參芪復(fù)方對(duì)2型糖尿病GK大鼠生理節(jié)律的影響

張翕宇 晁俊 王鶴亭 王鈞東 謝春光 劉椏

2 型糖尿?。╰ype 2 diabetic，T2DM）是一種由遺傳和環(huán)境因素共同引起的復(fù)雜內(nèi)分泌疾病。2013年由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心編著的監(jiān)測(cè)報(bào)告顯示，18 歲及以上人群糖尿病患病率為10.4%［1］。糖尿病成為威脅我國(guó)人民健康的重要慢性非傳染性疾病，其防控工作尤為重要。生理鐘維持周期節(jié)律，并由此發(fā)出信息控制機(jī)體的行為和生理節(jié)律，包括運(yùn)動(dòng)、睡眠、體溫及內(nèi)分泌等全身節(jié)律活動(dòng)［2］。晝夜節(jié)律的改變與不同代謝性疾病的發(fā)病相關(guān)，包括T2DM，是T2DM 及其并發(fā)癥的重要危險(xiǎn)因素［3-4］。目前，二甲雙胍等西藥雖然是干預(yù)2 型糖尿病的主要臨床手段，但存在血糖控制越嚴(yán)格，低血糖事件越多，血糖波動(dòng)越大，以及胃腸道不適等問(wèn)題［5］。中醫(yī)藥多途徑、多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)的調(diào)節(jié)作用異于西藥降糖的強(qiáng)制性，可糾正各致病因素導(dǎo)致的陰陽(yáng)失調(diào)，及時(shí)恢復(fù)機(jī)體穩(wěn)態(tài)。既往研究表明參芪復(fù)方具有保護(hù)血管、降低炎癥反應(yīng)、控制血糖等多重作用［6］，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)前期研究積累，從生物鐘角度切入，結(jié)合基因芯片技術(shù)，以2 型糖尿病GK 大鼠為研究對(duì)象，探究參芪復(fù)方對(duì)生理晝夜節(jié)律的影響，闡釋其分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象5 個(gè)月齡的雄性自發(fā)性2 型糖尿?。℅oto-Kakizaki Rat）GK 大鼠60 只，無(wú)特定病原體級(jí)動(dòng)物（specific pathogen free，SPF）。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證書(shū)編號(hào)：SCXK（滬）2012-0002。由中國(guó)上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物/Shanghai Slack Laboratory Animals 公司（中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）提供。5 個(gè)月齡的雄性維斯塔爾/Wistar 大鼠，10 只，SPF 級(jí)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證書(shū)編號(hào)：SCXK（川）2015-030。由中國(guó)成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。本次實(shí)驗(yàn)所使用的GK和Wistar 大鼠，以及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均符合《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》（國(guó)家科學(xué)技術(shù)委員會(huì)）。實(shí)驗(yàn)中心由四川省中醫(yī)藥科學(xué)研究院提供（合格證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字第2410311 號(hào)）。實(shí)驗(yàn)期間，動(dòng)物自由攝食、飲水。動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)區(qū)域內(nèi)溫度設(shè)置為22～23 ℃，室內(nèi)相對(duì)濕度為55%～60%，空氣循環(huán)系統(tǒng)保持試驗(yàn)區(qū)域空氣流通。

飼料：高脂飼料由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。在含有88.2%普通飼料的基礎(chǔ)上加入高脂成分：0.3%豬膽鹽、1.5%膽固醇、10.0%精煉豬油。普通飼料購(gòu)買(mǎi)于四川省中醫(yī)藥科學(xué)研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

藥物：參芪復(fù)方浸膏由四川省中醫(yī)藥科學(xué)研究院藥劑科制備提供，制備批號(hào)：20161117。參芪復(fù)方藥物組成包括人參、黃芪、天花粉、生地黃、丹參、山藥、山茱萸肉、制大黃（相當(dāng)于成人服藥一日的劑量）。磷酸西格列汀混懸液制備：將磷酸西格列汀片（100 mg，默沙東，J20140095）于滅菌乳缽中研磨成細(xì)粉末，加入蒸餾水30 mL 混勻。

