仙鶴草不同提取部位對抗炎作用的研究

孟慶婷 朱自仙 楊艷 凌完成 唐當(dāng)柱

摘要：目的 考察仙鶴草不同提取部位的抗炎作用。方法 采用醋酸扭體法、二甲苯致小鼠耳腫脹法、磷酸組胺致毛細(xì)血管通透性增加實驗，探討仙鶴草醇提取部位、仙鶴草正丁醇提取部位、仙鶴草乙酸乙酯提取部位的抗炎作用。結(jié)果 與模型組比較，仙鶴草醇提取部位、正丁醇提取部位能減少醋酸所致小鼠扭體次數(shù)（P<0.05、P<0.05）、能抑制二甲苯致小鼠耳腫脹（P<0.05、P<0.05），能夠降低磷酸組胺致小鼠毛細(xì)血管通透性增加（P<0.05、P<0.05）。結(jié)論 仙鶴草具有明顯的抗急性炎癥的作用，其活性主要集中于正丁醇提取部位。

關(guān)鍵詞：仙鶴草;有效提取部位;抗炎

中圖分類號：R285 ??文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A ??文章編號：1007-2349（2020）01-0064-03

【Abstract】Objective： To study the anti-inflammatory effect of different extracted parts of Agrimonia. Methods： The experiments of acetic acid writhing method， xylene-induced ear swelling in mice， and histamine phosphate-induced increase in capillary permeability were used to explore the anti-inflammatory effects of the different parts of Agrimonia for the extraction of alcohol， n-butanol and the ethyl acetate. Results： Compared with the model group， the parts of alcohol and n-butanol could reduce the number of writhing in mice caused by acetic acid （P<0.05， P<0.05）， and could suppress xylene-induced ear swelling in mice （P<0.05， P<0.05）， and reduce the increase of capillary permeability in mice induced by histamine phosphate （P<0.05， P<0.05）. Conclusion： Agrimonia has obvious anti-inflammatory effect and its activity is mainly concentrated in the part of n-butanol extraction.

【Key words】Agrimony， effective extraction part， anti-inflammatory

仙鶴草又名脫力草、龍牙草，具有收斂止血、截瘧、止痢、解毒、補虛功效，臨床上常用于咯血、吐血等各種出血癥[1]。研究表明仙鶴草醇提取物具有一定的鎮(zhèn)痛抗炎作用[2]，但其主要活性部位尚不清楚，為探討其主要活性部位，本研究對仙鶴草采用極性分離法得到的仙鶴草醇提取物、正丁醇提取物及乙酸乙酯提取物，采用醋酸致小鼠扭體法、二甲苯致小鼠耳腫脹法及磷酸組胺致毛細(xì)血管通透性增加實驗，對仙鶴草不同提取部位進(jìn)行抗炎作用的研究，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 材料

1.1 實驗動物 SPF級，昆明種小鼠雌雄各半，18-22 g，許可證號：SCXF（遼）2015-0001。

1.2 藥物及試劑 布洛芬片，云南植物藥業(yè)有限公司（批號：20161002）;磷酸組胺，上海生工生物工程股份有限公司（批號：B326BA1896）;氫化可的松，上海麥克林生化科技有限公司（批號：C10113013）;伊文思蘭，sigma（批號：MKCB2532V）。

1.3 實驗儀器 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，型號：RE—501，山東博科科學(xué)儀器有限公司。

2 實驗方法

2.1 仙鶴草不同提取物的制備 取仙鶴草1000 g，采用70%乙醇回流提取3次，每次提取時間分別為3 h、2 h、1h共計5h，合并三次濾液，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇、真空干燥得乙醇提取部位100.10 g;取部分仙鶴草醇提取部位用超純水均勻分散，以等體積乙酸乙酯連續(xù)萃取6次，合并上層濾液，回收下層溶液濃縮干燥得乙酸乙酯提取部位25.15 g;上層濾液用等體積正丁醇萃取6次，濃縮干燥得正丁醇提取部位24.85 g。

2.2 對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 選擇健康昆明種小鼠（18-22 g）100只，隨機分為5組，每組20只，分別為模型組（超純水）、陽性藥組（布洛芬，104 mg/Kg）、仙鶴草組（仙鶴草醇提取部位、正丁醇提取部位、乙酸乙酯提取部位，40 g生藥/kg），每組雌雄各半，給藥1h后腹腔注射0.6%冰醋酸0.2 mL/只，觀察小鼠扭體反應(yīng)，并記錄小鼠記錄小鼠15 min內(nèi)出現(xiàn)的扭體次數(shù)，計算小鼠疼痛的抑制率，疼痛抑制率=（模型組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù)）/模型組扭體次數(shù)×100%[3]。

2.3 仙鶴草不同提取物的抗炎作用

2.3.1 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響 給藥方法、分組及劑量同“2.2項”，陽性組給予氫化可的松（20 mg/Kg），各組給藥后1h，分別精密吸取二甲苯10 uL均勻涂布于各組小鼠右耳上、下兩面，左耳不涂作自身對照。于涂耳30 min后處死小鼠，沿小鼠耳廓基線剪下兩耳，采用6 mm直徑打孔器于左右耳對稱部位打下耳片，用精密電子天平稱取耳質(zhì)量，計算耳腫脹度和耳腫脹抑制率。小鼠耳腫脹度=（右耳質(zhì)量-左耳質(zhì)量）/左耳質(zhì)量×100%]。小鼠耳腫脹抑制率（%）=（模型組耳腫脹度-給藥組耳腫脹度）/模型組耳腫脹度×100%[4]。

