不同殺菌劑對除蟲菊根腐病菌的室內(nèi)毒力測定

曹妍 王雙金

摘要? ? 為篩選出防治除蟲菊根腐病菌的有效藥劑，采用菌絲生長速率法測定了10種殺菌劑對除蟲菊根腐病菌的主要致病菌——鐮刀菌GF4的室內(nèi)抑菌效果。結(jié)果表明，供試的10種殺菌劑對鐮刀菌GF4均有一定的抑制作用。其中，微生物殺菌劑100億CFU/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑（美國拜沃）對鐮刀菌GF4的室內(nèi)毒力最強(qiáng)，EC50值為1.40×10-6 mg/L;其次是100萬孢子/g寡雄腐霉菌可濕性粉劑，EC50值為0.003 9 mg/L;化學(xué)農(nóng)藥80%多菌靈可濕性粉劑也表現(xiàn)出較強(qiáng)的室內(nèi)抑制效果，EC50值為51.634 6 mg/L。該研究篩選出了能有效抑制鐮刀菌GF4菌絲生長的生物農(nóng)藥，用量少且毒性低，為除蟲菊根腐病的田間防治提供了基礎(chǔ)研究。

關(guān)鍵詞? ? 除蟲菊;根腐病;鐮刀菌;室內(nèi)毒力測定

中圖分類號? ? S482.2? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼? ? A

文章編號? ?1007-5739（2020）08-0096-02? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）

除蟲菊（Chrysanthemum cinerariaefolium）為菊科菊蒿屬植物，是迄今為止世界上少數(shù)幾種能夠集約化種植的殺蟲植物[1]，從中提取的除蟲菊素（酯）被公認(rèn)為安全有效的植物源殺蟲劑。20世紀(jì)末，除蟲菊被引種到云南省玉溪、曲靖、紅河等地種植。經(jīng)過近20年的發(fā)展，云南省已成為繼東非和澳大利亞之后的第三大除蟲菊產(chǎn)區(qū)。隨著規(guī)?；N植和面積的不斷擴(kuò)增，除蟲菊病害日益突出，但目前國內(nèi)在病蟲害研究和藥劑防治方面幾乎處于空白狀態(tài)。關(guān)于除蟲菊病原菌的研究，國內(nèi)目前只見除蟲菊莖腐病原菌為4種鐮孢菌的報(bào)道[2]。

除蟲菊根腐病是除蟲菊規(guī)?；绾头N植中出現(xiàn)的主要病害之一，該病使植株根部變褐、腐爛，植株萎蔫，嚴(yán)重的導(dǎo)致整株死亡。本次試驗(yàn)從云南峨山甸中除蟲菊育苗基地采集除蟲菊根腐病菌幼苗，帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原菌分離、培養(yǎng)鑒定，獲得一株鐮刀菌，命名為GF4，且經(jīng)過科赫法則回接確定為除蟲菊根腐病的主要致病菌之一。鐮刀菌通常為根腐病的致病菌，郝向陽等就從福建非洲菊產(chǎn)區(qū)分離到非洲菊根腐病原菌主要為尖孢鐮刀菌、隱地疫霉[3]，鐮刀菌還是引起黃瓜、番茄、枸杞、太子參等植物根腐病的病原菌[4-7]。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 試驗(yàn)材料

供試菌株為實(shí)驗(yàn)室保存的鐮刀菌GF4。該菌株從除蟲菊幼苗根腐病根上分離，根據(jù)分生孢子類型初步鑒定為鐮刀菌，由云南南寶生物科技有限公司微生物實(shí)驗(yàn)室保存?zhèn)溆谩?/p>

