產(chǎn)生、T細(xì)胞及B細(xì)胞的過度活化等免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)異常[1]。SLE的臨床特征包括呼吸循環(huán)系統(tǒng)癥狀、腎損害癥狀、發(fā)熱、面部紅斑、關(guān)節(jié)痛等。目前，臨床有效評估SLE活動度的指標(biāo)有多種，其中最常用的為英國狼瘡評估組指數(shù) 和SLE疾病活動指數(shù)(systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI)[2]。研究表明，在SLE的發(fā)病機(jī)制中細(xì)胞因子發(fā)揮關(guān)鍵作用[3]。其中，血清白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-23、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、γ干擾素(interferon-γ，IFN-γ)等均為常見的炎癥細(xì)胞因子。不同的炎癥細(xì)胞因子在SLE的發(fā)病過程中可能發(fā)揮不同的作用。如TNF-α和IFN-γ可能是引發(fā)SLE患兒合并貧血的致病因子[3]；IL-9與SLE患者關(guān)節(jié)損害有關(guān)；IL-10、IL-17可作為預(yù)測SLE患者疾病活動度的生物標(biāo)志物[4-6]等。但目前關(guān)于SLE患者中細(xì)胞因子與疾病活動度及病情變化等方面的相關(guān)性研究較少。本研究旨在探討SLE患者血清細(xì)胞因子水平的變化及臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年4月至2019年4月于宜昌市中心人民醫(yī)院就診的32例SLE患者作為觀察組，其中男10例，女22例，年齡14～63歲，平均(39.8±11.0)歲。觀察組根據(jù)SLE疾病活動指數(shù)(SLEDAI)評分分為穩(wěn)定組(SLEDAI評分<10分)和活動組(SLEDAI評分≥10分)，每組16例。選取同時(shí)期健康體檢的32名健康者作為對照組，其中男12例，女20例，年齡16～65歲，平均(39.7±10.1)歲。兩組患者的性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)宜昌市中心人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，受試者均簽署知情同意書。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合抗核抗體、免疫學(xué)異常、血液學(xué)疾病、神經(jīng)病變、腎臟病變、漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、口腔潰瘍、光過敏、盤狀紅斑、頰部紅斑中的4項(xiàng)及以上者，同時(shí)排除其他結(jié)締組織病變、腫瘤、外感染，即可診斷為SLE；②患者確診前未使用糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑藥物；③兩組患者年齡均≥18歲；④兩組受試者均無認(rèn)知障礙、精神類疾病史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料不完整；②患有其他自身免疫性疾病者；③合并急慢性感染性疾病者；④處于妊娠及哺乳期；⑤CT或X線片證實(shí)的活動性結(jié)核患者；⑥乙肝表面抗原陽性者；⑦無法配合完成各項(xiàng)檢測者。

1.3檢測方法 采集所有受試者清晨空腹靜脈血8 mL，靜置30 min，以離心半徑15 cm，2 500 r/min離心10 min，取上層血清保存于-80 ℃冰箱備檢。①血清細(xì)胞因子檢測：采用酶聯(lián)免疫法檢測所有受試者的血清細(xì)胞因子(IL-17、IL-10、TNF-α、IL-23、IFN-γ)。檢測儀器為日立7600-020全自動生化分析儀(日本日立株式會社生產(chǎn))，試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司，嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作。②SLE患者的ds-DNA、CRP、ESR檢測：采用酶聯(lián)免疫法檢測雙鏈DNA(double-stranded DNA，ds-DNA)，采用速率散射比濁法檢測C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)，采用免疫比濁法檢測紅細(xì)胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate，ESR)。檢測儀器為德國西門子BN-Ⅱ全自動免疫分析儀，檢測試劑盒均購自德國歐蒙公司，嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.4觀察指標(biāo) 比較各組血清細(xì)胞因子IL-17、IL-10、IL-23、TNF-α、IFN-γ水平，分析SLE患者血清細(xì)胞因子與ds-DNA、CRP、ESR、SLEDAI的相關(guān)性。

2 結(jié) 果

2.1觀察組和對照組血清細(xì)胞因子水平比較 觀察組血清IL-17、IL-10、IL-23、TNF-α、IFN-γ水平均顯著高于對照組(P<0.05)。見表1。

組別例數(shù)IL-17(ng/L)IL-10(ng/L)IL-23(ng/L)TNF-α(μg/L)IFN-γ(ng/L)對照組3276.3±18.517.8±5.241.0±12.0232.0±66.911.2±2.2觀察組32207.4±58.177.2±19.8177.4±45.3392.9±108.621.8±5.8t值16.46815.04715.97217.63015.235P值<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05

