FFA上調(diào)AMPK/ Vimentin促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞PC-3的增殖、侵襲和遷移

陳柯茹，王競(jìng)州，王翠喆，唐慧，哈曉丹，鄧玉春，張雪婷，李雪，馮家樂(lè)，謝建新，張君*

(1石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院/新疆地方病與民族高發(fā)病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 石河子 832002；2石河子大學(xué)科研處，新疆 石河子 832002)

前列腺癌(Prostate Cancer,PCa)是最常見(jiàn)的男性泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，居男性惡性腫瘤發(fā)病率第二位，致死率第五位[1]。肥胖是PCa發(fā)生發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素之一，并且與PCa的惡性程度密切相關(guān)。肥胖后，體內(nèi)過(guò)多的游離脂肪酸(Free Fatty Acid,FFA)蓄積與PCa發(fā)生密切相關(guān)[2]，而FFA導(dǎo)致前列腺癌發(fā)生的具體機(jī)制尚不十分明確。

肥胖引起體內(nèi)FFA升高引起能量代謝異常，最終導(dǎo)致前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展[3]。作為細(xì)胞能量代謝的調(diào)節(jié)器，磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)能夠感受細(xì)胞內(nèi)AMP濃度及AMP/ATP的比值變化，通過(guò)一系列復(fù)雜而精準(zhǔn)的調(diào)節(jié)機(jī)制維持能量代謝平衡[3]。AMPK在不同腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮不同的作用。

有文獻(xiàn)報(bào)道，AMPK具有一定的促血管生成和促腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的功能，同時(shí)，也有研究表明AMPK通過(guò)抑制TSC-mTOR信號(hào)通路，發(fā)揮抑癌的作用[4]。AMPK的活化，能夠抑制結(jié)腸癌細(xì)胞系SW480的增殖、侵襲和遷移[5]。AMPK在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有促癌和抑癌的雙重作用。

Tennakoon J B等[6]發(fā)現(xiàn)，雄激素可以與AMPK-PGC-1α信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)(一種已知的穩(wěn)態(tài)機(jī)制)的協(xié)同作用，促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。亦有文獻(xiàn)表明，新型的AMPK激活劑可通過(guò)阻止脂肪生成來(lái)抑制前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)[7]。AMPK是否在肥胖條件下導(dǎo)致FFA水平升高，繼而在促進(jìn)前列腺癌發(fā)生發(fā)展的過(guò)程中發(fā)揮作用，尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。

本研究通過(guò)探討FFA對(duì)人前列腺癌細(xì)胞PC-3生物學(xué)行為的影響及可能機(jī)制，將為闡明肥胖相關(guān)前列腺癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，以及臨床預(yù)防提供新的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 FFA混合液的配制

用DMSO(Sigma，美國(guó))分別將油酸(OA) (Sigma，美國(guó))和棕櫚酸(PA) (Sigma，美國(guó))稀釋為0.67 mol/L和0.33 mol/L的母液,4 ℃保存。將油酸(OA)和棕櫚酸(PA)按 2∶1制成混合液。用含有1% BSA(中杉金橋，北京)的培養(yǎng)基調(diào)配成使用前所需的濃度。

1.2 人前列腺癌細(xì)胞PC-3的體外培養(yǎng)及生物學(xué)行為的檢測(cè)

1.2.1 人前列腺癌細(xì)胞PC-3的體外培養(yǎng)

人前列腺癌細(xì)胞PC-3購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。PC-3細(xì)胞在10%胎牛血清(Biological Industries，以色列)+F12培養(yǎng)液(Life technologies,美國(guó))+1%青霉素-鏈霉素(Life technologies,美國(guó))條件下，于37 ℃、5%CO2孵育箱中培養(yǎng)。

1.2.2 游離脂肪酸篩選

采用F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸PC-3細(xì)胞后，將細(xì)胞懸液以每孔1.5×104個(gè)細(xì)胞接種于96孔板，每組設(shè)置3個(gè)平行孔，將FFA混合液的母液與PC-3培養(yǎng)基按不同比例配制成不同濃度的FFA混合液(0、0.5、1.0、1.5、2.0、4.0 mmol/L)刺激PC-3細(xì)胞，于37°培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)24 h，再加入10 μL的CCK8 (北京同仁化學(xué)研究所)和100 μL F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基混合后，移入每個(gè)細(xì)胞孔中，培養(yǎng)箱孵育3.5 h，在酶標(biāo)儀(Bio-Rad公司xMarkTM，美國(guó))上讀取各孔的OD值，波長(zhǎng)為450 nm。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.3 細(xì)胞周期測(cè)定