供試藥劑有①化學(xué)殺菌劑：70%嘧霉胺水分散粒劑（山東一覽科技有限公司）、20%腐霉利懸浮劑（江西禾益化工股份有限公司）、80%多菌靈可濕性粉劑（江蘇倉泰農(nóng)化有限公司）;②植物源殺菌劑：10%硫酸小檗堿水劑（云南南寶生物科技有限公司）、1%蛇床子素微乳劑（云南南寶生物科技有限公司）;③微生物殺菌劑：2億活孢子/g木霉菌可濕性粉劑（山東泰諾藥業(yè)有限公司）、100億CFU/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑（美國拜沃股份有限公司）、100億CFU/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑（德強(qiáng)生物股份有限公司）、1 000億CFU/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑（河北中保綠農(nóng)股份有限公司）、100萬孢子/g寡雄腐霉菌可濕性粉劑（捷克生物制劑有限公司）。以上藥劑均為市購。

1.2? ? ?試驗(yàn)方法

采用菌絲生長速率法[8]測定。在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，將1.1中的10種供試藥劑制成一定濃度的母液，然后按照一定濃度和比例加入到滅菌的50～60 ℃ PDA培養(yǎng)基中，制成一定梯度的含藥PDA平板培養(yǎng)基。用5 mm打孔器在預(yù)培養(yǎng)好的病原菌邊沿打取菌餅，接種到含藥培養(yǎng)基平板中央，將有菌絲面貼于培養(yǎng)基上，每個(gè)濃度設(shè)4個(gè)重復(fù)，以不含藥劑加等量無菌水的培養(yǎng)基為對照（CK）。在25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6 d，采用十字交叉法測量菌落直徑并記錄。根據(jù)以下公式計(jì)算抑制率：

將生長抑制率換算成抑制幾率值作為因變量（y），將藥劑濃度的對數(shù)值作為自變量（x），利用DPS 7.05軟件求出各藥劑的毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)r和有效抑制中濃度EC50值及EC90值。根據(jù)EC50值和EC90值，比較各藥劑對該菌生長的影響，篩選出用量低且抑制率高的農(nóng)藥制劑。

2? ? 結(jié)果與分析

2.1? ? 不同殺菌劑對鐮刀菌GF4菌絲生長的影響

由表1可以看出，供試藥劑對除蟲菊根腐病菌GF4均有一定的抑制作用，但不同殺菌劑之間抑菌效果相差較大。各藥劑在設(shè)置濃度范圍內(nèi)，隨著藥劑濃度的降低，藥劑對鐮刀菌GF4的抑制率也逐漸降低。在選取的化學(xué)殺菌劑中，80%多菌靈可濕性粉劑表現(xiàn)出相對較好的抑菌效果，在高劑量1 000 mg/L情況下抑制率為100%;而20%腐霉利懸浮劑和70%嘧霉胺水分散粒劑對鐮刀菌GF4的抑制率較差，在高劑量1 000 mg/L情況下，抑制率分別僅為56.38%、69.15%。選取的2種植物源農(nóng)藥對鐮刀菌GF4抑制效果均較差，在高劑量2 500 mg/L情況下，10%硫酸小檗堿水劑和1%蛇床子素微乳劑對鐮刀菌GF4的抑制率分別為48.94%、61.70%。微生物殺菌劑中，3個(gè)廠家的枯草芽孢桿菌和寡雄腐霉菌可濕性粉劑的抑制效果均較強(qiáng)，即使在低劑量0.1 mg/L的情況下，抑制率仍在60%以上，只有2億活孢子/g木霉菌可濕性粉劑表現(xiàn)的殺菌效果相對較差，高劑量1 000 mg/L情況下，抑制率為72.34%。綜上所述，10種殺菌劑中，對鐮刀菌GF4殺菌效果較好的藥劑有枯草芽孢桿菌可濕性粉劑、寡雄腐霉菌可濕性粉劑，其次是化學(xué)藥劑80%多菌靈可濕性粉劑，而其他幾種藥劑抑制效果相對較差。