2.3.2 對磷組胺致小鼠毛細(xì)血管通透性升高的影響 給藥方法、分組及劑量同“2.3.1項”，小鼠于實驗前1天背部用8%硫化鈉脫毛（3 cm×3 cm），次日再給藥1h后在小鼠背部脫毛處中間位置皮內(nèi)注射0.1%（現(xiàn)用現(xiàn)配）磷酸組胺0.06 mL/只，隨后立即尾靜脈注射0.5%（5 mL/kg）伊文思蘭，注射伊文思蘭15 min后頸椎脫臼處死小鼠，取下小鼠藍(lán)染部位皮膚打四個孔（9 mm/孔），剪碎后浸泡于1 mL丙酮-生理鹽水（7：3）溶液中，48 h后離心（3000 r/min，10min），取上清液，于波長620 nm處測定吸光度值[5-6]。

2.4 統(tǒng)計學(xué)處理 各給藥組與模型組比較，統(tǒng)計數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用 SPSS 19.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，多組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 實驗結(jié)果

3.1 對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 與模型組比較，布洛芬對照組、仙鶴草醇提取部位、仙鶴草正丁醇提取部位能夠減少小鼠扭體次數(shù)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001、P<0.05、P<0.05），仙鶴草乙酸乙酯提取部位能夠減少小鼠扭體次數(shù)，但無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），結(jié)果如表1。

3.2 對二甲苯致小鼠耳腫脹影響 與模型組比較，氫化可的松對照組、仙鶴草醇提取部位、仙鶴草正丁醇提取部位均能抑制小鼠耳腫脹度，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001、P<0.05、P<0.05），仙鶴草乙酸酯提取部位能夠抑制小鼠耳腫脹度，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，結(jié)果如表2。

3.3 對磷酸組胺致小鼠毛細(xì)血管通透性升高的影響 與模型組比較，氫化可的松對照組、仙鶴草醇提取部位、仙鶴草正丁醇提取部位、仙鶴草乙酸乙酯提取部位均能降低小鼠毛細(xì)血管通透性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001、P<0.05、P<0.05、P<0.05），結(jié)果如表3。

4 討論

炎癥是具有血管系統(tǒng)的活體組織對致炎因子所發(fā)生的防御反應(yīng)[7]。根據(jù)炎癥發(fā)生的快慢和持續(xù)時間可分為以毛細(xì)血管通透性升高為特征的急性炎癥階段，以白細(xì)胞浸潤和巨噬細(xì)胞的吞噬為特征的亞急性階段，及以組織變性和纖維化為特征的慢性炎癥階段[8-10]。目前，臨床使用抗炎藥有非甾體類、甾體類抗炎藥。非甾體類藥物長時間服用易引起胃腸道、肝、腎損傷甚至消化道出血等不良反應(yīng)。甾體類抗炎藥以激素為主，長期使用易引發(fā)醫(yī)源性身上皮質(zhì)功能亢進(jìn)、加重感染及胃潰瘍，甚至引發(fā)無菌性骨壞死等不良反應(yīng)[11-12]。因此，尋找新型抗炎藥物具有重要的現(xiàn)實意義。能引起炎癥反應(yīng)的致炎因子種類較多，包括物理性因子、化學(xué)性因子和生物性因子等，醋酸作為一種化學(xué)性致炎因子，在注射小鼠腹腔內(nèi)會引起小鼠產(chǎn)生持久、深部的疼痛，小鼠會出現(xiàn)扭體現(xiàn)象，主要用于外周鎮(zhèn)痛藥的篩選[13-14];組胺主要存在于皮膚、肺和腸黏膜的肥大細(xì)胞中，當(dāng)組織受到損傷及在炎癥反應(yīng)急性期，組胺與血管內(nèi)皮細(xì)胞受體結(jié)合后，致使內(nèi)皮細(xì)胞迅速收縮，內(nèi)皮細(xì)胞之間的連接縫隙變大，血管通透性升高[15];二甲苯是可以使炎癥介質(zhì)溶解釋放，使毛細(xì)血管通透性升高，炎性細(xì)胞浸潤，造成耳部急性滲出性炎癥水腫[16]。因此，本研究對仙鶴草采用極性分離方法得到仙鶴草醇提取部位、正丁醇提取部位、乙酸乙酯提取部位，采用醋酸扭體法、二甲苯致小鼠耳腫脹法，磷酸組胺致小鼠毛細(xì)血管通透性增加實驗，在等生粉劑量下進(jìn)行仙鶴草抗炎活性篩選。研究結(jié)果顯示，仙鶴草醇提取部位、正丁醇提取部位能減少小鼠扭體次數(shù)、抑制小鼠耳廓腫脹度，能降低小鼠毛細(xì)血管通透性增加，提示仙鶴草醇提取物、正丁醇提物可以通過抗急性炎癥達(dá)到鎮(zhèn)痛的作用，其活性成分主要集中在仙鶴草正丁醇提取物，但對其作用機制及主要抗炎活性成分有待于下一步深入研究。

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（收稿日期：2019-09-29）