1.2 動(dòng)物造模與分組GK 大鼠于SPF 動(dòng)物試驗(yàn)區(qū)域內(nèi)適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周，運(yùn)用血糖儀檢測(cè)大鼠尾尖血葡萄糖值，將符合隨機(jī)血糖值≥11.1 mmol/L（檢測(cè)兩次）的大鼠篩選出來(lái)，納入本實(shí)驗(yàn)，隨機(jī)分為3 組：模型組、西藥組、參芪復(fù)方組。Wistar 大鼠同時(shí)于SPF 動(dòng)物試驗(yàn)區(qū)域內(nèi)適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周，設(shè)為Wistar 組，每日予普通飼料喂養(yǎng)。GK 大鼠每日予高脂飼料喂養(yǎng)，連續(xù)喂養(yǎng)4 周，根據(jù)隨機(jī)原則從GK大鼠各組中選取大鼠檢測(cè)隨機(jī)血糖，驗(yàn)證糖尿病模型造模成功。

1.3 干預(yù)方法Wistar 組、模型組大鼠灌服5 mL/（kg·d）生理鹽水；參芪復(fù)方組大鼠灌服1.44 g/（kg·d）參芪復(fù)方混懸液（參芪復(fù)方浸膏由成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科生產(chǎn)，相當(dāng)于成人劑量的10 倍，成人按60 kg 體質(zhì)量計(jì)，每1 mL 浸膏含1.44 g生藥［7］）；西藥組大鼠灌服16 mg/（kg·d）西格列汀片混懸液，連續(xù)干預(yù)8 周。每周定時(shí)測(cè)大鼠體質(zhì)量，并根據(jù)體質(zhì)量變化及時(shí)調(diào)整灌胃量。

1.4 觀察及檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1 各組大鼠一日五點(diǎn)血糖水平及計(jì)算血糖穩(wěn)定性指標(biāo)尾靜脈取血，血糖儀測(cè)定血糖。灌胃后每周1 次測(cè)一日內(nèi)8：00、10：00、14：00、16：00、18：00 五點(diǎn)血糖水平。計(jì)算一日血糖平均水平（MBG）、平均血糖的標(biāo)準(zhǔn)差（SDBG）、最大血糖波動(dòng)幅度（LABG，日內(nèi)血糖最高值與最低值之差）以反映血糖穩(wěn)定性。

1.4.2 血清胰島素水平采用雙抗體夾心/親和素-生物素復(fù)合（avidinbiotincomplex-enzymelinkedimmunosorbentassay，ABC-ELISA）酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法，并在酶標(biāo)板上反應(yīng)。將抗大鼠胰島素的單克隆抗體包被于酶標(biāo)板上，使抗大鼠胰島素的單克隆抗體充分結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的胰島素，將生物素化的抗大鼠胰島素滴入酶標(biāo)板，形成免疫復(fù)合物。鏈霉親和素（Streptavidin）用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記，并與生物素相互結(jié)合，再加入底物工作液完全混合，以使其充分顯色（藍(lán)色）。最后，硫酸溶液作為終止液，加入混合液中以結(jié)束相互反應(yīng)。在450 nm處測(cè)量光密度值（optical density，OD），血清胰島素濃度與光密度值成正比，運(yùn)用繪圖軟件繪制ELISA 標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)測(cè)量的樣品OD值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線以得出樣品中的胰島素濃度。

1.4.3 各組大鼠胰腺組織差異基因檢測(cè)本實(shí)驗(yàn)所用基因芯片為美國(guó)安捷倫科技有限公司生產(chǎn)的大鼠全基因4 乘44K 芯片，芯片貨號(hào)為014879，由上海伯豪生物技術(shù)有限公司代購(gòu)并用于檢測(cè)。依次完成樣品總RNA 的抽提、電泳質(zhì)檢、總RNA 純化、熒光標(biāo)記，芯片雜交，芯片洗滌和掃描。差異基因的篩選需經(jīng)歸一化處理及t檢驗(yàn)，以?huà)呙柚底儺惐稊?shù)（fold change，F(xiàn)C）判斷差異基因的上調(diào)和下調(diào)。FC＞2 為基因表達(dá)上調(diào)，F(xiàn)C＜1 為基因表達(dá)下調(diào)。