收集各實(shí)驗(yàn)組的PC-3細(xì)胞，移入預(yù)冷的75%乙醇中，4 ℃固定過(guò)夜。PBS洗滌2遍，離心5 min，棄上清，盡量吸凈。每管樣品中加入500 μL PI/RNase Staining Buffer(Life technologies,美國(guó))使其重懸細(xì)胞，4°冰箱避光孵育30 min。置于流式細(xì)胞儀(Thermo Fisher,美國(guó))進(jìn)行細(xì)胞周期檢測(cè)。

1.2.4 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)

采用8 μm孔徑的Transwell小室(corning，美國(guó))置于24孔板(corning，美國(guó))上方，將Matrigel基質(zhì)膠(Solarbio，北京)均勻平鋪于Transwell小室的底部，且無(wú)氣泡，37 ℃培養(yǎng)箱孵育2 h，用無(wú)血清F12培養(yǎng)基將各組實(shí)驗(yàn)的PC-3細(xì)胞(3×104個(gè)/室)制成細(xì)胞懸液，移至Transwell小室的上室，下室為含10% FBS的F12培養(yǎng)基。常規(guī)培養(yǎng)24 h或48 h后取出小室，棄去上室液體，PBS清洗，4%福爾馬林 (Solarbio，北京)固定30 min，再次PBS清洗，用吉姆薩(Solarbio公司，北京)染色5 min，PBS清洗，用棉簽將上室內(nèi)部未侵襲的細(xì)胞擦去，晾干后置于載玻片上，在倒置顯微鏡(Axio Observer A1，德國(guó))下隨機(jī)選取6個(gè)視野，使用Image J軟件(NIH Bethesda，美國(guó))統(tǒng)計(jì)細(xì)胞侵襲數(shù)目。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.5 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)

采用8 μm孔徑的Transwell小室置于24孔板上，不加Matrigel基質(zhì)膠，用不含血清的F12培養(yǎng)基將上述各組PC-3細(xì)胞(3×104個(gè)/室)制成細(xì)胞懸液，移至Transwell小室的上室，下室是含10% FBS的F12培養(yǎng)基。常規(guī)培養(yǎng)24 h或48 h后取出小室，棄去上室液體，PBS清洗，4%福爾馬林 (Solarbio，北京)固定30 min，PBS清洗，用棉簽將上室內(nèi)未侵襲的細(xì)胞擦去，PBS清洗，用吉姆薩染色5 min，晾干后置于載玻片上，在倒置顯微鏡下隨機(jī)選取6個(gè)視野，使用Image J軟件(NIH Bethesda，美國(guó))統(tǒng)計(jì)細(xì)胞遷移數(shù)目。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3 AMPK的過(guò)表達(dá)和干擾

1.3.1 AMPK的過(guò)表達(dá)

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期PC-3細(xì)胞用無(wú)抗生素的培養(yǎng)基重懸后接種于6孔板，置于常規(guī)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜，細(xì)胞密度約為60%～70%時(shí)方可進(jìn)行轉(zhuǎn)染,具體操作參照 Lipofectamine3000(Life technologies,美國(guó))說(shuō)明書進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)分為3組：轉(zhuǎn)染AMPK(pcDNA3.1) (購(gòu)自中國(guó)蘇州吉瑪因股份有限公司)的細(xì)胞為 Ad-AMPK組，轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒組為陰性對(duì)照組，未轉(zhuǎn)染組為空白對(duì)照組。將上述各組細(xì)胞移至常規(guī)培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染后4 h 換液，轉(zhuǎn)染48 h后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 AMPK干擾

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期PC-3細(xì)胞用無(wú)抗生素的培養(yǎng)基重懸后接種于6孔板，置于常規(guī)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜，細(xì)胞生長(zhǎng)密度約為60%～70%時(shí)方可進(jìn)行轉(zhuǎn)染，具體操作步驟參照 Lipofectamine3000說(shuō)明書進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)分為四組：轉(zhuǎn)染AMPK siRNA(購(gòu)自中國(guó)蘇州吉瑪因股份有限公司)的細(xì)胞為 si-AMPK組，F(xiàn)FA混合液處理的同時(shí)轉(zhuǎn)染AMPK siRNA為FFA+ si-AMPK組,轉(zhuǎn)染隨機(jī)序列組為陰性對(duì)照組，未轉(zhuǎn)染組為空白對(duì)照組。將上述各組細(xì)胞移至常規(guī)培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染后4 h 換液，轉(zhuǎn)染48 h后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.4 關(guān)鍵基因表達(dá)的檢測(cè)

