重慶市渝東南少數(shù)民族地區(qū)182例學(xué)齡前期急性呼吸道腺病毒感染患兒的特征及基因分型研究

黃俊 馬華蘭 張玲 冉濤 周克儉 郭仲莉 潘峰

人腺病毒(Adenovirus, ADV)是學(xué)齡前兒童呼吸道感染的常見病原之一，可引起咽炎、肺炎和胃腸炎等多種疾病，對(duì)患者及其家屬造成嚴(yán)重影響[1]。根據(jù)免疫學(xué)和生物化學(xué)特性的不同，ADV可分為A～G共7個(gè)亞組，通常感染呼吸道的有C組、D組、E組以及部分B組ADV，根據(jù)其免疫特性的不同，ADV又可分為52個(gè)血清型，其中與呼吸系統(tǒng)有關(guān)的ADV包括B組的3型、7型、11型和14型，C組的1型、2型、5型、6型以及E組的4型[2]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，急性呼吸系統(tǒng)疾病是導(dǎo)致兒童發(fā)病和死亡的重要原因之一，其中由ADV感染引起的呼吸系統(tǒng)疾病占5%～7%[3]。ADV某些型病毒傳播迅速，可引起局部暴發(fā)流行，導(dǎo)致社會(huì)恐慌[4]。因此，有必要借助分子流行病學(xué)和基因分析的方法對(duì)ADV進(jìn)行檢測(cè)。近年來(lái)，重慶市渝東南少數(shù)民族地區(qū)學(xué)齡前期兒童呼吸道ADV感染情況較為嚴(yán)重，故此，本研究特對(duì)2018年1月～2019年1月重慶市渝東南少數(shù)民族地區(qū)來(lái)醫(yī)院就診的182例學(xué)齡前期急性呼吸道ADV感染患兒的資料進(jìn)行回顧，調(diào)查其特征，并據(jù)此提出防控建議。

資料與方法

一、臨床資料

對(duì)2018年1月～2019年1月重慶市渝東南少數(shù)民族地區(qū)來(lái)醫(yī)院就診的182例學(xué)齡前期急性呼吸道ADV感染患兒的資料進(jìn)行回顧性分析。納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)檢查確診為急性呼吸道ADV感染；均為重慶市渝東南少數(shù)民族地區(qū)的原住居民，均登記在冊(cè)且接受定期跟蹤隨訪；排除標(biāo)準(zhǔn)：認(rèn)知障礙者；合并嚴(yán)重呼吸系統(tǒng)疾病患者；臨床資料不完整患者；嚴(yán)重心肝腎功能不全患者。本研究統(tǒng)計(jì)黔江區(qū)、四縣(彭水自治縣、秀山自治縣、酉陽(yáng)自治縣、石柱自治縣)區(qū)域內(nèi)上述時(shí)間段登記入冊(cè)的學(xué)齡前期急性呼吸道ADV感染患者，共182例。

二、方法

設(shè)計(jì)調(diào)查表，對(duì)所有入選者進(jìn)行調(diào)查，調(diào)查表內(nèi)容包括性別、年齡、地區(qū)、季節(jié)、家庭收入、臨床表現(xiàn)、感染途徑、混合感染情況以及基因分型，其中年齡按照“3歲≤年齡<4歲”，“4歲≤年齡<5歲”和“5歲≤年齡<6歲”分段。季節(jié)分為春、夏、秋、冬。臨床表現(xiàn)包括頭痛、咳嗽、流清涕、打噴嚏、流淚、惡心、嘔吐、高熱驚厥、咽部充血、扁桃體腫大、其他。感染途徑包括空氣傳播、接觸傳播、糞-口途徑傳播?；旌细腥痉譃楸遣《?、呼吸道合胞病毒、博卡病毒、細(xì)菌、支原體等。

采集患者鼻或咽拭子標(biāo)本，放入4 mL采樣液中，于2～8℃條件下保存標(biāo)本，2d內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。采用QIAampDNAminikit試劑盒(德國(guó)，QIAGEN公司)提取標(biāo)本病毒核酸，然后進(jìn)行呼吸道病毒檢測(cè)，將ADV陽(yáng)性標(biāo)本接種到人喉表皮樣癌細(xì)胞(Hep-2)，待細(xì)胞病變后收集病毒分離液，采用熒光定量PCR方法鑒定分離的病毒，根據(jù)Hexongene設(shè)計(jì)PCR引物，上游引物5′-GGACAGGATGCTTCGGAGTA-3′，下游引物5′-TTCCAGTACTGTTGTAGTAC-3′。PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變形5min，94℃變形1min，54℃退火1min，72℃延伸1min，共40個(gè)循環(huán)，72℃延伸7min，將PCR產(chǎn)物物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，切膠純化后進(jìn)行序列測(cè)定，測(cè)序結(jié)果提交基因庫(kù)進(jìn)行比對(duì)以確定ADV型別。