1.4.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)關(guān)鍵差異基因用經(jīng)熒光染料或熒光標(biāo)記的具有特異性的探針標(biāo)記跟蹤PCR 產(chǎn)物，利用熒光信號(hào)并結(jié)合相應(yīng)的軟件進(jìn)行定量分析。已知關(guān)鍵差異基因CRY1、DBP 的DNA 序列，設(shè)計(jì)PCR 引物，使該條核苷酸片段能有效地?cái)U(kuò)增模板DNA 序列。本次PCR 實(shí)驗(yàn)運(yùn)用Primer Express 3.0.1 軟件設(shè)計(jì)引物序列，由上海生工生物工程股份有限公司合成。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法IBM SPSS Statistics 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料滿(mǎn)足正態(tài)分布及方差齊性，作參數(shù)檢驗(yàn)-單因素方差分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，方差不齊采用t′檢驗(yàn)；計(jì)量資料不符合正態(tài)分布及方差齊性，作非參數(shù)檢驗(yàn)-秩和檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 灌胃8 周各組大鼠一日MBG、SDBG、LABG比較與模型組相比，Wistar 組、參芪復(fù)方組及西藥組大鼠一日MBG 值較低（P＜0.01），西藥組與參芪復(fù)方組相比更低，差異不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與模型組相比，Wistar 組、參芪復(fù)方組及西藥組大鼠一日SDBG 值較低（P＜0.01），西藥組與參芪復(fù)方組相比更低（P＜0.01）。與模型組相比，Wistar 組、參芪復(fù)方組及西藥組大鼠一日LABG值較低（P＜0.01），西藥組與參芪復(fù)方組相比更低（P＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1 灌胃8 周各組大鼠一日血糖波動(dòng)情況Tab.1 Blood glucose fluctuations of rats in each group after 8 weeks of gavage ±s

表1 灌胃8 周各組大鼠一日血糖波動(dòng)情況Tab.1 Blood glucose fluctuations of rats in each group after 8 weeks of gavage ±s

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與Wistar 組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；與西藥組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別Wistar組模型組參芪復(fù)方組西藥組例數(shù)10 9 10 10 MBG（mmol/L）5.07±0.95**##21.47±2.18ΔΔ##18.77±1.40ΔΔ**17.68±0.62ΔΔ**SDBG 0.67±0.45**2.62±0.53ΔΔ##1.92±0.80ΔΔ**##1.10±0.33ΔΔ**LAGE（mmol/L）1.87±1.24**7.35±1.44ΔΔ##5.22±2.06ΔΔ**##3.05±0.99**

2.2 灌胃8 周各組大鼠一日五點(diǎn)血糖變化趨勢(shì)Wistar 組大鼠一日內(nèi)血糖變化幅度最小，保持穩(wěn)定低值。模型組大鼠血糖在8：00 后呈下降趨勢(shì)，在14：00 降至低點(diǎn)，然后呈逐步上升趨勢(shì)，一日內(nèi)血糖平均水平值最高點(diǎn)在18：00。參芪復(fù)方組大鼠血糖在8：00 后呈下降趨勢(shì)，10：00 后緩慢下降至14：00，然后緩慢上升至18：00，10：00-18：00期間血糖水平較為穩(wěn)定。西藥組大鼠血糖變化趨勢(shì)較參芪復(fù)方組更平穩(wěn)，血糖在8：00 后呈緩慢下降趨勢(shì)，在14：00 降至低點(diǎn)，然后緩慢上升至18：00。見(jiàn)圖1。

2.3 灌胃8周各組大鼠血清胰島素（INS）水平灌胃8 周，與Wistar 組相比，模型組大鼠INS 水平較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組相比，參芪復(fù)方組INS 水平具有較高趨勢(shì)，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；西藥組INS 水平較高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表2。

圖1 灌胃8 周各組大鼠一日五點(diǎn)血糖變化趨勢(shì)圖Fig.1 Trends in blood glucose at five time points in each group after 8 weeks of gavage