1.4.1 實(shí)時(shí)定量PCR

使用TRIZOL(life technologies，美國(guó))試劑裂解細(xì)胞提取細(xì)胞總RNA。反轉(zhuǎn)錄體系每20 μL體系使用RNA 5 μL最終得到cDNA20 μL；反轉(zhuǎn)錄儀(Eppendorf AG,Germany)程序設(shè)置：42 ℃ 60 min，70 ℃ 15 min。使用qRT-PCR儀(ABI公司7500 Fast，美國(guó))進(jìn)行檢測(cè)mRNA表達(dá)水平。qRT-PCR程序如下：95 ℃ 4 min，45個(gè)循環(huán)：95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s,70 ℃ 40 s。AMPK序列為5′-TTGAAACCTGAAAATGTCCTGCT-3′,5′-CAGGGATGAGTTCGGCACTT-3′;Vimentin序列為5′-AGTCCACTGAGTACCGGAGAC-3′，5′-CATTTCACGCATCTG GCGTTC-3′；VEGF序列為5′-GCTTGTCAACTGCGGTTGC-3′，5′-TCCGAGAGATG AGTCAAGAGG-3′；GAPDH序列為5′-GGTGGTCTCCTCTGACTTCAA-3′；干擾片段AMPK-homo-330序列為5′-GAGGAGAGCUAUUUGAUUATT-3′，5′-UAAUCAAAUAGCUCUCCUCTT -3′。

1.4.2 Western blot

使用含1%PMSF(索萊寶科技有限公司，北京)和RIPA(索萊寶科技有限公司，北京)裂解液裂解細(xì)胞，提取細(xì)胞內(nèi)總蛋白。蛋白樣品和4×loading buffer(Thermo公司，美國(guó))按3∶1混合，100 ℃干預(yù)鍋處理10 min。10% SDS-PAG進(jìn)行電泳，將蛋白轉(zhuǎn)到NC膜、用BSA封閉2 h，以β-actin為內(nèi)參，一抗使用小鼠抗β-actin 36 kDa (中山金橋，中國(guó))，AMPK 63 kDa (Abcam)工作濃度均為1∶1000；4 ℃ 冰箱敷育過(guò)夜；TBST洗膜，分別使用對(duì)應(yīng)的二抗(中山金橋，中國(guó))工作濃度均為1∶10000室溫下培育2 h；TBST洗膜，配制化學(xué)發(fā)光液，使用ECL化學(xué)發(fā)光儀(ProteinSimple公司,美國(guó))檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行可視化蛋白質(zhì)(FluorChem HD2,USA)拍照，Photoshop軟件圖像處理。

1.5 數(shù)據(jù)分析

使用SPSS 20.0版軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。當(dāng)數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布時(shí)，使用兩個(gè)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)評(píng)估組間差異。P<0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 高濃度FFA混合液促進(jìn)PC-3細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移，同時(shí)可上調(diào)AMPK，Vimentin和VEGF的表達(dá)

運(yùn)用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒CCK8檢測(cè)不同濃度FFA混合液(0、0.5、1.0、1.5、2.0、4.0 mmol/L)對(duì)PC-3細(xì)胞的毒性作用，結(jié)果提示1.5 mmol/L FFA混合液對(duì)PC-3細(xì)胞的毒性作用最小，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)(圖1A)。用1.5 mmol/L FFA混合液處理PC-3細(xì)胞48 h后，細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，F(xiàn)FA混合液干預(yù)組處于G0/G1期的PC-3細(xì)胞數(shù)量顯著減少，而處于S期的PC-3細(xì)胞數(shù)量顯著增加(P<0.05)(圖1B)。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：1.5 mmol/L FFA混合液處理48 h后，PC-3細(xì)胞的侵襲和遷移能力顯著高于對(duì)照組(P<0.05)(圖1C)。1.5 mmol/L FFA處理PC-3細(xì)胞48 h后，與對(duì)照組相比，F(xiàn)FA混合液處理組的AMPK，Vimentin(侵襲遷移相關(guān)基因)和VEGF(血管生長(zhǎng)因子)的mRNA表達(dá)水平均顯著增高(P<0.01)(圖1D)。