IL：白細(xì)胞介素；TNF-α：腫瘤壞死因子-α；IFN-γ：γ干擾素；對照組：健康體檢者；觀察組：系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者

2.2穩(wěn)定組、活動組、對照組血清細(xì)胞因子水平比較 三組IL-17、IL-10、IL-23、TNF-α、IFN-γ比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，與對照組相比，穩(wěn)定組、活動組的血清IL-17、IL-10、IL-23、TNF-α、IFN-γ水平均升高(P<0.05)，且活動組高于穩(wěn)定組(P<0.05)。見表2。

組別例數(shù)IL-17(ng/L)IL-10(ng/L)IL-23(ng/L)TNF-α(μg/L)IFN-γ(ng/L)對照組3276.3±18.517.8±5.241.0±12.1232.0±66.911.2±2.2穩(wěn)定組16171.2±51.0a42.4±12.2a122.1±34.6a354.1±101.3a17.8±5.0a活動組16237.2±70.6ab96.8±21.8ab191.0±55.3ab483.9±124.2ab24.8±7.2abF值19.45018.06621.53518.41021.745P值<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05

IL：白細(xì)胞介素；TNF-α：腫瘤壞死因子-α；IFN-γ：γ干擾素；對照組：健康體檢者；穩(wěn)定組：系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動指數(shù)評分<10分患者；活動組：系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動指數(shù)評分≥10分患者；a與對照組比較，P<0.05；b與穩(wěn)定組比較，P<0.05

2.3SLE患者血清細(xì)胞因子與ds-DNA、CRP、ESR、SLEDAI的相關(guān)性分析 血清IL-10與ds-DNA、CRP、ESR呈正相關(guān)，但I(xiàn)L-17、IL-23、TNF-α、IFN-γ與ds-DNA、CRP、ESR均無相關(guān)性。IL-17、IL-23、IL-10 均與SLEDAI呈正相關(guān)，但TNF-α、IFN-γ與SLEDAI無相關(guān)性。見表3。

表3 SLE患者ds-DNA、CRP、ESR水平與血清細(xì)胞因子水平的相關(guān)性 (n=32)

SLE：系統(tǒng)性紅斑狼瘡；ds-DNA：雙鏈DNA；CRP：C反應(yīng)蛋白；ESR：紅細(xì)胞沉降率；SLEDAI：系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動指數(shù)；IL：白細(xì)胞介素；TNF-α：腫瘤壞死因子-α；IFN-γ：γ干擾素

3 討 論

細(xì)胞因子是具有多種生物學(xué)功能的多肽和糖蛋白，是由各種免疫細(xì)胞和炎癥反應(yīng)活化的非免疫細(xì)胞產(chǎn)生[7-8]。按結(jié)構(gòu)其可分為腫瘤壞死因子家族、趨化因子家族、干擾素家族、造血因子家族、其他因子家族。近年來研究發(fā)現(xiàn)，在自身免疫性疾病中，細(xì)胞因子具有多方面的作用，如在相同的自身免疫性疾病中，細(xì)胞因子在不同階段具有不同的作用；在不同的自身免疫性疾病中，不同的細(xì)胞因子與疾病的預(yù)后、嚴(yán)重程度、發(fā)展、發(fā)生具有相關(guān)性[9-10]。諸多研究表明，在SLE的發(fā)病機(jī)制中細(xì)胞因子發(fā)揮重要作用[8-10]。隨著醫(yī)學(xué)水平的不斷提升高，越來越多的學(xué)者開始運(yùn)用細(xì)胞因子來預(yù)測疾病活動度，但細(xì)胞因子在SLE患者中的變化情況與疾病活動度的相關(guān)性仍存在爭議。