表2 各組大鼠INS 比較Tab.2 Comparison of INS levels in each group of rats±s

表2 各組大鼠INS 比較Tab.2 Comparison of INS levels in each group of rats±s

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與Wistar 組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；與西藥組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別Wistar 組模型組參芪復(fù)方組西藥組例數(shù)10 9 10 10 INS（ng/mL）0.54±0.10**0.34±0.13ΔΔ##0.44±0.09 0.50±0.10**

2.4 生理鐘晝夜節(jié)律相關(guān)基因CRY1、DBP 基因芯片及PCR 驗(yàn)證結(jié)果基因芯片結(jié)果中，CRY1在參芪復(fù)方組/模型組、西藥組/模型組中具有表達(dá)上調(diào)的趨勢(shì)，在模型組/Wistar 組中表達(dá)下調(diào)（表3）；經(jīng)PCR 驗(yàn)證后，在參芪復(fù)方組/模型組、西藥組/模型組中表達(dá)上調(diào)，在模型組/Wistar 組中表達(dá)下調(diào)，與基因芯片結(jié)果一致，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）?；蛐酒Y(jié)果中，DBP 在參芪復(fù)方組/模型組中具有表達(dá)上調(diào)的趨勢(shì)，在西藥組/模型組中表達(dá)上調(diào)，在模型組/Wistar 組中表達(dá)下調(diào)；經(jīng)PCR驗(yàn)證后，在參芪復(fù)方組/模型組、西藥組/模型組中表達(dá)上調(diào)，在模型組/Wistar組中表達(dá)下調(diào)，與基因芯片結(jié)果一致，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表4、5 和圖2。

表3 差異基因的基因芯片結(jié)果Tab.3 Gene chip results of differential genes FC

表4 差異基因的定量PCR 結(jié)果Tab.4 Quantitative PCR results of differential genes FC

表5 CRY1、DBPmRNA 相對(duì)表達(dá)量Tab.5 Relative expression levels of CRY1 and DBP mRNA±s

表5 CRY1、DBPmRNA 相對(duì)表達(dá)量Tab.5 Relative expression levels of CRY1 and DBP mRNA±s

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別Wistar 組模型組參芪復(fù)方組西藥組CRY1mRNA 0.102 7±0.018 2**0.024 6±0.019 7 0.064 5±0.011 4 0.068 6±0.010 3**DBPmRNA 0.039 1±0.014 3 0.008 3±0.002 3 0.016 7±0.002 9 0.176 5±0.057 0

圖2 CRY1、DBPmRNA 相對(duì)表達(dá)量柱狀圖Fig.2 Histogram of relative expression of CRY1 and DBP mRNA

3 討論

3.1 生理節(jié)律植物可以隨地球自轉(zhuǎn)而產(chǎn)生24 h規(guī)律的自主震蕩現(xiàn)象，學(xué)者研究該現(xiàn)象的發(fā)生原因，于18 世紀(jì)首次提出生理鐘的概念［4］。機(jī)體受到可被生物體感知的有節(jié)律的環(huán)境信號(hào)，包括明-暗周期光信號(hào)、環(huán)境溫度、社交刺激、身體運(yùn)動(dòng)、飲食等而與環(huán)境同步?！吧礴姟笔巧飪?nèi)源性系統(tǒng)，可以設(shè)定并調(diào)控機(jī)體的時(shí)間周期［8-9］。哺乳動(dòng)物的生物鐘系統(tǒng)包括中樞和外周生理鐘［8，10］。中樞生物鐘位于下丘腦的視交叉上核（suprachiasmatic nucleus，SCN），可以發(fā)出調(diào)控信息以控制機(jī)體的行為和生理節(jié)律，并且其調(diào)控作用可以獨(dú)立自主地產(chǎn)生，亦能夠維持睡與醒的周期性循環(huán)，又稱(chēng)為日周期節(jié)律，如體溫、血壓、排尿、荷爾蒙分泌、睡眠等等全身節(jié)律活動(dòng)［2］。環(huán)境中的光，尤其是夜光，是除內(nèi)在遺傳因素之外，影響SCN 自身節(jié)律性的另一重要因素。外周生理鐘必須依賴(lài)中樞生理鐘以調(diào)控效應(yīng)器節(jié)律；心臟、胰腺等除SCN 以外的機(jī)體大多數(shù)組織中均存在外周生理鐘，不能自主地產(chǎn)生節(jié)律［11-13］。晝夜節(jié)律的變化由中樞生理鐘和外周生理鐘協(xié)同調(diào)控［4］。生理鐘基因協(xié)調(diào)外周組織進(jìn)行的吸收-利用、分解及合成代謝、睡眠-覺(jué)醒等周期［14-16］。

