硫酸蒽酮法測定柑橘屬植物多糖的研究

程立超，徐祺

(黑河學(xué)院，黑龍江 黑河 164300)

柑橘屬(CitrusL.)屬蕓香科(Rutaceae)植物，在我國主要分布于長江流域及以南地區(qū)，資源豐富，有些種類可作為中藥材用于臨床治療[1-3]。柑橘屬植物中的維生素C、維生素P的含量非常豐富，作為食用和藥用，具有增強(qiáng)免疫力、疏通血管、保護(hù)肝臟、健脾養(yǎng)胃、消除疲勞、抗癌等作用[4-9]。本研究采取硫酸蒽酮法檢測丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、蘆柑果皮多糖的含量，可為以后的實驗做好鋪墊準(zhǔn)備，更科學(xué)的選擇實驗材料。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗儀器、試劑及材料

儀器：電子天平(1/10000)，恒溫水浴鍋(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)，分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)，容量瓶，玻璃棒，試管，量筒，研缽。

試劑：濃硫酸，蒽酮，無水乙醇，無水葡萄糖。

材料：丑橘果皮，甜橙果皮，甜心柚果皮，血橙果皮，蘆柑果皮。

1.1.2 供試藥品的制備

取5支試管，分別加入冷凍處理后研磨過的丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、蘆柑果皮，加80%的乙醇溶液8 mL，在90 ℃水浴鍋中加熱1 h，之后過濾出提取液放置在新試管中，標(biāo)號為丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、蘆柑。

向空試管中加入80%的乙醇溶液8 mL，然后加入蒽酮溶液2 mL，置于90 ℃水浴鍋中1 h。作為空白對照組。

1.1.3 實驗材料的處理

分別稱取丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、蘆柑5種新鮮果皮10 g，將其放入冰箱中冷凍8 h，將研缽放入冰箱內(nèi)冷凍8 h，之后將丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、蘆柑新鮮果皮研磨至顆粒狀，分別置于燒杯中備用。

1.1.4 硫酸蒽酮溶液的配制

取0.4 g蒽酮粉末溶于100 mL 80%硫酸中，邊加邊攪拌至黃色透明溶液，轉(zhuǎn)移在磨口瓶中，充分溶解后冷卻至室溫，現(xiàn)用現(xiàn)配制。

1.2 實驗步驟

移取丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、蘆柑的5組果皮多糖提取液1 mL加入10 mL容量瓶中，定容后取2 mL加入到10 mL容量瓶中，加入2 mL硫酸蒽酮溶液，加蒸餾水定容。搖勻后，放置室溫5 min，后移到試管中放到90 ℃水浴鍋中加熱15 min，冷卻至室溫。將分光光度計預(yù)熱后，將對照組移入第一個比色皿中，其余3個分別放蘆柑，丑橘，甜橙的提取液。選擇620 nm波長檢測。檢測完畢后對照組不動，其余3組取出，換上血橙、甜心柚進(jìn)行檢測，得出5種材料吸光度。帶入到標(biāo)準(zhǔn)曲線中，得到含糖量。

2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

第一步取無水葡萄糖1.04 g加入10 mL容量瓶中，以蒸餾水混合溶解稀釋并定容，定容后濃度為1 mg/mL。第二步分別移取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，置于已編號的10 mL容量瓶中，加蒸餾水定容。第三步分別吸取上述溶液各1.0 mL，再加入5 mL硫酸蒽酮溶液，搖勻后，室溫5 min，90 ℃水浴15 min，冷卻至室溫?？瞻讓φ眨? mL蒸餾水加入硫酸蒽酮溶液5 mL，搖勻后，室溫放置5 min，然后置于90 ℃水浴15 min，冷卻至室溫；通過計算得濃度C與吸光度A的線性方程y=0.5346x+0.0814。實驗數(shù)據(jù)見圖1。

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度為0時吸光度為0.0814；當(dāng)濃度為0.5 mg/mL時，吸光度為0.3956；標(biāo)準(zhǔn)液濃度為1 mg/mL時，吸光度為0.6357；標(biāo)準(zhǔn)液濃度為1.5 mg/mL時，吸光度為0.8358；標(biāo)準(zhǔn)液濃度為2 mg/mL時，吸光度為1.0862；標(biāo)準(zhǔn)液濃度為2.5 mg/mL時，吸光度為1.4179。

3 結(jié)果與分析

3.1 柑橘屬5種果皮的吸光度比較

使用硫酸蒽酮法對研磨后的丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、蘆柑果皮進(jìn)行處理，選用分光光度計在620 nm處檢測5種果皮吸光度。丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、蘆柑5種果皮吸光度如表1。

表1 柑橘屬5種果皮的吸光度

柑橘屬植物5種果皮的吸光度分別為：丑橘果皮1.506、甜橙果皮0.535、甜心柚果皮0.528、血橙果皮0.281、蘆柑果皮0.894。血橙果皮的吸光度最低，甜心柚和甜橙果皮吸光度相近，丑橘果皮的吸光度最高。

3.2 柑橘屬5種果皮的多糖含量分析

將得出的數(shù)據(jù)帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式y(tǒng)=0.5346x+0.0814得到含糖量。柑橘屬植物5種果皮含糖量分別為丑橘果皮2.665 mg/mL、甜橙果皮0.8485 mg/mL、甜心柚果皮0.8354 mg/mL、血橙果皮0.3734 mg/mL、蘆柑果皮1.52 mg/mL。見圖2。

圖2 柑橘屬5種果皮的多糖含量

通過計算得出柑橘屬植物5種果皮的含糖量百分比為丑橘果皮26.65%、甜橙果皮8.49%、甜心柚果皮8.35%、血橙果皮3.73%、蘆柑果皮15.2%。

根據(jù)圖中數(shù)據(jù)可得知，血橙果皮中含糖量在5種果皮中最低，其次為甜心柚果皮、甜橙果皮、蘆柑果皮，丑橘果皮中含糖量在5種果皮中最高。甜橙果皮和甜心柚果皮含糖量差距不大。

利用分光光度計采用硫酸蒽酮法檢測柑橘屬丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、蘆柑果皮的多糖含量。結(jié)果顯示，血橙果皮中含糖量在5種果皮中最低，其次為甜心柚果皮、甜橙果皮、蘆柑果皮，丑橘果皮中含糖量在5種果皮中最高。甜心柚果皮和甜橙果皮的含糖量差距不大。