老年2型糖尿病伴冠心病患者HDL-C與SAA、VCAM-1、ICAM-1、THP-1的相關(guān)性研究

金勇 王燕 李艷

(北京市第二醫(yī)院，(1.心內(nèi)科；(2.綜合內(nèi)科，北京 100031)

高密度脂蛋白(HDL)已被證實(shí)是一種心血管保護(hù)性脂蛋白，能夠誘導(dǎo)組織細(xì)胞中膽固醇的外流，增強(qiáng)抗氧化、抗炎作用等而抑制動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程，還有血管內(nèi)皮功能保護(hù)效應(yīng)，故HDL又被稱(chēng)為“血管脂質(zhì)清道夫”[1]。血漿HDL膽固醇(HDL-C)降低是發(fā)生心血管疾病(CVD)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，但當(dāng)前以提高HDL-C水平為靶目標(biāo)的調(diào)脂治療并未降低CVD發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，且HDL-C高水平者仍存在心肌梗死發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，認(rèn)為血漿HDL-C水平作為評(píng)價(jià)CVD發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的因子其價(jià)值仍有限[2]。有研究[3]表明，2型糖尿病(T2MD)因持續(xù)高血糖狀態(tài)，且常伴血脂紊亂、血壓升高等，與冠心病(CHD)合并時(shí)可導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈病變彌漫而加重病情。本研究檢測(cè)分析了老年T2DM與CHD患者的血漿HDL-C水平及HDL組分與相關(guān)因子變化。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 選取2017年1月至2019年1月本院收治的T2DM和(或)CHD老年患者96例，年齡61～85歲，平均(71.09±6.43)歲。根據(jù)疾病類(lèi)型分為單純T2DM組、單純CHD組、T2DM+CHD組各32例。另外抽取同期在本院接受健康體檢的32名年齡、性別匹配的老年人作為健康對(duì)照組(NC組)。NC組年齡(70.23±6.16)歲、男33例、BMI(22.04±1.18)kg/m2、吸煙者6例、飲酒者5例、有高血壓史0例；T2DM組年齡(71.15±6.82)歲、男31例、BMI(23.94±1.22)kg/m2、吸煙者11例、飲酒者8例、有高血壓史14例；CHD組年齡(70.49±6.03)歲、男29例、BMI(23.65±1.13)kg/m2、吸煙者12例、飲酒者10例、有高血壓史15例；T2DM+CHD組年齡(71.99±6.94)歲、男32例、BMI(24.15±1.43)kg/m2、吸煙者14例、飲酒者9例、有高血壓史17例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)T2DM診斷符合《中國(guó)2型糖尿病防治指南(2013年版)》[4]中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)CHD診斷符合《冠心病的診斷與治療》[5]中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；(3)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)診斷為1型糖尿病者；(2)既往冠狀動(dòng)脈介入術(shù)(PCI)治療史者；(3)近2周內(nèi)有出血史、外傷史、出血史者；(4)近2周內(nèi)規(guī)律使用他汀類(lèi)調(diào)脂藥物或其他影響脂代謝的藥物者；(5)合并急慢性感染性疾病、甲狀腺疾病、結(jié)締組織性疾病、惡性腫瘤等；(6)合并惡性心律失常、瓣膜性心臟病、充血性心力衰竭等嚴(yán)重心血管事件者。所有受試者均知情同意，研究獲得醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)審核批準(zhǔn)。各組研究對(duì)象一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)

1.2臨床資料采集 采集一般資料。記錄常規(guī)生化指標(biāo)，包括血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。

1.3血液指標(biāo)檢測(cè)

1.3.1主要儀器與試劑 普通離心機(jī)由美國(guó)Foram公司提供；超速離心機(jī)由美國(guó)Beckman公司提供；低溫冷凍干燥機(jī)由美國(guó)Labconco公司提供；PD-10透析柱由美國(guó)GE公司提供；ECM培養(yǎng)基由美國(guó)Scien Cell公司提供；人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)由美國(guó)Scien Cell公司提供。

1.3.2標(biāo)本采集 所有受試者均在入院當(dāng)天或第2天，隔夜空腹8 h以上，晨取空腹靜脈血以EDTA抗凝，4 ℃下以3 000 r/min離心10 min，分離血漿與血清分裝，置于-80 ℃下保存統(tǒng)一待測(cè)。

