一例黑斑側(cè)褶蛙“歪脖子”病的診治

黑斑側(cè)褶蛙主要以稻田、池塘、水渠等作為棲息、繁殖和捕食場所，因其營養(yǎng)價(jià)值豐富、生長迅速、抗病力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，深受廣大養(yǎng)殖者的喜愛。目前野生黑斑側(cè)褶蛙的數(shù)量稀少，已列為國家二級保護(hù)動(dòng)物名錄。隨著水域環(huán)境污染及人為捕撈的影響，野生黑斑側(cè)褶蛙的數(shù)量再次大幅減少，其種質(zhì)資源面臨滅絕的危險(xiǎn)。

為了保護(hù)和利用黑斑側(cè)褶蛙，在辦理馴養(yǎng)繁殖許可證的條件下，黑斑側(cè)褶蛙集約化、高密度的養(yǎng)殖模式被逐漸推廣開來，在提高黑斑側(cè)褶蛙產(chǎn)量的同時(shí)也帶來一些養(yǎng)殖疾病，其中以眼膜發(fā)白、運(yùn)動(dòng)和平衡機(jī)能失調(diào)為特征的“歪脖子”病最為嚴(yán)重，死亡率高達(dá)90%，給養(yǎng)殖戶造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本文介紹一例黑斑側(cè)褶蛙“歪脖子”病的診治過程，供大家借鑒。

一、發(fā)病癥狀

2019年8月中旬，在彭水縣某黑斑側(cè)褶蛙養(yǎng)殖場出現(xiàn)黑斑側(cè)褶蛙生病死亡事件。該養(yǎng)殖場面積為20畝，采用串聯(lián)式排水養(yǎng)殖模式，養(yǎng)殖密度約為55只/米2。病蛙體重集中在15～30克/只，主要發(fā)病癥狀表現(xiàn)為患病蛙身體在水中失去平衡，腹部朝上浮于水面，在水面間歇性打轉(zhuǎn)，體表失去光澤，頭斜朝向一邊，呈“歪脖子”狀(圖1)；眼球腫大突出，眼膜泛白外翻，局部充血(圖2)；在其體表經(jīng)鏡檢未發(fā)現(xiàn)寄生蟲，解剖時(shí)發(fā)現(xiàn)內(nèi)臟團(tuán)腫脹充血，腸胃無食且有氣泡，并伴隨有少量腹水(圖3)。根據(jù)發(fā)病癥狀初步診斷為細(xì)菌性疾病。

圖1“歪脖子”癥狀

圖2 眼球表面覆蓋一層白膜

圖3 腹腔內(nèi)有少許腹水

二、病原菌分離及鑒定

將病蛙置于超凈工作臺(tái)，用75%酒精進(jìn)行體表消毒，用無菌剪刀解剖病蛙，取其肝臟、腎臟等組織在普通營養(yǎng)瓊脂平板劃線后置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，觀察到從肝臟分離出的圓形、邊緣整齊的橙色優(yōu)勢單菌落(圖4)；分離單菌落通過革蘭氏染色鏡檢觀察為單個(gè)分散排列的陰性、桿狀的細(xì)菌(圖5)；將分離純化細(xì)菌進(jìn)行回歸感染試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)健康蛙出現(xiàn)與自然患病蛙相類似的癥狀；以16S rRNA序列構(gòu)建N-J系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果表明分離株RC02與腦膜炎敗血伊麗莎白菌(Elizabethkingia meningoseptica)聚為一簇(圖6)，最終鑒定為腦膜炎敗血伊麗莎白菌。

圖4 病原菌形態(tài)特征

圖5 革蘭氏染色

圖6 16S rRNA構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹

三、藥敏試驗(yàn)及結(jié)果分析

將經(jīng)過純化的菌株在恒溫?fù)u床培養(yǎng)7～8小時(shí)，離心后用無菌水調(diào)整為1.0×108CFU/毫升濃度的菌懸液均勻涂布。通過K-B紙片法對分離菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，選取了林可霉素、氟苯尼考、恩諾沙星、復(fù)方新諾明、頭孢他啶、左氧氟沙星、阿莫西林、麥迪霉素、氨芐西林、頭孢唑林、氧氟沙星、慶大霉素、紅霉素、阿奇霉素、環(huán)丙沙星、四環(huán)素等16種抗生素檢測分離株細(xì)菌的耐藥性，結(jié)果顯示分離菌株對氟苯尼考、氨芐西林表現(xiàn)高度敏感，對其他14種抗生素均表現(xiàn)出耐藥性。