3.2 晝夜節(jié)律與糖尿病幾乎所有生物都存在生命活動(dòng)的晝夜節(jié)律。代謝性疾病，包括2 型糖尿病的發(fā)病，可能與中央生理鐘與外周生理鐘的錯(cuò)位和/或晝夜節(jié)律的改變相關(guān)［8，17］。人體血糖和胰島素變化具有24 h 節(jié)律性，“黎明現(xiàn)象”是血糖周期變化的有力證據(jù)［18］。大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床研究均證實(shí)生理節(jié)律與糖尿病的相關(guān)性。研究發(fā)現(xiàn)代謝性疾病的發(fā)病多見(jiàn)于倒班工作的人群［19］。晝夜節(jié)律，即以24 h 為周期生命活動(dòng)的變化產(chǎn)生紊亂，會(huì)引發(fā)胰島素抵抗和肥胖［20］。外周胰腺自主生理節(jié)律系統(tǒng)對(duì)胰腺功能正常與否以及2 型糖尿病的發(fā)生發(fā)展均至關(guān)重要，胰腺生理節(jié)律異常可直接引發(fā)糖尿?。?8，21］。胰腺根據(jù)生理需要分泌胰島素和胰高血糖素，兩者的血漿水平顯示出24 h 節(jié)律振蕩，共同參與調(diào)節(jié)葡萄糖穩(wěn)態(tài)。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)大鼠胰腺中存在控制胰島素分泌的內(nèi)在晝夜節(jié)律振蕩器［22］。連續(xù)暴露于夜間光線下，可引起人體內(nèi)明暗周期的變化，破壞胰島晝夜節(jié)律，導(dǎo)致胰島分泌脈沖質(zhì)量減少，葡萄糖刺激的胰島素分泌減少［23］。動(dòng)物模型研究發(fā)現(xiàn)，破壞幾種典型生理節(jié)律基因的遺傳性，會(huì)導(dǎo)致多種代謝紊亂，提示生理節(jié)律基因參與葡萄糖穩(wěn)態(tài)［23-26］。包括身體、情感及智力在內(nèi)的生理節(jié)律與行為活動(dòng)同步進(jìn)行，對(duì)葡萄糖代謝（血糖穩(wěn)態(tài)）的正常維持及健康狀態(tài)具有重要作用，生理鐘的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)在多個(gè)層面參與糖代謝［18，27］。生理鐘晝夜節(jié)律紊亂成為糖尿病及其并發(fā)癥的危險(xiǎn)因素。隨著學(xué)者對(duì)此觀念的公認(rèn)，生理節(jié)律基因成為糖尿病治療的新靶點(diǎn)。

3.3 參芪復(fù)方可通過(guò)上調(diào)基因CRY1、DBP的表達(dá)，調(diào)控晝夜節(jié)律，以調(diào)節(jié)胰島素分泌，維持葡萄糖穩(wěn)態(tài)，防治T2DM通過(guò)KEGG 數(shù)據(jù)庫(kù)搜素晝夜節(jié)律信號(hào)通路Circadian rhythm Pathway（圖3），查詢(xún)NCBI Gene Bank 及文獻(xiàn)分析，從本實(shí)驗(yàn)基因芯片結(jié)果的差異基因中篩選出與晝夜節(jié)律相關(guān)的基因：CRY1、DBP。

