非小細(xì)胞肺癌患者EGFR、ALK基因突變及臨床病理特征與預(yù)后的相關(guān)性研究

劉月紅 蔣軍紅

肺癌發(fā)病率逐年升高，惡性程度高，死亡率高[1-2]，其中以非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)為主，發(fā)病率占肺癌總發(fā)病率的85%[3]，確診時(shí)為中晚期患者占30%～40%，傳統(tǒng)化療藥物療效有限。近年來(lái)，針對(duì)特定基因突變的靶向藥物在治療NSCLC上顯示了良好的治療效果[4]。其中，表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)的基因突變及間變性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase, ALK)的基因重排是NSCLC中常見(jiàn)的基因突變類(lèi)型，針對(duì)它們的酪氨酸激酶抑制劑(Tyrosine kinase inhibitors，TKI)類(lèi)藥物治療特異性高，效果好[4]，不良反應(yīng)輕，我國(guó)《CSCO原發(fā)性肺癌診療指南2016》[5]中已TKIs列為EGFR/ALK突變患者的一線(xiàn)用藥，也是EGFR/ALK敏感性的預(yù)測(cè)指標(biāo)和使用判斷標(biāo)準(zhǔn)。本研究對(duì)262例診斷本院為NSCLC患者的臨床病理特征及EGFR、ALK突變情況進(jìn)行分析，跟蹤隨訪(fǎng)患者的轉(zhuǎn)歸及生存時(shí)間，分析兩者相關(guān)性，為NSCLC臨床的診斷及用藥提供依據(jù)。

資料與方法

一、一般資料

收集2015年1月至2018年1月我院病理確診的NSCLC病例262例，所有患者經(jīng)病理、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)穿刺活檢或纖維支氣管鏡下刷檢確診為NSCLC。其中男性164例，女性98例；腺癌167例，鱗癌48例，腺鱗癌1例，其他40例。

回顧性收集患者的一般資料及病理資料，如年齡、性別、分期、家族史、吸煙史、病理類(lèi)型等資料，記錄患者EGFR的突變情況。研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書(shū)。

二、 方法

1 樣本 石蠟包埋手術(shù)切除的樣本，切片后HE染色，光學(xué)顯微鏡觀(guān)察確認(rèn)腫瘤含量超過(guò)80%，保存?zhèn)溆谩?/p>

2 EGFR及ALK的檢測(cè) 采用德國(guó)QIAGEN公司的QIAmp DNA 提取試劑盒提取患者DNA，采用Thermo Fisher 公司的Nanodrop 2000測(cè)定DNA濃度，以O(shè)D260/280在1.8至2.0間為合格。采用廈門(mén)艾德生物醫(yī)藥科技有限公司的EGFR基因突變定性試劑盒及ALK融合基因定性突變是結(jié)合進(jìn)行EGFR和ALK基因的檢測(cè)。按說(shuō)明書(shū)，通過(guò)擴(kuò)增組織突變系統(tǒng)(ARMS-PCR法)及RT-PCR分別測(cè)定樣本EGFR及ALK基因突變情況。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料用(%)來(lái)描述，運(yùn)用χ2檢驗(yàn)Fisher確切概率法對(duì)計(jì)數(shù)資料進(jìn)行比較；運(yùn)用Kaplan-Meier法繪制生存曲線(xiàn)、log-rank比較各組生存曲線(xiàn)的分布差異，運(yùn)用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型對(duì)影響非小細(xì)胞肺癌患者死亡的因素進(jìn)行多因素分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、262例NSCLC患者突變情況與臨床病理特征

262例NSCLC患者中，168例為野生型，ALK突變12例，突變率4.6%；EGFR突變82例，突變率31.30%，其中18號(hào)外顯子突變2例，19號(hào)外顯子突變37例，20號(hào)外顯子突變9例，21號(hào)外顯子突變31例；各組間年齡、病理類(lèi)型比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；性別、吸煙史、家族史、臨床分型、腫瘤位置比較無(wú)顯著性差異，P>0.05(見(jiàn)圖1、2)。

二、EGFR、ALK的生存曲線(xiàn)

Kaplan-Meier法進(jìn)行總生存期(overall survival，OS)生存分析結(jié)果顯示：Wild type組中位OS時(shí)間11.6月，ALK組中位OS時(shí)間15.0月，EGFR組中位OS時(shí)間36.8月，EGFR組OS明顯優(yōu)于ALK組OS時(shí)間及Wild type組OS時(shí)間，P<0.05；細(xì)分EGFR不同亞型，EGFR18號(hào)外顯子陽(yáng)性組OS時(shí)間7.9月，EGFR19號(hào)外顯子突變組OS時(shí)間39.0月，EGFR20號(hào)外顯子突變組OS時(shí)間21.0月，EGFR21號(hào)外顯子突變組OS時(shí)間36.6月，EGFR雙突變組OS時(shí)間30.5月，EGFR19號(hào)外顯子突變組、21號(hào)外顯子突變組OS生存時(shí)間顯著高于18號(hào)外顯子突變組和20號(hào)外顯子突變組，P<0.05(見(jiàn)圖1)。

表1 NSCLC患者突變情況與臨床病理特征[n(%)]

注：組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，*P<0.05

表2 各位點(diǎn)EGFR突變頻率[n(%)]