結(jié) 果

一、性別、年齡、地區(qū)、季節(jié)、家庭收入

男性(51.65%)占比與女性(48.35%)占比基本一致；年齡段分布中“3歲≤年齡<4歲”占比最高(47.25%)；地區(qū)分布中市區(qū)占比高于縣區(qū)，黔江區(qū)占比為77.47%；季節(jié)分布中以春季(40.66%)和冬季(37.36%)高發(fā)；低收入家庭(<3000元)占比最高(67.03%)(見表1)。

表1 性別、年齡、地區(qū)、季節(jié)、家庭收入

二、臨床表現(xiàn)、感染途徑、混合感染情況

臨床表現(xiàn)分布中發(fā)熱占比最高(98.90%)，其次為咳嗽(56.04%)；感染途徑以空氣傳播(61.54%)為主；與鼻病毒混合感染者占比最高(13.19%)(見表2)。

表2 臨床表現(xiàn)、感染途徑、混合感染情況

三、基因分型

測(cè)序比對(duì)結(jié)果顯示，182例ADV標(biāo)本分屬B組、C組和E組3個(gè)亞組，其中B組ADV檢出率最高為66.49%，其次C組ADV檢出率為27.47%，E組ADV檢出率為6.04%，按照血清型分布由高到低依次為：HAdV-3(54.40%)、HAdV-1(12.09%)、HAdV-7(9.89%)、HAdV-2(7.69%)、HAdV-5(7.69%)、HAdV-4(6.04%)、HAdV-14(2.20)(見表3)。

表3 標(biāo)本測(cè)序分型結(jié)果

討 論

一、對(duì)重慶市渝東南少數(shù)民族地區(qū)學(xué)齡前期急性呼吸道ADV感染患兒流行病學(xué)特征調(diào)查的意義

ADV是引起人類急性呼吸道感染的重要病原之一，主要分布于腺體組織、扁桃體等部位，能夠引起人胚腎原代細(xì)胞病變[5]。急性呼吸道ADV在全球多個(gè)國(guó)家和地區(qū)都有爆發(fā)和流行的報(bào)道，我國(guó)尚無(wú)大規(guī)模爆發(fā)的情況，僅在局部范圍內(nèi)爆發(fā)流行，目前普遍認(rèn)為ADV多發(fā)于低年齡兒童，尤其是學(xué)齡前兒童[6]。學(xué)齡前兒童感染ADV可能導(dǎo)致肺炎等重癥感染，當(dāng)病毒大范圍流行時(shí)，相關(guān)疾病的致死率較高，急性呼吸道ADV感染誘發(fā)的疾病中，約50%的患者會(huì)繼發(fā)相關(guān)癥狀[7]。然而，ADV僅憑臨床表現(xiàn)很難判斷，診斷很大程度依賴于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。有研究報(bào)道[8]，52個(gè)ADV血清型中的部分血清型能夠引起急性呼吸道感染，并且在不同地區(qū)和不同時(shí)期流行的ADV血清型存在差異。因此，了解ADV流行病學(xué)特征以及鑒定其基因分型具有重要意義。近年來(lái)，重慶市渝東南少數(shù)民族地區(qū)學(xué)齡前期兒童急性呼吸道ADV感染率較高，務(wù)必調(diào)查感染患者流行病學(xué)特征和基因分型，才能有針對(duì)性的進(jìn)行防控，以確保當(dāng)?shù)鼐用竦慕】怠?/p>

