DNA微陣列芯片法檢測耐藥結(jié)核分枝桿菌的臨床應(yīng)用價值研究

孔繁慧

【摘 要】分析并研究DNA微陣列芯片法檢測耐藥結(jié)核分枝桿菌的臨床應(yīng)用價值。方法：本次實驗共有60例患者結(jié)核分枝桿菌陽性樣本參與實驗。本次實驗使用DNA微陣列芯片法對藥結(jié)核分枝桿菌利福平和異煙肼的耐藥性進(jìn)行檢驗，研究DNA微陣列芯片法和傳統(tǒng)檢驗方法的一致性。結(jié)果：兩種方法對核分枝桿菌利福平的耐藥性的檢測結(jié)果具有一致性，一致性=（6+53）/60=98.33%;兩種方法對核分枝桿菌異煙肼的耐藥性的檢測結(jié)果具有一致性，一致性=（4+55）/60=98.33%;。結(jié)論：使用DNA微陣列芯片法檢測結(jié)核分枝桿菌的耐藥性和傳統(tǒng)方法具有一致性，可以快速、簡便、準(zhǔn)確的檢測出結(jié)核分枝桿菌的耐藥性，值得在臨床醫(yī)學(xué)中大力推廣使用。

【關(guān)鍵詞】DNA微陣列芯片法;結(jié)核分枝桿菌;利福平;異煙肼;檢測

【中圖分類號】R446.5【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號】1005-0019（2020）07-078-01

我國結(jié)核流行病的普查研究表明，我國的肺結(jié)核患者耐藥性嚴(yán)重，通常治療結(jié)核分枝桿菌的方法是使用利福平和異煙肼，但是由于利福平和異煙肼的泛濫，導(dǎo)致結(jié)核分枝桿菌的耐藥性上升[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次實驗共有60例患者結(jié)核分枝桿菌陽性樣本參與實驗，所有患者結(jié)核分枝桿菌樣本均來自于我院2018年11月至2019年11月收治的結(jié)核分枝桿菌患者。其中共有患者60例，男性患者32例，女性患者28例;年齡分布為14-65歲，平均年齡為（40.19±12.57）歲。

1.2 實驗方法

本次實驗使用改良的羅氏培養(yǎng)法，使用對硝基苯甲酸記性菌種的鑒定，然后對鑒定為陽性的菌株使用濃度法進(jìn)行測驗。DNA微陣列芯片法使用的是北京博奧生物有限公司的藥物敏感檢測試劑盒，具體操作應(yīng)嚴(yán)格說明書進(jìn)行檢測。關(guān)于核酸的提取應(yīng)該在試管中加入80（l的核酸提取液，然后再使用無菌技術(shù)加入一個結(jié)核分枝桿菌落，對試管使用Extractor 36 核酸快速提取儀依次進(jìn)行為期5min的震蕩、5min的90度水浴和1min的5000r/min離心[2]。然后進(jìn)行過PCR擴(kuò)增，其中每個樣品需要設(shè)置3個孔，在其中分別加入18（lPCR擴(kuò)增試劑1、18（lPCR擴(kuò)增試劑2、18（lPCR擴(kuò)增試劑3，分別命名PCR產(chǎn)物1、PCR產(chǎn)物2、PCR產(chǎn)物3，然后依次進(jìn)行擴(kuò)增[3]。最后進(jìn)行芯片雜交，具體方法為：加熱雜交緩沖液至50度，然后在兩支試管中分別加入9（l的雜交緩沖液，將3（lPCR產(chǎn)物1和3（lPCR產(chǎn)物2進(jìn)行混合，取名為A;將3（lPCR產(chǎn)物1和3（lPCR產(chǎn)物3進(jìn)行混合，取名為B;在95度的環(huán)境中將雜交反應(yīng)的混合物加熱5min，然后進(jìn)行3min的冰浴。將13.5（l的雜交反應(yīng)的混合物中加入物質(zhì)A，最后在50度恒溫水浴中進(jìn)行120min的培養(yǎng)[4]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

