基因芯片技術檢測結核分枝桿菌對利福平和異煙肼耐藥性的研究

趙立娜

【摘 要】目的：分析并研究基因芯片技術檢測結核分枝桿菌對利福平和異煙肼的耐藥性。方法：本次實驗共有58例患者體液樣本參與實驗，所有患者體液樣本均是我院2018年10月至2019年10月收治的結核病患者。對所有患者體液樣本進行基因芯片檢測，檢測患者對利福平和異煙肼的耐藥性，其中基因芯片檢測包括異煙肼的KatG和inhA基因位點和利福平的rpoB基因位點。結果：通過本次實驗可得，58例患者體液樣本中有24（41.38%）例531位點（C-T）的突變;3（5.17%）例526位點（C-G）的突變，總突變數(shù)為27（46.55%）例;58例患者體液樣本中有12（20.69%）例KatG-315（G-C）的突變;5（8.62%）例InhA-15（C-T）的突變，總突變數(shù)為17（29.31%）例。結論：基因芯片技術具有敏感的利福平和異煙肼耐藥性檢驗效果，可以快速準確的分析利福平和異煙肼的耐藥性，可以在結核分枝桿菌的耐藥性檢驗中大力推廣使用。

【關鍵詞】基因芯片技術;結核分枝桿菌;利福平;異煙肼：耐藥性

【中圖分類號】R521【文獻標志碼】A【文章編號】1005-0019（2020）07-228-01

結核分枝桿菌是一種嚴重危害人們身健康的病菌，但是目前結核分枝桿菌的抗藥性逐漸增強，具有耐藥性后會對患者的治療有消極影響，所以如何快速、準確的分析患者結核分枝桿菌的耐藥性就顯得十分重要[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次實驗共有58例患者體液樣本參與實驗，所有患者體液樣本均是我院2018年10月至2019年10月收治的結核病患者。其中共有患者58例，男性患者30例，女性患者28例;年齡分布為15-64歲，平均年齡為（39.27±12.38）歲;所使用的患者體液分別有痰液34例，傷口分泌物5例，胸泡灌洗液19例。

1.2 實驗方法

本次實驗中使用的儀器有：PCR擴增儀、微陣列芯片掃描儀 Lux-Scan10K-B、ExtractorTM36核酸提取儀、Hybset基因微陣列芯片雜交盒、基因芯片、離心機和離心干燥芯片的容器[2]。使用試劑有：核酸提取液、PCR擴增試劑1、PCR擴增試劑2、PCR擴增試劑3、洗液SSC和SDS、雜交緩沖液。實驗具體操作：痰液和胸泡灌洗液的處理方法：準備盛有痰液和胸泡灌洗液的無菌盒，并向其中加入適量的4%NaOH溶液，使用離心機進行離心后取沉淀物，并在沉淀物中加入磷酸緩沖液0.5-1.0ml，然后對所得物進行接種和培養(yǎng)[3]。傷口分泌物的處理方法：準備盛有傷口分泌物的無菌盒，并向其中加入適量的4%H2SO4溶液，對所得物靜置20min后進行接種和培養(yǎng)。將培養(yǎng)的細胞做基因芯片技術檢測，具體操作為：取大于等于1麥氏濁度的培養(yǎng)液和核算提取液置于同一試管中進行5min的震蕩，同時進行5min的水浴和1min的5000r/min離心。將所得樣品于3個試管中，分別加入適量PCR擴增試劑1、2、3，然后進行擴增。

1.3 統(tǒng)計學方法

本次實驗使用統(tǒng)計學軟件SPSS 21.0進行相關的統(tǒng)計學數(shù)據(jù)處理。

2 結果

2.1 利福平耐藥性的檢測

通過本次實驗可得，58例患者體液樣本中有24（41.38%）例531位點（C-T）的突變;3（5.17%）例526位點（C-G）的突變，總突變數(shù)為27（46.55%）例，詳見表1。

2.2 異煙肼耐藥性的檢測 通過本次實驗可得，58例患者體液樣本中有12（20.69%）例KatG-315（G-C）的突變;5（8.62%）例InhA-15（C-T）的突變，總突變數(shù)為17（29.31%）例，詳見表2。

3 討論

經(jīng)常治療結核分枝桿菌使用的藥物有利福平和異煙肼，但是結核分枝桿菌容易產(chǎn)生利福平和異煙肼的耐藥性，所以需要檢測患者體內(nèi)結核分枝桿菌的藥物耐藥性，在之前通常使用的耐藥性檢測方法是使用培養(yǎng)法為基礎的絕對濃度法或比例法，但是這兩種方法通常需要進行2-3個月的培養(yǎng)才能夠得出結果，嚴重延誤患者的用藥，對患者的生命健康具有消極意義[4]?；蛐酒夹g是指將大量的生物信息分析按照一定的序列固定在玻璃上，然后通過使用熒光標記的靶分子和探針進行結合，這樣就可以通過檢測熒光強度對雜交結果進行檢測。利福平的主要耐藥靶分子為rpoB位點，異煙肼的主要耐藥靶分子為KatG和inhA基因位點，通過對這些位點的檢驗可得出是否具有耐藥性[5]。

通過本次實驗可得，58例患者體液樣本中有24（41.38%）例531位點（C-T）的突變;3（5.17%）例526位點（C-G）的突變，總突變數(shù)為27（46.55%）例;58例患者體液樣本中有12（20.69%）例KatG-315（G-C）的突變;5（8.62%）例InhA-15（C-T）的突變，總突變數(shù)為17（29.31%）例。

綜上所述，基因芯片技術具有敏感的利福平和異煙肼耐藥性檢驗效果，可以快速準確的分析利福平和異煙肼的耐藥性，可以在結核分枝桿菌的耐藥性檢驗中大力推廣使用。

參考文獻

[1]何進偉， 張燕飛， 汪明星， et al. 利用基因芯片檢測結核分枝桿菌及其利福平耐藥性的研究[J]. 遼寧醫(yī)學雜志， 2017（6）：25-27.

[2]白雪娟， 劉銀萍， 張俊仙， et al. 應用基因芯片直接檢測結核病患者各類標本中利福平和異煙肼耐藥的價值[J]. 中國防癆雜志， 2019（2）：138-144.

[3]芮冬妹， 朱珍， 樊燕. 基因芯片技術在結核分枝桿菌對利福平敏感性檢測中的臨床價值[J]. 海南醫(yī)學， 2017， 28（22）：3714-3716.

[4]劉曉俊， 余楓華， 余云芳， et al. 宜昌地區(qū)結核分枝桿菌基因分型與成簇特征分析[J]. 中國防癆雜志， 2019（3）：308-314.

[5]王蓮芝， 張晶， 李瑩瑩，等. 三種分子診斷技術對兒童肺結核的診斷價值[J]. 中國防癆雜志， 2019（5）：546-551.