2.2 FFA混合液干預(yù)的同時(shí)，下調(diào)AMPK后，PC-3細(xì)胞的生物學(xué)行為被抑制， Vimentin的表達(dá)降低

FFA混合液干預(yù)的同時(shí)下調(diào)AMPK，細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與FFA單純干預(yù)組相比，處于G0/G1期和G2/M期數(shù)目顯著升高，而處于S期的PC-3細(xì)胞數(shù)目顯著降低 (P<0.05)(圖2A)。

Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與FFA單純干預(yù)組相比，PC-3細(xì)胞的侵襲和遷移能力顯著降低(P<0.01)(圖2B)。qRT-PCR結(jié)果顯示：與FFA單純干預(yù)組相比，PC-3細(xì)胞中Vimentin的表達(dá)顯著降低(P<0.01)(圖2C)。

注：t檢驗(yàn)，*表示P<0.05,**表示P<0.01圖2 FFA干預(yù)的同時(shí)下調(diào)AMPK，對(duì)PC-3細(xì)胞的生物學(xué)行為及Vimentin表達(dá)的影響

2.3 AMPK可通過(guò)調(diào)控Vimentin的表達(dá)，促進(jìn)PC-3細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移

轉(zhuǎn)染AMPK質(zhì)粒48 h后，與對(duì)照組相比，PC-3細(xì)胞內(nèi)AMPK的 mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著增高，提示上調(diào)AMPK模型構(gòu)建成功，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)(圖3A、圖3B)。

細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：過(guò)表達(dá)AMPK后處于G0/G1期的PC-3細(xì)胞數(shù)目顯著降低，而處于S期的PC-3細(xì)胞數(shù)目顯著增加(P<0.05)(圖3C)。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，PC-3細(xì)胞的侵襲和遷移能力均顯著增加(P<0.01)(圖3D)。qRT-PCR結(jié)果顯示：過(guò)表達(dá)AMPK可顯著促進(jìn)PC-3細(xì)胞Vimentin的表達(dá)，而抑制VEGF的表達(dá)(P<0.01)(圖3E)。

注：*表示與空白對(duì)照組相比P<0.05,**表示P<0.01；與陰性對(duì)照組相比，#表示P<0.05,##表示P<0.01；t檢驗(yàn)，*表示P<0.05,**表示P<0.01圖3 過(guò)表達(dá)AMPK對(duì)PC-3細(xì)胞生物學(xué)行為及Vimentin和VEGF表達(dá)的影響

轉(zhuǎn)染si-AMPK 24 h后，與對(duì)照組相比，PC-3細(xì)胞內(nèi)AMPK的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著降低(P<0.05)，提示下調(diào)AMPK模型構(gòu)建成功，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)(圖4A、圖4B)。細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與對(duì)照組相比，下調(diào)AMPK后處于G0/G1期的PC-3細(xì)胞數(shù)目顯著增加，而處于S期和G2/M期的PC-3細(xì)胞數(shù)目顯著降低 (P<0.05)(圖4C)。

Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，PC-3細(xì)胞的侵襲和遷移能力顯著降低(P<0.01)(圖4D)。qRT-PCR結(jié)果提示:下調(diào)AMPK后，可顯著抑制PC-3細(xì)胞Vimentin的表達(dá)，而VEGF的表達(dá)無(wú)差異(圖4E)。

注：t檢驗(yàn)，*表示P<0.05,**表示P<0.01圖4 下調(diào)AMPK對(duì)PC-3細(xì)胞生物學(xué)行為及Vimentin和VEGF表達(dá)的影響

3 討論

肥胖不僅與高血壓、心血管疾病、2型糖尿病及其他代謝性疾病的發(fā)生密切相關(guān)，還與腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移等過(guò)程存在一定的相關(guān)性，是多種腫瘤預(yù)后不良的關(guān)鍵因素，而肥胖如何導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展目前尚不十分明確。

