花葉海棠組織培養(yǎng)技術(shù)分析

達(dá)煥云

（青海省瑪可河林業(yè)局王柔林場(chǎng)，青海班瑪 814300）

1 花葉海棠的生長(zhǎng)習(xí)性

花葉海棠生長(zhǎng)在叢林或丘陵中，海拔為1 500～4 000 m，屬于薔薇科蘋果屬植物[1]。長(zhǎng)勢(shì)良好的花葉海棠，其植株高度能達(dá)到8 m，枝葉呈細(xì)長(zhǎng)圓柱形，花朵為傘狀，花朵數(shù)量一般為4～6朵。當(dāng)果實(shí)成熟后，呈現(xiàn)為小球狀，5月開花、9月結(jié)果。在我國(guó)，花葉海棠主要分布在四川、甘肅、青海、內(nèi)蒙古地區(qū)，兼具經(jīng)濟(jì)價(jià)值和藥用價(jià)值，因此已經(jīng)大規(guī)模廣泛種植，顯著提高了當(dāng)?shù)氐慕?jīng)濟(jì)水平。但是，花葉海棠的培育種植難度大，不僅種子發(fā)芽率低，而且枝條采集數(shù)量有限，使得組織培養(yǎng)技術(shù)研究工作具有重要意義[2]。

2 花葉海棠組織培養(yǎng)的試驗(yàn)方法

花葉海棠來源于青海省瑪可河林區(qū)，選擇萌發(fā)的半木質(zhì)化枝條，枝條生長(zhǎng)健康，經(jīng)檢查沒有病蟲害。具體的試驗(yàn)操作如下。

2.1 消毒將花葉海棠枝條上的莖、葉剪掉，枝條分段，每段長(zhǎng)度為15～20 cm，然后使用洗衣粉刷洗，并在流水下沖洗30 min。在工作臺(tái)上，先用酒精振蕩消毒5 min，再用氯化汞溶液振蕩消毒10 min，最后使用無菌水清洗5～8次。完成后，剪成長(zhǎng)度為1.5 cm的小段，放在MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)，溫度設(shè)置為23～25 ℃，pH值為5.8～6.0。在培養(yǎng)過程中，加入不同濃度的細(xì)胞分裂素、不同類型的生長(zhǎng)素，光照時(shí)間12 h/d，強(qiáng)度為 2 500 ～ 3 000 Lx。

2.2 芽誘導(dǎo)在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，加入0.6%瓊脂、3%蔗糖，然后添加不同濃度的6-BA、IAA、NAA，觀察發(fā)芽時(shí)間、誘導(dǎo)率、生長(zhǎng)情況。結(jié)果顯示：對(duì)于1.0 mg/L的5-BA、1.5 mg/L的IAA、0.2 mg/L的NAA，花葉海棠的誘導(dǎo)率最高為92.6%，發(fā)芽率最高為72.0%，葉片呈綠色，生長(zhǎng)健壯，形成叢生芽。

2.3 分化培養(yǎng)在誘導(dǎo)后的腋芽中分別選擇100株，接種在加入不同濃度的6-BA、NAA培養(yǎng)基上，15 d后觀察腋芽的生長(zhǎng)和分化情況。結(jié)果顯示：對(duì)于1.0 mg/L的6-BA、0.1 mg/L的NAA、6.5 g/L的瓊脂、3%的蔗糖培養(yǎng)基，腋芽分化系數(shù)較高為4.8，葉色綠比例最高為80%，且沒有出現(xiàn)玻璃化、褐化。

2.4 復(fù)壯培養(yǎng)試管苗在培養(yǎng)過程中，會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)不良的小苗、弱苗，此時(shí)要進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，降低細(xì)胞分裂素濃度，提高生長(zhǎng)素濃度，以提高幼苗的生長(zhǎng)能力。其中，6-BA濃度降低至0.5 mg/L，NAA濃度維持在0.1 mg/L，IAA濃度提高至1.0 mg/L，能有效提高幼苗移栽的成活率。

2.5 生長(zhǎng)素幼苗經(jīng)復(fù)壯培養(yǎng)后，進(jìn)行生根誘導(dǎo)，加入不同濃度的生長(zhǎng)素。選取100株高度為2～3 cm的幼苗，接種在不同濃度生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基上，觀察生根情況。

2.6 試管苗移栽試管苗有3個(gè)以上根系，且根長(zhǎng)5～8 mm，就可以轉(zhuǎn)移到溫室進(jìn)行煉苗。7 d后，開蓋煉苗3 d，取出小苗洗凈培養(yǎng)基，移栽到不同基質(zhì)上，將溫度控制在25～28 ℃，濕度控制在85%～90%，10～15 d后觀察移栽成活情況。

3 試驗(yàn)結(jié)果分析

3.1 生長(zhǎng)素對(duì)幼苗生根的影響結(jié)果顯示，1/2MS+0.6 mg/L的IBA+0.2 mg/L的NAA，以及0.6%的瓊脂、1.5%的蔗糖培養(yǎng)基，花葉海棠幼苗的生根率最高，根系發(fā)達(dá)，生長(zhǎng)情況良好，是試管苗生根的最佳培養(yǎng)基，如表1所示。

3.2 不同基質(zhì)的移栽結(jié)果結(jié)果顯示，草炭、蛭石、珍珠巖為2∶1∶1的基質(zhì)，移栽苗的生根時(shí)間最短，生根率和成活率高，且小苗生長(zhǎng)情況良好，是小苗移栽的最佳基質(zhì)，如表2所示。

表1 不同濃度的生長(zhǎng)素對(duì)幼苗生根的影響

表2 不同基質(zhì)對(duì)幼苗的移栽結(jié)果

4 結(jié)語

花葉海棠的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和藥用價(jià)值高，但人工培育栽植難度大。文中通過試驗(yàn)分析，可知不同培養(yǎng)基、基質(zhì)的配比，會(huì)影響發(fā)芽、生根、幼苗生長(zhǎng)，結(jié)論如下：（1）1.0 mg/L的5-BA+1.5 mg/L的IAA+0.2 mg/L的NAA培養(yǎng)基，誘導(dǎo)發(fā)芽率最高；（2）1.0 mg/L的6-BA+0.1 mg/L的NAA+6.5 g/L的瓊脂+3%的蔗糖培養(yǎng)基，腋芽分化情況最好；（3）1/2MS+0.6 mg/L的 IBA+0.2 mg/L的 NAA+0.6%的瓊脂+1.5%的蔗糖培養(yǎng)基，幼苗生根率最佳；（4）草炭、蛭石、珍珠巖為2∶1∶1的基質(zhì)，小苗移栽后的生根率和成活率最高。