1.3.3HDL中SAA檢測(cè) 凍存血漿標(biāo)本取出并于室溫條件下解凍30 min，以3 000 r/min離心5 min后，留取上層血漿1.5 mL于容量為10 mL的EP管內(nèi)。提取血漿HDL樣品，于-20 ℃冰箱內(nèi)凍存。獲得HDL凍干粉樣品保存于-80 ℃冰箱內(nèi)。樣品稀釋后，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定其SAA含量，操作按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.4ICAM-1、VCAM-1、TPH-1及炎癥因子檢測(cè)，采用流式細(xì)胞儀測(cè)定ICAM-1和VCAM-1表達(dá)，采用Calcein-AM熒光染色劑染色標(biāo)記THP-1細(xì)胞后測(cè)定細(xì)胞黏附量；ELISA法測(cè)定超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CPR)、白介素-6(IL-6)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)。操作均按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1各組間糖脂代謝指標(biāo)比較 各組間TC、TG、LDL-C比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，T2DM組和T2DM+CHD組GLU明顯升高(P<0.05)；T2DM組、CHD組和T2DM+CHD組HDL-C均較NC組明顯降低(P<0.05)，但三組病例組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組間糖脂代謝指標(biāo)比較

注：與NC組比較，*P<0.05；與T2DM組比較，#P<0.05；與CHD組比較，△P<0.05。

2.2各組間HDL中SAA、ICAM-1、VCAM-1水平比較 T2DM組、CHD組和T2DM+CHD組的HDL中SAA、ICAM-1、VCAM-1、THP-1均顯著高于NC組(P<0.05)，且病例組間呈SAA、ICAM-1、THP-1含量呈T2DM+CHD組> T2DM組>CHD組，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；T2DM+CHD組的VACM-1顯著高于T2DM組和CHD組(P<0.05)，但T2DM組與CHD組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組間HDL中SAA、ICAM-1、VCAM-1、THP-1水平比較

注：與NC組比較，*P<0.05；與T2DM組比較，#P<0.05；與CHD組比較，△P<0.05。

2.3各組血漿hs-CRP、IL-6、MCP-1水平比較 T2DM組、CHD組和T2DM+CHD組的血漿hs-CRP、IL-6、MCP-1水平均顯著高于NC組(P<0.05)，且T2DM+CHD組顯著高于T2DM組、CHD組(P<0.05)，T2DM組高于CHD組(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各組血漿hs-CRP、IL-6、MCP-1水平比較

注：與NC組比較，*P<0.05；與T2DM組比較，#P<0.05；與CHD組比較，△P<0.05。

2.4相關(guān)性分析 NC組HDL-C及HDL中SAA與ICAM-1、VCAM-1、hs-CRP、IL-6、MCP-1均無(wú)明顯線(xiàn)性相關(guān)性(P>0.05)；T2DM和T2DM+CHD組中，HDL-C與hs-CRP呈顯著負(fù)相關(guān)性(P<0.05)；T2DM組、CHD組和T2DM+CHD組中，SAA均與ICAM-1、VCAM-1、THP-1、hs-CRP、IL-6、MCP-1呈顯著負(fù)相關(guān)性(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 相關(guān)性分析(r值)

注：*P<0.05；**P<0.01。

3 討 論

T2DM是發(fā)生CVD的高危因素，主要是其常伴胰島素抵抗、脂代謝紊亂、血管內(nèi)皮損傷、慢性低度炎癥狀態(tài)、血液高凝狀態(tài)等，而上述因素均與CHD的發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)[6]。血脂異常與T2DM及CHD的發(fā)生均有密切關(guān)系，而HDL作為一種心血管保護(hù)性脂蛋白，其含量及功能變化可能與疾病狀態(tài)密切相關(guān)[7-10]。