四、治療方法

根據(jù)養(yǎng)殖場實(shí)際情況及藥敏試驗(yàn)結(jié)果，首先將池塘病蛙進(jìn)行隔離清除，同時(shí)將病死蛙拌生石灰挖坑深埋，且附近用生石灰再次消毒。針對發(fā)病池塘和病蛙，建議采用以下措施。

1.針對發(fā)病蛙池，加入新水并用生石灰消毒，用生石灰50～100克/米3化水后全池潑灑，每天1次，連續(xù)3天，在第4天可使用微生態(tài)試劑改善水體環(huán)境。

2.針對病蛙，采用氟苯尼考拌餌投喂，用量為每千克蛙拌餌投喂10～15毫克(以氟苯尼考計(jì))，連續(xù)投喂7天。第4天后死亡量開始下降，第7天后病情得到控制，死亡率大大降低。

五、總結(jié)與建議

本病例中的“歪脖子”病是近年來出現(xiàn)在多種蛙類中的一種傳染性強(qiáng)、死亡率高、難治愈的疾病，嚴(yán)重影響黑斑側(cè)褶蛙的經(jīng)濟(jì)效益，現(xiàn)已成為阻礙蛙類人工養(yǎng)殖業(yè)的興旺和發(fā)展的關(guān)鍵因素之一。

根據(jù)相關(guān)研究報(bào)道，各種規(guī)格的養(yǎng)殖蛙類均可發(fā)病，發(fā)病季節(jié)一般為4-11月，流行水溫為20℃以上。該病發(fā)病急，病程與水溫高低呈明顯的相關(guān)性，發(fā)病蛙一般3～5天死亡，死亡率達(dá)90%以上。為此提出以下建議。

1.養(yǎng)殖池采用獨(dú)立進(jìn)排水。

2.嚴(yán)格控制苗種來源。引進(jìn)無病、優(yōu)質(zhì)、健康、非近親的種苗，提高安全系數(shù)，可通過所在地區(qū)水產(chǎn)相關(guān)部門向值得信賴的種苗場引種。蛙苗入池前進(jìn)行消毒處理，防止帶病蝌蚪入池引起發(fā)病。

3.合理密度放養(yǎng)。一方面保證養(yǎng)殖蛙類能有足夠的活動(dòng)空間，另一方面可以預(yù)防疾病的快速傳播，減少經(jīng)濟(jì)損失。

4.環(huán)境管理。種苗入池前，要嚴(yán)格對養(yǎng)殖水體、養(yǎng)殖池及餌料臺(tái)進(jìn)行消毒處理，可采用生石灰潑灑，并定期用“蛙消安”進(jìn)行全面消毒鞏固。確定水源無污染，保證藻類含量適宜。每次投餌以半小時(shí)內(nèi)吃完為宜，不可有過多的食料殘余污染水質(zhì)，定期更換養(yǎng)殖池內(nèi)水，保持水體清潔。根據(jù)養(yǎng)殖環(huán)境合理使用微生態(tài)試劑，可每10天1次，保證水質(zhì)穩(wěn)定。

5.定期用中草藥拌餌投喂，增強(qiáng)黑斑側(cè)褶蛙的抵抗力和抗應(yīng)激性。如用烏梅、柯子、五倍子、半枝蓮等中藥的提取物混合拌餌，或?qū)⒋┬纳彙⑦B翹、白芷、茵陳、丹參、甘草經(jīng)特殊工藝制成殺菌制劑，也可定期投喂板藍(lán)根、黨參等。

6.加強(qiáng)管理。巡塘人員要做好早、中、晚按時(shí)巡塘工作，發(fā)現(xiàn)病蛙及時(shí)隔離進(jìn)行無害化處理，做到早發(fā)現(xiàn)，早治療。通過藥敏試驗(yàn)結(jié)果，在符合國家規(guī)定用藥標(biāo)準(zhǔn)的前提下科學(xué)規(guī)范用藥，進(jìn)行精準(zhǔn)治療。