二、本研究對(duì)于性別、年齡、地區(qū)、季節(jié)、家庭收入的調(diào)查結(jié)果分析

本調(diào)查結(jié)果顯示，男性與女性感染比例接近，性別對(duì)于感染急性呼吸道ADV沒有影響。汪東籬等[9]調(diào)查指出，ADV引起的呼吸道感染中男女比例為1:1，與本研究結(jié)果一致，提示男女急性呼吸道ADV感染發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)相近，均應(yīng)當(dāng)注意防控。在年齡段分布調(diào)查結(jié)果中，“3歲≤年齡<4歲”占比最高，與既往郝潔等[10]人報(bào)道結(jié)果相符，推測(cè)該年齡段患者自身免疫系統(tǒng)發(fā)育尚不完善，機(jī)體缺乏ADV特異性抗體，而4～6歲患者免疫系統(tǒng)逐漸發(fā)育，免疫力增強(qiáng)。本研究地區(qū)分布調(diào)查結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，市區(qū)占比遠(yuǎn)高于縣城，推測(cè)原因?yàn)槭袇^(qū)人口密度大，流動(dòng)人口多，外出游玩、聚餐次數(shù)多于縣城地區(qū)，ADV傳播擴(kuò)散的危險(xiǎn)因素相對(duì)較高。本研究季節(jié)調(diào)查結(jié)果顯示，春季和冬季發(fā)病率遠(yuǎn)高于夏季和秋季，可知ADV有明顯的季節(jié)傾向性。而許晶等[11]調(diào)查顯示，腺病毒感染全年散發(fā)，無(wú)明顯季節(jié)性。分析原因可能為我國(guó)地區(qū)間氣候差異較大，中國(guó)地域?qū)拸V，緯度跨度較大，導(dǎo)致同一季節(jié)不同地區(qū)溫度相差較大，對(duì)腺病毒活動(dòng)和傳播具有直接影響。本調(diào)查中患者感染多發(fā)于冬春季節(jié)，可能為該地區(qū)冬春季寒冷干燥，室內(nèi)通風(fēng)較少，外出時(shí)冷空氣襲擊，鼻黏膜受到刺激后，抵抗外界病菌侵襲能力降低，特別是慢性呼吸道病患者，痰液黏稠不易排出，容易滋生細(xì)菌，加重感染。家庭經(jīng)濟(jì)狀況調(diào)查結(jié)果中，月收入<3000元者占比最高，可能原因?yàn)樵率杖朐降?，可能家庭收入高群體生活條件高，衛(wèi)生意識(shí)也隨之提高，生活中能夠做到早期預(yù)防。結(jié)合上述結(jié)果與分析，提示對(duì)于“3歲≤年齡<4歲”年齡段、城區(qū)、低收入家庭的兒童以及冬春季節(jié)急性呼吸道ADV感染率較高，應(yīng)加強(qiáng)衛(wèi)生意識(shí)，做好個(gè)人防護(hù)，以降低急性呼吸道ADV感染率的風(fēng)險(xiǎn)。

三、本研究對(duì)于臨床表現(xiàn)、感染途徑、混合感染情況的調(diào)查結(jié)果分析

本研究調(diào)查結(jié)果顯示，急性呼吸道ADV感染常見臨床表現(xiàn)有發(fā)熱、咳嗽、咽部充血、流清涕、打噴嚏、扁桃體腫大等，與大多數(shù)研究結(jié)果一致[12-14]。提示應(yīng)該對(duì)上述癥狀進(jìn)行早期預(yù)防，降低感染發(fā)生率。本研究調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，急性呼吸道ADV感染的途徑主要是空氣傳播，其次是接觸傳播和糞-口途徑傳播。本研究還發(fā)現(xiàn)，混合感染占比27.47%，其中與鼻病毒感染者占比最高，可知急性呼吸道ADV感染有混合感染的風(fēng)險(xiǎn)，甚至有可能出現(xiàn)三重感染或多重感染。分析其中原因可能為病毒與宿主細(xì)胞表面受體結(jié)合介導(dǎo)病毒復(fù)制傳播，同時(shí)病毒感染對(duì)呼吸道上皮的破壞可增加細(xì)菌的黏附。因此，針對(duì)上述分析結(jié)果，該地區(qū)學(xué)齡前期兒童應(yīng)做好以下預(yù)防措施：(1)日常生活中家長(zhǎng)必須要求學(xué)齡前期兒童勤洗手，勤消毒，急性呼吸道ADV高發(fā)季節(jié)盡量減少外出，外出時(shí)應(yīng)戴口罩進(jìn)行防護(hù)。(2)日常飲食平衡膳食營(yíng)養(yǎng)，多吃蔬菜，多喝水，加強(qiáng)鍛煉，室內(nèi)勤通風(fēng)，保持環(huán)境清潔。(3)急性呼吸道ADV感染容易傳染，一旦發(fā)生疾病，及時(shí)采取治療措施，并做好隔離，避免傳染他人。

四、本研究對(duì)于基因分型的調(diào)查結(jié)果分析

本研究調(diào)查結(jié)果顯示，B組ADV檢出率最高為66.49%，其中HAdV-3血清型最高54.40%，其次為HAdV-7血清型，與盧桂蘭等[15]研究結(jié)果一致。有研究報(bào)道[16]，7型ADV更容易引起重癥肺炎，因此，根據(jù)ADV基因型特征，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)ADV分子流行病學(xué)檢測(cè)，進(jìn)一步開展疫苗研發(fā)工作，以保障學(xué)齡前期兒童健康。

綜上，重慶市渝東南少數(shù)民族地區(qū)學(xué)齡前期急性呼吸道ADV感染患兒中“3歲≤年齡<4歲”、市區(qū)、春季、低收入者的占比均偏高，多見發(fā)熱、咳嗽、咽部充血、流清涕等表現(xiàn)，多經(jīng)空氣傳播，部分患者有鼻病毒、呼吸道合胞病毒、博卡病毒混合感染，需結(jié)合上述建議加強(qiáng)防控。