不育男性生殖道沙眼衣原體感染對(duì)精子核DNA碎片化指數(shù)的影響

盧奮堅(jiān)，溫子娜，董梅，段禮，賈紅軍，鐘影

（成都市錦江區(qū)婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)中心男科實(shí)驗(yàn)室，四川 成都610016）

沙眼衣原體（Chlaydia trachomatis，CT）是導(dǎo)致生殖道感染的常見病原體,是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生的原核細(xì)胞微生物，其脂多糖(LPS)成分可以整合到宿主的上皮細(xì)胞壁上成為其組成部分。沙眼衣原體生長(zhǎng)期中有兩種發(fā)育形式，即始體和原體，其中原體有很強(qiáng)的感染力,存在于宮頸、尿道分泌物、精液等易感宿主細(xì)胞內(nèi)，主要通過親密接觸、性交及直接的體液交換來傳播[1]。研究表明，生殖道沙眼衣原體感染率與急性附睪炎及慢性前列腺炎有十分密切的關(guān)系,由于附屬性腺的感染是引起男性不育的因素之一,因此沙眼衣原體與男性不育有關(guān)[2,3]。

精子核DNA碎片化指數(shù) (DNA fragmentation index，DFI)反映了遺傳物質(zhì)DNA的損傷程度,檢測(cè)精子DFI對(duì)預(yù)測(cè)精子的受精能力、受精卵的分裂和胚胎的正常發(fā)育有重要的意義[4]。沙眼衣原體感染是導(dǎo)致男性不育的因素之一,但有關(guān)其對(duì)精子DFI的影響的報(bào)道還不多，本文旨在探討不育男性生殖道沙眼衣原體感染對(duì)精子核DNA碎片化指數(shù)的影響。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 感染組：117例擬診男性不育患者，并伴有沙眼衣原體屬感染，年齡25～45歲。對(duì)照組：體檢正常的男性92例，年齡25～45歲，均生育過 1～2名健康孩子。

1.2 研究方法

1．2.1儀器與試劑計(jì)算機(jī)輔助精子分析系統(tǒng)(SCA,西班牙),流式細(xì)胞儀(FCAS Calibur,美國(guó)BD），精子核完整性染色試劑盒(浙江星博)，沙眼衣原體核酸測(cè)定試劑盒(上海之江)。

1．2.2 精液常規(guī)檢測(cè) 禁欲 2～7d，手淫法采集精液，置于37℃恒溫箱內(nèi),液化后按照《WHO人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)（第五版）》進(jìn)行精液常規(guī)檢測(cè)。

1.2 ．3沙眼衣原體檢測(cè)采用熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（QPCR）法檢測(cè)沙眼衣原體的特異性DNA核酸片段。

1.2.4 精子核DNA完整性檢測(cè)SCSA法，即采用低pH緩沖液對(duì)精子核進(jìn)行處理，吖啶橙染色。吖啶橙可與精子核DNA完整的雙鏈DNA結(jié)合呈單體形式發(fā)出綠色熒光，與精子核DNA受損傷的單鏈DNA結(jié)合呈聚合物形式發(fā)出紅色熒光。通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)紅、綠熒光信號(hào)，結(jié)合軟件計(jì)算，精子核DFI值描述為紅色/（紅色+綠色）熒光強(qiáng)度×100%，即受損傷的精子占總精子數(shù)的比例。

1.2 ．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。感染組與對(duì)照組精液常規(guī)參數(shù)及DFI值分析采用t檢驗(yàn),以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

感染組的精子濃度（106/ml）低于對(duì)照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.50）；感染組的前向運(yùn)動(dòng)精子百分比（PR）（%）低于對(duì)照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.20）；與對(duì)照組相比，感染組的精子 DFI值顯著升高（P＜0.05），見表 1。

3 討論

表1 感染組與對(duì)照組的比較

大量的研究表明，精子核DNA完整性會(huì)影響精子的受精能力、受精后原核的形成、胚胎著床及子代的健康。環(huán)境污染、疾病、吸煙、生殖道感染等多種因素均可導(dǎo)致精子核DNA損傷。在生殖道感染中,沙眼衣原體是引起性傳播疾病最常見的一種病原體，其對(duì)生殖健康影響較大[5]。2008年一項(xiàng)美國(guó)的研究表明,在15歲到39歲的人群中，沙眼衣原體感染的患病率達(dá)到14.69%[6]。本研究顯示，生殖道感染沙眼衣原體的男性不育患者的精子核DNA損傷程度顯著高于未感染者。

精子核DNA損傷機(jī)制主要包括氧化應(yīng)激反應(yīng)、凋亡機(jī)制和染色質(zhì)組裝，其中氧化應(yīng)激反應(yīng)是導(dǎo)致精子核DNA損傷的主要因素[7]。精子DNA損傷程度高的患者，自然生育的能力顯著下降，甚至為零[8]。1999年Evenson等最早應(yīng)用DFI來評(píng)價(jià)男性生育潛能，認(rèn)為DFI在0～15%具有高生育潛能，16%～29%具有中生育潛能，30%～79%具有低生育潛能，80%～90%無生育能力[9]。

目前,沙眼衣原體影響精子質(zhì)量的機(jī)制還不十分明確。Gimenes[10]指出，男性生殖系統(tǒng)沙眼衣原體的感染會(huì)降低精子質(zhì)量,影響精子的游走和定植能力。研究表明，男性生殖系統(tǒng)感染對(duì)精液常規(guī)參數(shù)和精子核DNA損傷都有影響，生殖系統(tǒng)感染的排查對(duì)男性不育有重要的診斷價(jià)值[11]。Satta等的研究揭示男性生殖道沙眼衣原體感染者的精子膜磷脂酰絲氨酸和精子核DNA完整性發(fā)生改變，引起精子凋亡增加[12]。本研究通過SCSA試驗(yàn)對(duì)生殖道沙眼衣原體感染組和對(duì)照組的精子核DNA完整性進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)感染組的DFI值明顯高于對(duì)照組，證實(shí)感染組的精子核DNA損傷更嚴(yán)重。

綜上所述,精子核DNA損傷與男性不育密切相關(guān)。生殖道沙眼衣原體感染的男性不育患者的精液常規(guī)參數(shù)與未感染者相比無顯著差異,但精子核DNA損傷程度明顯高于未感染者。因此,精子核DNA碎片化指數(shù)可能是評(píng)估男性精液質(zhì)量的獨(dú)立指標(biāo)，其與精液常規(guī)參數(shù)相結(jié)合，對(duì)男性生育力的評(píng)估有重要臨床價(jià)值。