三、COX回歸分析臨床病例參數(shù)及EGFR、ALK對(duì)OS的影響

采用COX回歸，將各病理特征參數(shù)、EGFR、ALK作為自變量進(jìn)行多因素分析，結(jié)果顯示，EGFR陰性(RR=15.751, 95%CI: 9.252～26.816)、鱗癌(RR=18.344，95%CI: 6.187～54.388)為OS的危險(xiǎn)因素。

圖1 A.EGFR、ALK、Wild type的生存曲線(xiàn)；B. EGFR分子亞型的生存曲線(xiàn)

表3 COX回歸分析臨床病例參數(shù)及EGFR、ALK對(duì)OS的影響

討 論

非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占全部肺癌發(fā)病率的80%左右，EGFR又是NSCLC中突變率最高的類(lèi)型，ALK基因突變中占比較小[6-7]，我們的研究結(jié)果顯示，EGFR組中位OS時(shí)間15.0月，EGFR組OS明顯優(yōu)于ALK組OS時(shí)間及野生型(Wild type)組OS時(shí)間，同時(shí)，EGFR陰性也是OS時(shí)間的獨(dú)立保護(hù)因素，說(shuō)明EGFR突變的NSCLC患者生存時(shí)間更長(zhǎng)?，F(xiàn)在關(guān)于EGFR突變非小細(xì)胞肺癌的治療研究較多也較深入，所以分子靶向治療較化療呈現(xiàn)出明顯的生存優(yōu)勢(shì)[8]。同時(shí)結(jié)果也提示NSCLC患者進(jìn)行基因突變檢測(cè)的重要性。

對(duì)于EGFR的不同亞型，研究結(jié)果顯示21號(hào)外顯子突變組OS生存時(shí)間顯著高于18號(hào)外顯子突變組和20號(hào)外顯子突變組，可能的原因是：EGFR是肺癌常見(jiàn)的突變類(lèi)型，靶向治療相對(duì)也較成熟明確，但仍然不同亞型間靶向藥的耐藥情況不同[9]，19del和21號(hào)L858R是常見(jiàn)的敏感突變，一般一、二、三代TKI治療有效率均較好[10]，可以達(dá)到70%～80%，而20號(hào)外顯子插入性突變是一類(lèi)不常見(jiàn)的激活性改變，相關(guān)研究結(jié)果顯示攜帶此類(lèi)突變的患者對(duì)EGFR-TKI應(yīng)答不佳[11]。一般EGFR18號(hào)外顯子突變是僅占EGFR突變的3%的罕見(jiàn)類(lèi)型[12]，本研究結(jié)果中僅占2.3%，對(duì)于18號(hào)外顯子G719X突變一代TKI的療效較差，且2代藥物也缺少相應(yīng)的研究數(shù)據(jù)[13]，故對(duì)于18號(hào)外顯子TKI治療可選擇性較少。由于本研究并未將治療方法納入研究，可在進(jìn)一步研究中比較不同EGFR突變亞型生存時(shí)間的影響因素。但對(duì)于ALK基因的亞型，由于本研究ALK突變患者樣本量有限，我們并未對(duì)ALK的亞型做細(xì)分和比較，哪種亞型對(duì)ALK的OS生存時(shí)間有影響并不清楚，所以ALK組的OS生存時(shí)間顯著低于EGFR組可能是本研究12例ALK突變患者中某種罕見(jiàn)類(lèi)型的治療情況不佳造成的[14]。

COX回歸結(jié)果顯示鱗癌(RR=18.344，95%CI: 6.187～54.388)S時(shí)間的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，這與其他研究結(jié)果相似[15]，這可能與TKI治療對(duì)非腺癌陽(yáng)性EFGR突變患者的治療療效一直存在爭(zhēng)議有關(guān)，鱗癌在非小細(xì)胞肺癌中相對(duì)占比較少，已有許多研究顯示在非小細(xì)胞肺癌中，化療藥物具有組織學(xué)類(lèi)型選擇性，培美曲塞、吉非替尼的非鱗癌患者的生存期明顯優(yōu)于鱗癌患者[16-17]，易瑞沙也發(fā)現(xiàn)在腺癌患者中更加有優(yōu)勢(shì)。除此之外，在一項(xiàng)亞洲人群的薈萃分析中也顯示，非腺癌患者RR、中位 PFS 時(shí)間腺癌相比均有明顯的劣勢(shì)，認(rèn)為此原因可能與PIK3CA 突變及高表達(dá)在鱗癌患者中發(fā)生率較高有關(guān)[18]。

綜上所述，EGFR突變狀態(tài)、病理類(lèi)型對(duì)非小細(xì)胞肺癌預(yù)后具有良好的預(yù)測(cè)價(jià)值，鱗癌和EGFR陰性患者生存期短，對(duì)比EGFR基因少見(jiàn)突變(18號(hào)外顯子、20號(hào)外顯子)和常見(jiàn)突變(19號(hào)外顯子、21號(hào)外顯子)患者的中位OS時(shí)間結(jié)果顯示少見(jiàn)突變患者OS時(shí)間更短。但由于本樣本量有限，對(duì)于ALK亞型、小于40歲患者病例較少等有些因素，本研究所得結(jié)果需進(jìn)一步補(bǔ)充病例進(jìn)行大樣本驗(yàn)證。