糞便SDC2基因甲基化檢測聯(lián)合結(jié)腸鏡在早期結(jié)直腸癌篩查中的意義

伍文 李錦 梁霞

結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是我國比較常見的消化道惡性腫瘤，其發(fā)病率和病死率呈現(xiàn)快速增長趨勢［1］。CRC新發(fā)病例約占全部惡性腫瘤的10%，CRC死亡病例約占全部惡性腫瘤死亡病例的10%［2］。CRC的轉(zhuǎn)歸及預后與病變分期緊密相關(guān)，在我國早期CRC的診斷比例較低，大多數(shù)CRC患者確診時已處于中晚期［3］。CRC不能早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早干預是不能提高生存率的主要原因［4］。本研究采用糞便SDC2基因甲基化檢測聯(lián)合結(jié)腸鏡對早期CRC進行篩查，旨在明確其對CRC篩查的意義。

1 資料與方法

1.1 研究對象 隨機選擇2018年1月—2019年10月本院1 000例體檢者作為研究對象，其中男性715例，女性285例；年齡50～85歲，平均（72.2±18.6）歲。排除既往確診CRC者、炎癥性腸炎患者以及近1個月有肉眼血便者。

1.2 倫理學 本研究符合醫(yī)學倫理學要求，經(jīng)本院倫理委員會批準（審批號：S2020-01-01-05），所有對患者的檢測均已獲得過患者或家屬的知情同意。

1.3 檢測方法

1.3.1 儀器與試劑 XZ-5醫(yī)用低速離心機（長沙湘智離心機儀器有限公司提供），F(xiàn)YL-YS-128醫(yī)用冰箱（北京福意聯(lián)醫(yī)療設備有限公司提供），血漿SEPT9基因甲基化檢測試劑盒由赫澎（上海）生物科技有限公司提供，糞便SDC2基因甲基化檢測試劑盒由廣州市康立明生物科技有限責任公司提供。

1.3.2 樣本采集 ① 血漿標本：于早晨 6：00 — 9：00采集所有研究對象空腹肘靜脈血5 mL，以3 500 r/min（離心半徑為13.5 cm）離心30 min，離取血漿，置于-20 ℃醫(yī)用冰箱，保存?zhèn)溆?。?糞便標本：用采樣桿采集4.5 g新鮮糞便置于收集管，完全浸泡于20 mL采集液中，密封收集管，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 基因檢測 糞便SDC2基因甲基化檢測和血漿SEPT9基因甲基化檢測均嚴格按照試劑盒說明書操作，其主要步驟包括裂解、DNA結(jié)合、DNA洗滌、DNA洗脫、亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化、聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）檢測分析。

1.3.4 結(jié)腸鏡檢測 對糞便SDC2基因甲基化和血漿SEPT9基因甲基化檢測任一結(jié)果為陽性者再行結(jié)腸鏡檢查，在檢查之前患者應先服用聚乙二醇和電解質(zhì)清潔腸道，患者一般采取屈膝屈髖側(cè)臥位，使用潤滑劑潤滑肛門和結(jié)腸鏡（CV-170奧林巴斯電子胃腸鏡系統(tǒng)），經(jīng)肛門緩緩插入結(jié)腸鏡循腸道進鏡，在進鏡過程中注入少量空氣擴張腸腔。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以例（率）表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種基因甲基化檢測陽性率比較 1 000例篩查對象中，糞便SDC2基因甲基化檢測的陽性率為 18.10%（181/1 000），明顯高于血漿 SEPT9基因甲基化檢測〔9.80%（98/1 000）〕，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表 1。

表1 糞便SDC2基因與血漿SEPT9基因甲基化檢測的陽性率比較

2.2 兩種基因甲基化檢測聯(lián)合結(jié)腸鏡篩查陽性率比較 1 000例篩查對象中，糞便SDC2基因甲基化檢測聯(lián)合結(jié)腸鏡對進展性腺瘤和CRC的陽性率均明顯高于血漿SEPT9基因甲基化檢測聯(lián)合結(jié)腸鏡，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。見表2。