本次實驗使用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 21.0進(jìn)行相關(guān)的統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢測結(jié)核分枝桿菌利福平的耐藥性

通過本次實驗可得，兩種方法對核分枝桿菌利福平的耐藥性的檢測結(jié)果具有一致性，一致性=（6+53）/60=98.33%;DNA微陣列芯片法檢驗核分枝桿菌利福平的靈敏度=6/7=85.71%，特異度=53/53=100%，詳見表1。

2.2 兩種方法檢測結(jié)核分枝桿菌異煙肼的耐藥性

通過本次實驗可得，兩種方法對核分枝桿菌異煙肼的耐藥性的檢測結(jié)果具有一致性，一致性=（4+55）/60=98.33%;DNA微陣列芯片法檢驗核分枝桿菌異煙肼的靈敏度=4/5=80.00%;特異度=55/55=100%，詳見表2。

3 討論

針對核分枝桿菌耐藥性，通常使用的耐藥性檢測方法是使用培養(yǎng)法為基礎(chǔ)的絕對濃度法或比例法，但是這兩種方法通常需要進(jìn)行2-3個月的培養(yǎng)才能夠得出結(jié)果，嚴(yán)重延誤患者的用藥，對患者的生命健康具有消極意義，本次實驗使用的DNA微陣列芯片法通?？梢栽?-4周內(nèi)對對藥物的敏感性完成測試。同時DNA微陣列芯片法的特點是操作簡便、短暫快捷、準(zhǔn)確性高。目前快速檢驗的方法通常是利用分子生物學(xué)，WTO推薦使用線性探針，而DNA微陣列芯片法和線性探針很相似，均是通過檢測兩種抗結(jié)核一線藥物進(jìn)行研究是否耐藥的，分別為利福平的rpoB位點和異煙肼的KatG和inhA基因位點[5]。

通過本次實驗可得，兩種方法對核分枝桿菌利福平的耐藥性的檢測結(jié)果具有一致性，一致性=（6+53）/60=98.33%;DNA微陣列芯片法檢驗核分枝桿菌利福平的靈敏度=6/7=85.71%，特異度=53/53=100%;兩種方法對核分枝桿菌異煙肼的耐藥性的檢測結(jié)果具有一致性，一致性=（4+55）/60=98.33%;DNA微陣列芯片法檢驗核分枝桿菌異煙肼的靈敏度=4/5=80.00%;特異度=55/55=100%。

綜上所述，使用DNA微陣列芯片法檢測結(jié)核分枝桿菌的耐藥性和傳統(tǒng)方法具有一致性，可以快速、簡便、準(zhǔn)確的檢測出結(jié)核分枝桿菌的耐藥性，值得在臨床醫(yī)學(xué)中大力推廣使用。

參考文獻(xiàn)

[1]陳蕾， 王鳳平， 徐俊馳， et al. 非結(jié)核分枝桿菌病實驗室診斷方法分析及臨床應(yīng)用[J]. 中國實驗診斷學(xué)， 2019（6）：935-939.

[2]何進(jìn)偉， 張燕飛， 汪明星， et al. 利用基因芯片檢測結(jié)核分枝桿菌及其利福平耐藥性的研究[J]. 遼寧醫(yī)學(xué)雜志， 2017（6）：25-27.

[3]楊敏， 于潞， 吳長新， et al. 高分辨率熔解曲線檢測結(jié)核分枝桿菌對利福平耐藥性研究[J]. 中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志， 2019（3）：161-164.

[4]羅晶晶， 于霞， 馬異峰，等. 高強(qiáng)度熒光分枝桿菌噬菌體Φ2GFP10檢測結(jié)核分枝桿菌對抗結(jié)核藥物耐藥性的價值[J]. 中華結(jié)核和呼吸雜志， 2017， 40（10）：755-759.

[5]翁繩鳳， 李寧， 邢俊蓬， et al. Xpert MTB/RIF檢測結(jié)核分枝桿菌及利福平耐藥性的應(yīng)用價值研究[J]. 分子診斷與治療雜志， 2019（3）：229-232.