肥胖導(dǎo)致體內(nèi)FFA含量升高是造成多種肥胖相關(guān)腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵。越來(lái)越多的研究表明，F(xiàn)FA信號(hào)在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，脂肪酸的攝入量與癌癥的發(fā)生密切相關(guān)，在乳腺癌患者血清中總FFA的水平顯著高于正常個(gè)體。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)FA可以促進(jìn)乳腺癌、胰腺癌細(xì)胞增殖并能增加其侵襲力[8-9]。以上研究結(jié)果提示：肥胖后脂代謝紊亂導(dǎo)致了血漿FFA水平的增加，F(xiàn)FA作為一種信號(hào)分子，可能通過(guò)參與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，此過(guò)程的具體作用機(jī)制目前尚不十分明確，有待進(jìn)一步研究。而有關(guān)FFA與前列腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，亦成為近年來(lái)相關(guān)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。有文獻(xiàn)報(bào)道，油酸通過(guò)G蛋白偶聯(lián)受體FFA1 /GPR40促進(jìn)前列腺癌的惡性表型[2]。此外，二十二碳六烯酸能夠抑制前列腺癌的發(fā)生[10]。以上文獻(xiàn)提示，不同脂肪酸在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用并不一致，并且其作用的具體分子機(jī)制目前尚不十分明確。目前已知，人體內(nèi)主要包含37種FFA，其中含量最高的為油酸和棕櫚酸。本研究將油酸和棕櫚酸按2∶1比例配成FFA混合液，處理體外培養(yǎng)的人前列腺癌細(xì)胞PC-3，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)FA混合液處理顯著增加了PC-3細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。提示FFA混合液可促進(jìn)前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展，但其具體的分子機(jī)制有待進(jìn)一步明確。

AMPK是調(diào)節(jié)能量代謝的關(guān)鍵分子，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但在不同腫瘤中發(fā)揮不同作用，具有抗腫瘤和促腫瘤的雙重作用。已有文獻(xiàn)報(bào)道，AMPK的激活可以抑制胰腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)[11]。但是，Eung K等[12]發(fā)現(xiàn)溶血磷脂酸(LPA)能夠激活A(yù)MPK，促進(jìn)卵巢癌的轉(zhuǎn)移。在腫瘤缺氧微環(huán)境中，激活A(yù)MPK可上調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子1和VEGF的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤局部侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[13]。在胰腺癌中，抑制AMPK相關(guān)蛋白激酶5(ARK5)可降低Vimentin的表達(dá)及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化效率，進(jìn)而提高了吉西他濱對(duì)胰腺癌的敏感性[14]。在前列腺癌中，AMPK同樣發(fā)揮促癌和抑癌的雙重作用。已有文獻(xiàn)報(bào)道，AICAR通過(guò)AMPK/mTOR依賴性途徑誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞的凋亡并抑制其遷移和侵襲[15]。相反，Jennakoon J等發(fā)現(xiàn)雄激素可以配合AMPK-PGC-1α信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)來(lái)促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)[6]。本研究結(jié)果表明：FFA混合液可促進(jìn)PC-3細(xì)胞的AMPK、Vimentin及VEGF表達(dá)，提示FFA可能通過(guò)促進(jìn)上述因子的表達(dá)增強(qiáng)了PC-3細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力。

為了進(jìn)一步明確AMPK、Vimentin及VEGF在FFA促進(jìn)PC-3細(xì)胞生物學(xué)行為中的相互關(guān)系，本研究在用FFA混合液處理PC-3細(xì)胞的同時(shí)，下調(diào)AMPK的表達(dá)后發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)FA混合液對(duì)PC-3細(xì)胞生物學(xué)行為的促進(jìn)作用，以及對(duì)Vimentin的上調(diào)作用均被逆轉(zhuǎn)。以上結(jié)果提示：高水平的FFA可通過(guò)上調(diào)AMPK以及Vimentin的表達(dá)促進(jìn)前列腺癌的發(fā)生發(fā)展。此外，本研究在PC-3細(xì)胞中分別上/下調(diào)AMPK后發(fā)現(xiàn)：AMPK可通過(guò)促進(jìn)Vimentin的表達(dá)增強(qiáng)PC-3細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力。而VEGF的表達(dá)則與已有文獻(xiàn)不一致，呈現(xiàn)出與AMPK表達(dá)負(fù)相關(guān)的趨勢(shì)，結(jié)合上述FFA促進(jìn)VEGF的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，提示FFA上調(diào)AMPK促進(jìn)前列腺癌生物學(xué)行為可能不是通過(guò)VEGF來(lái)實(shí)現(xiàn)，可能存在其它的分子機(jī)制，有待后續(xù)研究加以證實(shí)。

綜上所述，本研究在體外培養(yǎng)PC-3細(xì)胞的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)高濃度的FFA混合液可通過(guò)上調(diào)AMPK、Vimentin的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力。上述機(jī)制的闡明，將為明確肥胖相關(guān)前列腺癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制提供新的理論依據(jù)，同時(shí)為腫瘤的臨床治療提供可能的靶點(diǎn)。