IL-17是一類炎癥細(xì)胞因子，包括IL-17A～F，均為IL-17同源分子，在人類中至少存在6個(gè)，致炎作用很強(qiáng)，主要由輔助性T細(xì)胞(helper T cell，Th)17分泌產(chǎn)生。IL-17的受體可在機(jī)體的每個(gè)組織中與Th17細(xì)胞結(jié)合，誘導(dǎo)基質(zhì)細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶、集落刺激因子、趨化因子等炎癥細(xì)胞因子[11-12]。系統(tǒng)性硬化、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等諸多自身免疫性炎癥性疾病與IL-17的高表達(dá)相關(guān)。隨著研究的不斷深入，研究表明，SLEDAI與IL-17呈正相關(guān)，在SLE患者血清中IL-17呈高表達(dá)[13]。本研究結(jié)果顯示，活動組的血清IL-17水平均高于穩(wěn)定組、對照組，且穩(wěn)定組高于對照組，提示存在腎臟損害的SLE患者血清IL-17水平高于無腎臟損害患者，表明患者腎臟損害與SLE疾病存在緊密聯(lián)系，因此IL-17可成為預(yù)測狼瘡腎活動、SLE患者疾病活動度的重要生物學(xué)標(biāo)志物。由于檢測SLE患者血清IL-17水平可減少腎活檢，指導(dǎo)臨床治療策略，減少患者痛苦，故具有積極意義。

IL-10也被稱為細(xì)胞因子合成抑制因子，首次在Th2細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)。研究證實(shí)，IL-10可在不同類型的細(xì)胞中產(chǎn)生[14]。其具有多種免疫調(diào)節(jié)功能，是機(jī)體重要的免疫調(diào)節(jié)因子，能夠抑制Th1細(xì)胞分泌TNF-α、IFN-γ、IL-3、IL-2等，處于免疫調(diào)節(jié)中心環(huán)節(jié)。研究證實(shí)，SLE患者血清中的IL-10水平較高，與SLEDAI呈正相關(guān)，是SLE的易患基因[15]。此外，IL-10在體液免疫應(yīng)答反應(yīng)中發(fā)揮重要的協(xié)同作用[16]。IL-10是B淋巴細(xì)胞的刺激因子，可增加B細(xì)胞的DNA復(fù)制，促進(jìn)細(xì)胞膜表面主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ的表達(dá)，從而對B細(xì)胞的抗體和增殖的合成產(chǎn)生強(qiáng)力的刺激作用。單個(gè)核細(xì)胞受抗ds-DNA抗體刺激，可分泌大量IL-10，同時(shí)IL-10可刺激SLE患者外周血單個(gè)核細(xì)胞產(chǎn)生抗ds-DNA自身抗體。本研究中，活動組的血清IL-10水平均高于穩(wěn)定組、對照組，且穩(wěn)定組的血清IL-10水平高于對照組，表明血清IL-10可成為SLE疾病病情活動度監(jiān)測的指標(biāo)之一。

目前認(rèn)為Th17細(xì)胞是引起SLE患者發(fā)病的主要致病因子，而IL-23是Th17細(xì)胞發(fā)揮作用的重要因子，其可促進(jìn)IL-17大量分泌，對T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)活化，大量分泌促炎細(xì)胞，引發(fā)全身或局部炎癥反應(yīng)[17]。IFN-γ主要由活化T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞產(chǎn)生，是一種促炎因子，其被證實(shí)在體液免疫應(yīng)答反應(yīng)中具有重要作用[18-19]。IFN-γ能有效激活巨噬細(xì)胞，促使T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，誘導(dǎo)主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ的表達(dá)，從而刺激B細(xì)胞分泌免疫球蛋白；其與Ⅱ型IFN受體結(jié)合后，可使B細(xì)胞、T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞增殖并活化其功能。TNF-α參與多種自身免疫疾病和炎癥的發(fā)病過程。研究發(fā)現(xiàn)，血清TNF-α在SLE患者中的表達(dá)水平較高，但TNF-α的高表達(dá)與SLE疾病活動度的相關(guān)性尚存在爭議[20]。本研究結(jié)果顯示，活動組的血清IL-23、TNF-α、IFN-γ水平均高于穩(wěn)定組、對照組，且穩(wěn)定組高于對照組，表明血清IL-23、TNF-α、IFN-γ參與SLE的發(fā)展，可作為判斷SLE疾病活動性的指標(biāo)。本研究結(jié)果還顯示，SLE患者的血清IL-10與ds-DNA、CRP、ESR呈正相關(guān)，提示IL-10可能參與SLE的病程發(fā)展過程；SLE患者的血清IL-17、IL-23、IL-10與SLEDAI呈正相關(guān)，提示這些血清因子與SLE疾病活動度有關(guān)。

綜上可知，SLE患者血清中的IL-17、IL-10、IL-23、TNF-α、IFN-γ均異常表達(dá)且參與SLE的發(fā)病，其中血清IL-17、IL-10、IL-23可能參與SLE的病程發(fā)展，而IL-10與SLE的疾病活動度有關(guān)，故臨床可將IL-10等血清細(xì)胞因子作為預(yù)測SLE患者病情及疾病活動度的生物標(biāo)志物。