2.2? ? 不同殺菌劑對鐮刀菌GF4的室內(nèi)毒力測定

由表2可以看出，供試的10種農(nóng)藥對鐮刀菌GF4均有一定的毒力，但毒力差異較大。從各藥劑的EC50值和EC90值可以看出，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑和寡雄腐霉可濕性粉劑表現(xiàn)出對鐮刀菌GF4較強(qiáng)的室內(nèi)毒力。美國拜沃公司的100億CFU/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對鐮刀菌GF4的室內(nèi)毒力最強(qiáng)，EC50值和EC90值均最小，分別為1.40×10-6 mg/L和2.217 0 mg/L;其次是德強(qiáng)生物公司的100億CFU/g枯草芽孢桿菌和捷克生物公司的100萬孢子/g寡雄腐霉可濕性粉劑，其EC50值分別為0.000 2、0.003 9 mg/L，EC90值分別為6.063 8、26.521 3 mg/L;中保綠農(nóng)公司的1 000億CFU/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑的EC50值為0.001 5 mg/L，但EC90值高達(dá)137.146 6 mg/L，EC90值較其他2種枯草芽孢桿菌可濕性粉劑要高;80%多菌靈可濕性粉劑的EC50和EC90值分別為51.634 6、147.784 3 mg/L;2億活孢子/g木霉菌可濕性粉劑和其他2種化學(xué)藥劑及2種植物源農(nóng)藥的EC50值和EC90值均較大，表明對鐮刀菌GF4毒力作用不明顯?？傊?，3個(gè)廠家的枯草芽孢桿菌可濕性粉劑和捷克生物公司100萬孢子/g寡雄腐霉可濕性粉劑對鐮刀菌GF4的室內(nèi)毒力較強(qiáng)，80%多菌靈可濕性粉劑次之，70%嘧霉胺水分散粒劑和木霉菌可濕性粉劑防效一般，腐霉利、硫酸小檗堿和蛇床子素防效差。

3? ? 結(jié)論與討論

試驗(yàn)采用菌絲生長速率法對常用殺菌劑多菌靈、枯草芽孢桿菌、蛇床子素等10種藥劑對除蟲菊根腐病菌主要病原菌（鐮刀菌GF4）進(jìn)行了室內(nèi)毒力測定，結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑、寡雄腐霉可濕性粉劑對鐮刀菌GF4有非常高的抑制率，而且隨著藥劑濃度的降低，抑制率降幅小，在低劑量0.1 mg/L的情況下，抑制率仍在60%以上，這與滕 朕等研究的生物農(nóng)藥對人參立枯病菌的結(jié)果一致[9]。

試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，低于1 000 mg/L劑量時(shí)，選取的微生物殺菌劑枯草芽孢桿菌、寡雄腐霉對致病鐮刀菌GF4的抑制率高于化學(xué)藥劑多菌靈、嘧霉胺和腐霉利。越來越多的研究表明，枯草芽孢桿菌菌劑的殺菌效果優(yōu)于某些化學(xué)農(nóng)藥[10-11]。長期以來，植物病害的防治以化學(xué)農(nóng)藥為主，但由于長期不合理使用化學(xué)農(nóng)藥產(chǎn)生了農(nóng)藥殘留、抗性等問題。近年來，隨著人們對食品安全意識的提高，生物農(nóng)藥的開發(fā)越來越受重視。枯草芽孢桿菌具有繁殖速度快、抗菌譜廣、抗逆性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，是微生物農(nóng)藥中登記和應(yīng)用最多的一類微生物殺菌劑，已被成功用于多種病害的生物防治[10，12-13]。

本試驗(yàn)篩選出了對鐮刀菌GF4的室內(nèi)抑菌效果較好的 微生物農(nóng)藥枯草芽孢桿菌可濕性粉劑和寡雄腐霉菌可濕性粉劑，為進(jìn)一步開展田間藥效試驗(yàn)提供了基礎(chǔ)研究。此2種微生物藥劑對除蟲菊根腐病菌的田間防效是否穩(wěn)定，仍需下一步大田試驗(yàn)驗(yàn)證。

4? ? 參考文獻(xiàn)

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