表2 糞便SDC2基因與血漿SEPT9基因甲基化檢測聯(lián)合結(jié)腸鏡篩查的陽性率比較

3 討論

近年來，隨著我國國民經(jīng)濟的發(fā)展，人民生活習慣及飲食結(jié)構(gòu)日益西方化，CRC發(fā)病率總體呈現(xiàn)上升趨勢，現(xiàn)已成為消化系統(tǒng)發(fā)病率首位的惡性腫瘤，致死率較高［5］。CRC早期無明顯的典型臨床表現(xiàn)，病程發(fā)展較慢，早期診斷缺乏有效手段，大部分患者出現(xiàn)明顯癥狀就診時已處于中晚期，對于中晚期CRC或有遠處轉(zhuǎn)移的患者，手術(shù)根治和化療治療效果較差。CRC的病死率僅次于肝癌和肺癌，嚴重威脅我國人民的生命健康，給患者帶來沉重的經(jīng)濟負擔［6-7］。目前我國CRC的5年生存率遠低于歐美各國，如何降低我國CRC的病死率和發(fā)病率已成為亟待解決的問題，而加強CRC早期篩查也已成為防治CRC的關(guān)鍵手段［8］。對CRC高危人群的早期篩查和診斷主要依賴于結(jié)腸鏡，但是結(jié)腸鏡操作復雜，且患者要承受一定的痛苦，因此該項檢查作為早期篩查CRC高危人群的首選手段接受程度較低，用于CRC的早期篩查和診斷較難實現(xiàn)［9］。

近年來臨床研究表明，DNA甲基化是CRC發(fā)生發(fā)展中的一個重要早期事件，因此DNA異常甲基化可以作為CRC早期診斷的分子標記物［10］。SDC2甲基化和SEPT9甲基化基因是研究比較成熟并被證實具有較好檢測性能的兩個CRC甲基化標記物［11-12］。SEPT9可通過Rho信號通路影響腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，促進CRC癌變的過程［13］。SEPT9基因甲基化檢測是當前CRC篩查應用較為廣泛的方法，具有操作簡便和非侵入性等優(yōu)點，對早期CRC的發(fā)現(xiàn)具有重要應用價值，但仍存在靈敏度不足等缺陷。SDC2基因參與細胞分裂和遷移，在結(jié)腸間充質(zhì)細胞中表達，據(jù)報道，CRC組織中SDC2目標區(qū)域的甲基化水平要顯著高于成對相鄰非CRC組織中的SDC2目標區(qū)域，因此，SDC2基因甲基化改變可作為CRC早期診斷和預后分析等方面的腫瘤標志物［14］。本研究結(jié)果顯示，糞便SDC2基因甲基化檢測陽性率高于血漿SEPT9基因甲基化檢測；糞便SDC2基因甲基化檢測聯(lián)合結(jié)腸鏡對CRC和進展性腺瘤的檢出率均明顯高于血漿SEPT9基因甲基化檢測聯(lián)合結(jié)腸鏡。

有研究顯示，我國國民的CRC篩查率低于50%，腸鏡受檢率低于15%［15-16］?；颊邔o創(chuàng)采集糞便進行SDC2基因甲基化檢測的依從性明顯高于有創(chuàng)采集外周血進行SEPT9基因甲基化檢測，無創(chuàng)的糞便SDC2基因甲基化檢測作為一種高靈敏度的CRC篩查技術(shù)，能夠有效避免盲目大規(guī)模腸鏡篩查帶來的弊端和可行性較差等缺點，同時提高腸鏡檢查陽性率，節(jié)約了醫(yī)療資源。本研究顯示，糞便SDC2基因甲基化檢測聯(lián)合結(jié)腸鏡對CRC和進展期腺瘤的靈敏度明顯高于血漿SEPT9基因甲基化檢測聯(lián)合結(jié)腸鏡。

綜上所述，糞便SDC2基因甲基化檢測是一種簡單無創(chuàng)的CRC篩查新技術(shù)，聯(lián)合結(jié)腸鏡使用對CRC和進展性腺瘤的檢出率明顯高于血漿SEPT9基因甲基化檢測聯(lián)合結(jié)腸鏡，且該檢查僅需無創(chuàng)采集糞便即可進行，相比抽血檢測患者接受程度更高。因此糞便SDC2甲基化檢測聯(lián)合結(jié)腸鏡可作為CRC早期篩查的首選策略。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突