炎癥是引起HDL組分及功能異常的關(guān)鍵原因之一，在慢性炎癥狀態(tài)下HDL的多種蛋白組分可發(fā)生改變，尤其是可引起大量急性時(shí)相反應(yīng)蛋白富集[11]。T2DM及CHD均被認(rèn)為是慢性炎癥反應(yīng)參與的疾病。本研究中，T2DM組后T2DM+CHD組、CHD組后T2DM+CHD組患者的TC、TG、LDL-C均未與NC組有明顯差異，但HDL-C水平均呈現(xiàn)明顯降低(P<0.05)，推測(cè)HDL-C下降仍與T2DM、CHD的發(fā)生有關(guān)，但其功能尚不清楚。SAA屬于急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，可替代HDL組分中的apoA-I，當(dāng)HDL組分中SAA含量升高時(shí)，HDL結(jié)合血管管壁蛋白多糖成分的能力增強(qiáng)，可導(dǎo)致大量HDL沉積于動(dòng)脈內(nèi)膜而引起過(guò)度氧化修飾，導(dǎo)致血管壁損傷及動(dòng)脈粥樣硬化，且血漿HDL富含SAA時(shí)血管平滑肌細(xì)胞及單核細(xì)胞生成炎癥因子將明顯增多[12]。由此推測(cè)，HDL中SAA富集可引起HDL的抗炎等功能異常，從而誘發(fā)疾病狀態(tài)。hs-CRP是發(fā)現(xiàn)較早也是當(dāng)前研究最多的經(jīng)典急性時(shí)相反應(yīng)蛋白之一，其血漿水平被證實(shí)與CHD的病情及臨床預(yù)后密切相關(guān)。IL-6及MCP-1均屬于促炎性細(xì)胞因子，在動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程中具有重要作用，可能與CHD的發(fā)生及發(fā)展有關(guān)[13]。

本研究結(jié)果顯示，T2DM組、CHD組、T2DM+CHD組患者的SAA、hs-CRP、IL-6、MCP-1水平均較NC組明顯升高(P<0.05)。提示T2MD及CHD患者體內(nèi)均具有不同程度的慢性炎癥反應(yīng)。同時(shí)，T2DM+CHD組的升高較單純T2DM組及CHD組更顯著(P<0.05)。提示上述指標(biāo)參與了T2DM及CHD的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程，且在兩者并發(fā)存在時(shí)升高更為明顯。相關(guān)性分析顯示，NC組的HDL-C、SAA與hs-CRP、IL-6、MCP-1均無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)，在T2DM組和T2DM+CHD組中，HDL-C與IL-6、MCP-1并未顯示出明顯相關(guān)性(P>0.05)，HDL-C僅與hs-CRP表現(xiàn)出弱負(fù)相關(guān)性(P<0.05)，而這種關(guān)聯(lián)性在單純CHD患者中消失(P>0.05)。但是的是，無(wú)論在T2DM、T2DM+CHD還是單純CHD患者中，HDL中SAA均與hs-CRP、IL-6、MCP-1呈現(xiàn)較好正相關(guān)性(P<0.05)。提示HDL中SAA較HDL-C能夠更好地反映疾病狀態(tài)及CHD風(fēng)險(xiǎn)，且與炎癥狀態(tài)密切相關(guān)，這與研究[14-15]結(jié)果基本相符。

ICAM-1、VCAM-1、THP-1是介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞之間、細(xì)胞與細(xì)胞基質(zhì)作用的重要糖蛋白，可介導(dǎo)炎性細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)與其對(duì)血管壁的黏附，故在慢性炎癥及血管損傷情況下可明顯升高。ICAM-1和VCAM-1能夠較為準(zhǔn)確地反映血漿HDL的抗炎作用，THP-1則主要反映內(nèi)皮細(xì)胞黏附能力，均參與了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程[16]。本研究中，T2MD、CHD、T2DM+CHD組的ICAM-1、VCAM-1和THP-1含量均較NC組明顯升高，且T2DM+CHD組明顯高于其余兩組。進(jìn)一步相關(guān)性分析亦顯示，病例組的HDL-C與ICAM-1、VCAM-1、THP-1關(guān)系不明顯，但SAA均與ICAM-1、VCAM-1、THP-1呈現(xiàn)顯著正相關(guān)性，且以T2DM+CHD組相關(guān)性最強(qiáng)。同時(shí)，比較T2DM組與CHD組發(fā)現(xiàn)，T2DM組的ICAM-1、VCAM-1、THP-1、IL-6、MCP-1、SAA、hs-CRP升高均較CHD更為明顯，且SAA與其余各因子之間的相關(guān)性亦更為明顯。提示SAA可能通過(guò)影響HDL的抗炎功能而參與CHD的發(fā)病過(guò)程，而在T2DM患者中可能因HDL功能的改變更明顯而導(dǎo)致其CHD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)升高，或后期發(fā)生CHD時(shí)這種改變更為明顯。

綜上所述，老年T2DM和CHD患者均具有HDL功能受損，且在T2MD伴CHD時(shí)HDL功能下降更為明顯，SAA水平越高則VCAM-1、ICAM-1及炎性細(xì)胞因子水平越高，HDL抗炎能力、抗黏附及血管保護(hù)效應(yīng)越弱。