圖3 晝夜節(jié)律信號(hào)通路Fig.3 Circadian rhythm pathway

基因CRY1編碼隱花色素蛋白（cryptochrome，CRY），該基因的多態(tài)性與改變的睡眠模式有關(guān)，小鼠的CRY1基因缺失，導(dǎo)致其在完全黑暗中的晝夜節(jié)律周期縮短。生物鐘需要太陽(yáng)光線的日/夜節(jié)律，以維持24 h 節(jié)奏振蕩。CRY 蛋白在植物和動(dòng)物中廣泛保守。哺乳動(dòng)物中，CRY 是植物藍(lán)光受體（隱花色素）和光解酶家族的成員，作為生理節(jié)律光誘導(dǎo)的候選光受體，是晝夜節(jié)律核心振蕩器復(fù)合物的關(guān)鍵組分，調(diào)節(jié)生理鐘［28］。通過(guò)全黑暗狀態(tài)下相位變化計(jì)算得出的自由運(yùn)動(dòng)周期是衡量晝夜節(jié)律改變的最重要指標(biāo)，被生物鐘實(shí)驗(yàn)室廣泛采用［29］。研究顯示缺乏CRY 蛋白的小鼠自由運(yùn)動(dòng)周期具有加速和延遲的表現(xiàn)，且觀察到喪失瞬時(shí)和完整的自由奔跑節(jié)律性，表明CRY 蛋白對(duì)于維持晝夜節(jié)律是必不可少的［28］。

基因DBP編碼轉(zhuǎn)錄因子白蛋白位點(diǎn)D結(jié)合蛋白（transcription factors albumin sited-binding protein，DBP），DBP 是“細(xì)胞鐘”的元件，其在視交叉上核和外周組織的晝夜積聚現(xiàn)象，被認(rèn)為參與調(diào)節(jié)下游基因的晝夜節(jié)律。T2DM 缺失24 h 的胰島素分泌時(shí)間變化，胰島β細(xì)胞晝夜節(jié)律的損傷可能與糖尿病狀態(tài)的發(fā)展有關(guān)［30］。外周胰腺自主生理鐘系統(tǒng)對(duì)胰腺功能和T2DM 的發(fā)生至關(guān)重要，胰腺生理鐘異?？芍苯右l(fā)糖尿?。?8，21］。對(duì)胰島素分泌細(xì)胞中DBP 的表達(dá)模式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)DBP 轉(zhuǎn)錄物在人胰島中表達(dá)水平極高，顯著高于其他組織，表明DBP 在此組織細(xì)胞中存在潛在的重要晝夜節(jié)律調(diào)節(jié)作用［30］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，灌胃8 周，模型組大鼠均高于其余各組，反映其血糖波動(dòng)幅度較大；與模型組相比，參芪復(fù)方組、西藥組MBG、SDBG、LAGE 均較低，反映參芪復(fù)方及西藥西格列汀均能減少大鼠的血糖波動(dòng)。同時(shí)，模型組大鼠血清INS 水平較Wistar 組下降，參芪復(fù)方干預(yù)具有調(diào)節(jié)大鼠血清INS水平的作用。差異基因芯片結(jié)果經(jīng)PCR驗(yàn)證后表明，與模型組相比，參芪復(fù)方及西藥西格列汀均可上調(diào)基因CRY1、DBP的表達(dá)。結(jié)合KEGG 數(shù)據(jù)庫(kù)及上述文獻(xiàn)分析推測(cè)，參芪復(fù)方可通過(guò)調(diào)控基因CRY1、DBP的表達(dá)，參與調(diào)節(jié)生理鐘晝夜節(jié)律，進(jìn)而改善胰島素敏感性，調(diào)節(jié)胰島細(xì)胞的胰島素分泌，維持全身血糖水平，達(dá)到防治T2DM 的重要作用。此次實(shí)驗(yàn)應(yīng)用基因芯片技術(shù)對(duì)GK 大鼠胰腺組織進(jìn)行差異基因檢測(cè)，從全基因組的宏觀角度探索參芪復(fù)方防治T2DM 的微觀機(jī)制，涉及生理鐘晝夜節(jié)律，為后續(xù)信號(hào)通路多角度、多層面的驗(yàn)證奠定基礎(chǔ)，提供思路與方向。